HPLC 法同時測定復方阿托伐他汀鈣分散片中2組分含量

袁如彩，邵珠民，姬懷雪，王福貴#，邵茜（.徐州醫學院附屬醫院藥劑科，徐州市00；.徐州醫學院藥學院，徐州市 004）

氨氯地平（Amlodipine）系二氫吡啶類鈣拮抗藥，其選擇性抑制鈣離子跨膜進入平滑肌細胞和心肌細胞，對平滑肌的作用強于心肌；絕對生物利用度為64%～90%，不受飲食影響，適用于治療高血壓以及心絞痛，尤其是非勞力性心絞痛[1]。在國家藥品標準[2]和文獻[3，4]報道中，苯磺酸氨氯地平片的含量測定主要采用高效液相色譜（HPLC）法。阿托伐他汀（Atorvastatin）為第2代選擇性3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（HMGCoA）還原酶抑制劑，通過抑制HMG-CoA還原酶和膽固醇在肝臟的生物合成而降低血漿中膽固醇和甘油三酯水平，是目前常用的調脂調血壓的藥物[5]，用于各型高膽固醇血癥和混合性高脂血癥治療以及冠心病和腦卒中的防治。阿托伐他汀鈣的含量測定方法已有文獻報道[6，7]。復方阿托伐他汀鈣分散片是由苯磺酸氨氯地平和阿托伐他汀鈣組成的制劑，是首個同時治療高血壓與高血脂2種不同疾病的復方制劑。為控制該復方制劑的質量，筆者根據2種成分的性質及上述文獻報道的測定方法，建立了采用HPLC法同時測定2組分含量的方法，結果表明所建立的方法簡便、靈敏、準確，可用于復方阿托伐他汀鈣分散片的含量測定。

1 儀器與試藥

HPLC儀，包括1525二元高壓梯度泵、717自動進樣器、2487雙波長檢測器（美國Waters公司）；FA1004B分析天平（上海精密科學儀器有限公司）；KS-80D型超聲波清洗機（寧波海曙科生超聲設備有限公司）；XW-80A旋渦混合器（上海醫科大學儀器廠）；UV-2401PC紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

苯磺酸氨氯地平（以下簡稱氨氯地平）對照品（批號：20090201，純度：99.8%）、阿托伐他汀鈣（以下簡稱阿托伐他汀）對照品（批號：20091201，純度：99.6%）、復方阿托伐他汀鈣分散片（批號：20090312、20100720、20101201，規格：每片含氨氯地平、阿托伐他汀分別為5、10 mg）均由某藥業有限公司提供；其他輔料均為藥用級；甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸二氫鉀、醋酸均為分析純；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters XTerra RP18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.03 moL·L－1磷酸二氫鉀溶液＝58∶42，流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：240 nm；靈敏度：2.000 AUFS；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備。精密稱取氨氯地平、阿托伐他汀對照品各適量，分別置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；經折算后得二者貯備液濃度分別為0.772 9、1.857 mg·mL－1，混勻。

2.2.2 供試品溶液的制備。取同一批號復方阿托伐他汀鈣分散片20片，精密稱定，置于干燥潔凈的研缽中充分研磨均勻，精密稱取（約相當于氨氯地平5 mg）片粉，置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇充分溶解，超聲處理10 min，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液即得。

2.2.3 輔料溶液的制備。按復方阿托伐他汀鈣分散片處方比例混合各輔料，精密稱取相當于復方阿托伐他汀鈣分散片1片所用輔料的量置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液即得。

2.3 系統適用性試驗

分別吸取對照品溶液、供試品溶液和輔料溶液適量，置于10 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，按“2.1”項下色譜條件分別進樣測定，結果氨氯地平的保留時間約為3.6 min，阿托伐他汀的保留時間約為5.8 min，輔料對主成分測定無干擾，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關系考察

準確量取“2.2.1”項下對照品溶液50、100、200、400、800 μL，分別置于不同的10 mL容量瓶中，用流動相稀釋，搖勻，得氨氯地平濃度為3.86、7.73、15.46、30.92、61.83 μg·mL－1和阿托伐他汀濃度為9.28、18.57、37.14、74.28、148.56 μg·mL－1的溶液。按“2.1”項下色譜條件分別進樣測定，分別以氨氯地平、阿托伐他汀峰面積（A）為縱坐標，濃度（c）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為：A氨氯地平＝ 59 146c+12 031（r＝0.999 9，n＝5）、A阿托伐他汀＝51 975c－21 447（r＝0.999 9，n＝5）。結果，氨氯地平、阿托伐他汀檢測濃度線性范圍分別為3.86～61.83、9.28～148.56 μg·mL－1。

2.5 精密度試驗

精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液適量，用流動相稀釋成含氨氯地平7.73 μg·mL－1、阿托伐他汀18.57 μg·mL－1的溶液，按“2.1”項下色譜條件分別連續進樣5次。結果，氨氯地平峰面積的RSD為0.49%；阿托伐他汀峰面積的RSD為0.31%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液適量，用流動相稀釋成適當濃度，在室溫下放置，分別于0、2、4、6、8、12 h進樣測定。結果，氨氯地平、阿托伐他汀峰面積的RSD分別為0.53%、0.38%，表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.7 回收率試驗

按分散片處方組成精密稱取相當于1片量的輔料共6份，每2份1組，每組分別按照氨氯地平/阿托伐他汀（5 mg/10 mg）的低（80%）、中（100%）、高（120%）濃度加入“2.2.1”項下的對照品溶液，置于50 mL容量瓶中，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液；取供試品溶液適量，置于10 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，按“2.1”項下色譜條件分別進樣測定，結果見表1（表中“氨”指氨氯地平，“阿”指阿托伐他汀）。

表1 回收率試驗結果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（sn＝6）

2.8 樣品的含量測定

取3批樣品各1份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件分別進樣測定氨氯地平、阿托伐他汀的含量。結果，3批樣品中以氨氯地平計算，分別為標示量的99.8%、98.7%和98.9%；以阿托伐他汀計算，分別為標示量的102.1%、101.3%和101.5%。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

分別取氨氯地平、阿托伐他汀對照品適量，用甲醇溶解并稀釋，進行紫外掃描，結果氨氯地平在238、360 nm波長處均有最大吸收，阿托伐他汀在245 nm波長處有最大吸收；根據紫外吸收峰的高低和分散片中氨氯地平5 mg和阿托伐他汀10 mg的處方組成情況，最終選擇240 nm作為檢測波長，結果優于文獻[4]報道的測定波長237nm。

3.2 流動相的選擇

文獻[4]選擇用磷酸調pH＝2.5的磷酸鹽緩沖液組成流動相，文獻[6]選擇pH為8.5的磷酸鹽緩沖液組成流動相，但pH值較低或較高都對色譜柱損害較大。也有文獻[7]選擇醋酸調pH的醋酸鹽緩沖液，但醋酸易揮發使流動相的pH值不穩定，影響色譜峰的位置。最終，筆者選擇0.03 moL·L－1磷酸二氫鉀溶液為流動相的水相，測得其pH值約為4.8，分離結果較理想。

筆者曾選擇甲醇-水、乙腈-0.05%醋酸、乙腈-磷酸鹽緩沖液等作為流動相系統進行試驗，并調節各成分的不同比例。結果，乙腈-0.03 moL·L－1磷酸二氫鉀（58∶42）作為流動相系統，色譜峰形較好，2組分完全分離，且片劑輔料不干擾2組分的分析。

本試驗結果表明，所建立的同時測定復方阿托伐他汀鈣分散片中2組分含量的方法，可較好地控制該分散片的質量。

[1] 李家泰.臨床藥理學[M].第3版.北京：人民衛生出版社，2007：1 363.

[2]WS1-（X-010）-2001Z，苯磺酸氨氯地平片國家藥品標準[S].2001：869.

[3] 汪正宇.苯磺酸氨氯地平片的HPLC測定[J].安徽醫藥，2006，10（8）：581.

[4] 李成平，嚴小平，單偉光.苯磺酸氨氯地平片劑含量的高效液相色譜法測定[J].藥物分析雜志，2006，26（12）：1 878.

[5] 楊嬌妹，曾德明.阿托伐他汀治療急性冠狀動脈綜合癥的療效分析[J].現代生物醫學進展，2008，8（2）：317.

[6] 封宇飛，劉志鶴，吳學軍，等.毛細管區帶電泳法測定阿托伐他汀鈣片的含量及降解產物[J].中國藥學雜志，2003，38（6）：456.

[7] 李文莉，鐘慶元，文 慶.HPLC法測定阿托伐他汀鈣膠囊的含量及有關物質[J].藥物分析雜志，2007，27（2）：267.