pH 值對右旋布洛芬體外透皮性能的影響研究

劉麗清，于秋菊，謝茵，任國蓮，石恩嫻，田青平（山西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，太原市030001）

右旋布洛芬（DI）是一種具有很強(qiáng)抗炎、鎮(zhèn)痛和解熱作用的非甾體類抗炎藥，口服可引起惡心和潰瘍等胃腸道不良反應(yīng)，透皮給藥是可以克服其毒副作用的有效手段[1]。藥物的理化性質(zhì)是影響其透皮性能最重要的因素[2]。大多數(shù)藥物的透皮性能可由其理化性質(zhì)推測[3]，而影響藥物透皮速率的重要理化參數(shù)（溶解度、表現(xiàn)油水分配系數(shù)、離子化程度）可通過制劑的pH值進(jìn)行調(diào)節(jié)。為此，本文研究了DI在一般皮膚溫度（32℃）下，pH值對其溶解度、表觀油水分配系數(shù)及體外透皮性能的影響，為其透皮給藥制劑的開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

DI的分子結(jié)構(gòu)圖見圖1。

圖1 DI的分子結(jié)構(gòu)圖Fig 1 Molecular structure of DI

1 儀器與材料

1.1 儀器

1200型高效液相色譜儀，包括VDW G1314B紫外-可見光譜檢測器、G1311A四元泵、G1316A柱溫箱、Agilent Chemstation色譜工作站（美國Agilent公司）；pHS-2C精密酸堿計（上海理達(dá)儀器廠）；RYJ-6A藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀（上海黃海藥檢儀器廠）。

1.2 試藥

DI對照品（湖北百科亨迪藥業(yè)有限公司，二級，純度：99.6%，有關(guān)物質(zhì)含量：0.09%，左旋體含量：0.85%，符合DI對照品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定）；甲醇和乙腈為色譜純，無水乙醇、聚乙二醇、1，2-丙二醇、正辛醇、醋酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀均為分析純。

1.3 動物

豚鼠，♀♂各48只，體重（300±50）g，由山西省藥品檢檢所提供，合格證號：SCXK（晉）100525。

2 方法與結(jié)果

2.1 分析方法的建立

2.1.1色譜條件。色譜柱：Venusil MP C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相[4，5]：0.1 mol·L－1的醋酸鈉溶液（冰醋酸調(diào)節(jié)pH至4.38）-乙腈（40∶60，V/V）；檢測波長：263 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。在上述條件下，DI的保留時間為9.98 min左右，柱效不低于5 000，且空白輔料不干擾藥物的測定。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密稱取105℃干燥至恒重的DI對照品0.020 3 g，用流動相溶解并定容至50 mL，得濃度為406.0μg·mL－1的DI貯備液。精密量取DI貯備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。按濃度由低到高取20μL進(jìn)樣分析，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（c）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：A＝1.527c+67.163（r＝0.999 8，n＝6）。結(jié)果表明，DI在 20.30～203.0 μg·mL－1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.3 回收率試驗(yàn)。在線性范圍內(nèi)制備低、中、高3個濃度的DI溶液，分別加入已知濃度為100 μg·mL－1的DI樣品溶液，按照“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，各平行測定3次。結(jié)果表明，測得DI的低、中、高3個濃度的回收率分別為101.0%、99.97%、100.2%。

2.1.4 精密度試驗(yàn)。在線性范圍內(nèi)制備低、中、高3個濃度的DI溶液，于日內(nèi)分別進(jìn)樣5次，計算日內(nèi)RSD；同法每日測定1次，連續(xù)測定5 d，計算日間RSD。結(jié)果，DI的日內(nèi)RSD＜0.64%，日間RSD＜1.26%。

2.2 平衡溶解度的檢測與接收液的確定

取蒸餾水和pH分別為5.0、6.8、7.4、8.0、9.0的磷酸鹽緩沖液（PBS）各5 mL，加入過量的DI，超聲使藥物不再溶解。將溶液置于（32±1）℃恒溫水浴中，磁力攪拌，使溶液中始終保持有固體藥物存在。平衡72 h后，離心取上清液，用0.45μm微孔濾膜保溫濾過后，取續(xù)濾液0.5 mL至10 mL容量瓶中，并用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，進(jìn)樣20μL，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算DI在各種溶媒中的平衡溶解度。結(jié)果表明，DI為水難溶性羧酸類非甾體類抗炎藥，32℃時在水中的平衡溶解度僅為22.9μg·mL－1。在PBS中由于鹽效應(yīng)的影響，DI生成鉀鹽，其平衡溶解度較水中提高了10～200倍。當(dāng)pH＜7.4時，DI的平衡溶解度隨pH增大而增大；pH＞7.4時出現(xiàn)異常，原因可能是同離子效應(yīng)。DI生成鉀鹽的溶度積常數(shù)為Ksp＝[K+]×[B－]，依據(jù)2010年版《中國藥典》PBS的配制方法，在上述各PBS中，pH＝7.4時K+最少，所以相應(yīng)的其平衡溶解度最大。為滿足漏槽條件，本實(shí)驗(yàn)采用pH7.4的PBS為接收液。DI在不同pH的PBS中的平衡溶解度比較見圖2。

圖2 DI在不同pH的PBS中的平衡溶解度比較（n＝3）Fig 2 Equilibrium solubility of DI in different pH of PBS（n＝3）

2.3 表觀油水分配系數(shù)的檢測

取適量DI溶于已被水飽和過的正辛醇中，制成DI的正辛醇溶液。精密量取該溶液2 mL，置于具塞試管中，分別加入被正辛醇飽和過的蒸餾水和pH分別為5.0、6.8、7.4、8.0、9.0的PBS 8.0 mL后，放入振蕩器中，溫度保持（32±1）℃，避光振搖24 h，離心，取下層水溶液進(jìn)樣20μL，檢測藥物在水相中的濃度（cw）；另取上層液稀釋10倍，進(jìn)樣20μL，檢測藥物在油相中的濃度（co）。按公式計算DI的表觀油水分配系數(shù)（P），P＝（co×Vo）/（cw×Vw），式中Vw為水相的體積，Vo為正辛醇相的體積。結(jié)果表明，32℃時，DI在正辛醇/水體系中的lgP為3.84，與文獻(xiàn)[6]報道3.97的結(jié)果較為接近。DI的正辛醇溶液在不同pH的PBS中的表觀油水分配系數(shù)曲線圖見圖3。

圖3 DI的正辛醇溶液在不同pH的PBS中的表觀油水分配系數(shù)曲線圖（n＝3）Fig 3 Apparent oil-water partition coefficients curves of n-octyl alcohol of DI in different pH of PB（Sn＝3）

由圖3可知，pH對DI表觀油水分配系數(shù)的影響規(guī)律與平衡溶解度相似，lgP隨DI在水相中平衡溶解度的增大而減小，在pH7.4時，出現(xiàn)極小值，但在pH9.0時達(dá)到最小。原因是相對于相同的正辛醇油相來說，pH9.0的PBS的極性較pH7.4時大，使更多的有機(jī)DI分子被萃取到油相中。

2.4 體外透皮試驗(yàn)

表1 DI在不同pH的PBS中的體外滲透動力學(xué)參數(shù)比較（n＝5）Tab 1 In vitro transdermal permeation kinetic parameters of DI in different pH of PB（Sn＝5）

由表1和圖4可知，當(dāng)pH＝7.4時，DI的Js和Ps都達(dá)到最大。藥物透皮是一個溶解、擴(kuò)散的過程，藥物的平衡溶解度大，則皮膚兩側(cè)的濃度梯度增大，通透率增大。從圖2和表1結(jié)果可以算出，DI在pH7.4的PBS中的平衡溶解度是pH5.0時的22.5倍，而Js增加了近13倍，Ps只增加了4倍；DI在pH7.4的PBS中的平衡溶解度較pH9.0時增加了0.25倍，而Js卻減小了0.8倍，Ps減小了0.4倍。

圖4 DI在不同pH的PBS中的Js、Ps曲線圖Fig 4 Jsand Pscurves of DI in different pH of PBS

3 討論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，pH7.4時DI有較高的溶解度、脂溶性及較理想的皮膚通透性。pH對DI體外透皮性能有很大影響，調(diào)節(jié)制劑pH使藥物維持較高的平衡溶解度和脂溶性，可望獲得理想的皮膚通透性。

[1] Brain KR，Green DM，Dykes PJ，et al.The role of menthol in skin penetration from topical formulations of ibuprofen 5%in vivo[J].Skin Pharmacol Physiol，2006，19（1）：17.

[2] 鄭俊民.經(jīng)皮給藥新劑型[M].第1版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：313.

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