血清DcR3水平與胃癌的關系

林尤恩 劉祖宏 陳尤佳 鄭趙利 (揭陽市人民醫院化療介入科，廣東 揭陽 5000)

誘捕受體3(decoyreceptor3，DcR3)是最近研究發現的一類腫瘤壞死因子受體 (TNFR)，某些蛋白配體與DcR3特異性結合后，導致配體不能夠與死亡受體結合，促使腫瘤細胞不能誘導凋亡〔1〕。研究發現，人類多種惡性腫瘤與DcR3蛋白的表達有關。關于DcR3在胃癌的表達，國內外研究比較少，且多采用免疫組化法〔2〕。本研究采用酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)檢測患者血清DcR3的水平，探討DcR3與胃癌增殖、發生和轉移關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2009年1月至2010年12月我院收治經病理組織學檢測確診的胃癌患者70例作為研究組，男性42例，女性28例，年齡24～76歲，平均(52.4±16.7)歲，＞60歲43例，＜60歲的27例。腫瘤＞5 cm 39例，＜5 cm 31例。胃癌診斷按照2000年WHO分類標準分為低分化腺癌28例、印戒細胞癌6例、黏液腺癌12例定義為低分化組;管狀腺癌24例定義為高分化組。無淋巴結轉移42例，有淋巴結局部轉移28例。臨床分期按照2002年美國腫瘤聯合會(AJCC)制定的TNM分期法分為Ⅰ期13例，Ⅱ期26例，Ⅲ期21例，Ⅳ期10例。另選擇正常健康體檢人群65例，年齡25～75歲，平均(51.3±15.6)歲。

1.2 方法 對所有患者檢測DcR3。檢測的方法:所有患者入院后次日，空腹采外周靜脈血5 ml，室溫靜置取上層血清，分裝在－80℃冰箱冷凍備用。ELLSA法檢測Human DcR3 ELISA試劑盒購自上海研鑫生物科技有限公司。實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作。按比例配制試劑稀釋液、洗滌緩沖液等，倍比稀釋標準蛋白，按順序將已稀釋的血清樣本和各濃度標準蛋白分別加入對應孔中，滴入生物素-結合物，室溫孵育120 min，洗板后滴入抗生物素蛋白鏈菌素-辣根過氧化物酶，室溫孵育60 min，洗板，加入四甲基聯苯胺，室溫避光10～20 min，加入終止液，以630 nm和450 nm雙波長用酶標儀測量吸光值，根據標準曲線，計算出各樣本孔濃度值，乘以稀釋倍數測出所有患者血清DcR3水平〔3〕。

1.3 統計學分析 采用SPSS 17.0統計學軟件。計量資料以±s表示，采用t檢驗;計數資料采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 研究組和對照組血清DcR3的比較 胃癌患者血清DcR3〔(183.43±78.45)pg/ml〕的水平顯著高于正常人〔(116.65±97.43)pg/ml〕，差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 胃癌患者血清DcR3與胃癌相關因素的關系 胃癌患者血清DcR3與腫瘤患者TNM分期、淋巴轉移與分化程度密切相關(P＜0.05);與年齡、性別及腫瘤大小不相關(P＞0.05)。見表1。

表1 胃癌中DCR3的表達與病理因素的關系

3 討論

胃癌是我國常見的惡性腫瘤之一，發病率比較高，目前公認的胃癌的治療方法為手術治療，但研究表明術后5年生存率僅為55%左右，胃癌患者治療失敗的主要原因是腫瘤的轉移和浸潤〔4，5〕。胃癌組織結構、細胞形態和生物學行為比較復雜，組織學分型也比較多〔6〕。目前臨床上術前依靠腹部超聲、CT、X線鋇餐等影像學以及纖維胃鏡檢查診斷淋巴結和臨近臟器轉移及腫瘤浸潤深度，但是準確率并不高，大多數患者僅僅在術后通過病理學檢查證實。組織病理學檢查作為腫瘤診斷的重要手段，但是其存在有一定的主觀性〔7，8〕。對于胃癌早期診斷，目前缺少有效的檢測方法。

DcR3為腫瘤壞死因子受體(TNFR)家族新成員，與TNFR基因超家族成員有同源性的表達序列標簽，能和腫瘤壞死因子超家族成員Fas配體、TLlA以及LIGHT相結合，抑制其與受體LTβR和HVEM/TR2的特異性結合，對它們介導的細胞凋亡起負調控的功能。DcR3由271個氨基酸組成。由于缺乏跨膜序列，因此屬于分泌性蛋白分子〔9～11〕。一方面DcR3可以與凋亡因子FasL特異性結合，使惡性腫瘤細胞避免FasL依賴的細胞毒作用，從而阻斷腫瘤細胞凋亡。已有研究表明，DcR3基因無論在基因水平還是在蛋白水平，在許多惡性腫瘤均出現過度表達，而在正常組織 DcR3的表達較少〔12，13〕。也有研究證實以DcR3為靶點，制作DcR3反義RNA、DcR3中和抗體、DcR3疫苗等方法，通過降低血清DcR3的表達來阻止腫瘤細胞的增殖，也從另一個方面表明了DcR3可能在腫瘤的發生發展過程中起重要作用〔14〕。

本組研究可見，胃癌患者血清DcR3的水平顯著高于正常人，可見血清DcR3對于胃癌診斷存在比較重要的意義。

本組研究證實，TNM分期高、淋巴轉移和低分化癌患者具有較高的血清DcR3水平，而年齡大小、性別及腫瘤大小血清DcR3水平表達差異不大。反映了當胃癌病情加重的情況下，血清DcR3是增高的。提示DcR3表達水平可能與腫瘤的惡性程度有關。對胃癌患者檢測血清DcR3水平，可以作為腫瘤切除是否復發、是否轉移、是否徹底的有效理論依據，進而判斷胃癌的惡性程度、病情進展。通過檢測血清DcR3水平，可以對患者更準確地進行TNM分期提供理論依據。

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