厄貝沙坦聯合缺血后處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用

畢艷穎 (長春中醫藥大學附屬醫院，吉林 長春 130021)

缺血后處理具有縮小心肌梗死面積、保護冠狀動脈內皮功能及減輕缺血心肌炎癥反應等與缺血預處理相似的心臟保護作用〔1〕。厄貝沙坦是近年臨床廣泛應用的血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)受體(AT1)拮抗劑(ARB)，抑制AngⅠ與AT1受體結合的IC50分別為0.9 nmol/L與5.5 nmol/L，而且高達10 nmol/L時對AT2仍無抑制作用，對心率、醛固酮無影響〔2〕。本研究采用在體大鼠結扎冠狀動脈前降支30 min，再灌注4 h制備實驗性心肌缺血再灌注損傷模型，觀察厄貝沙坦聯合缺血后處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用及其機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 40只Wistar大鼠，雌雄各半，體重240～260 g。

1.1.2 藥品及試劑 厄貝沙坦，南京長澳制藥有限公司，實驗時以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度;氯化硝基四氮唑藍(NB-T)由上海前進試劑廠生產;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)測定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供;6-酮-前列腺素 F1α(6-Keto-PGF1α)放免藥盒及血栓素B2(TXB2)放免藥盒由中國人民解放軍總醫院東亞免疫技術研究所提供。

1.2 方法 40只Wistar大鼠隨機分為假手術組、模型組、厄貝沙坦組、厄貝沙坦與缺血后處理聯合作用組(聯合組)，每組10只。厄貝沙坦組于結扎后立即給藥，聯合組結扎后立即給藥，阻斷 30 min，再通 30 s，阻斷 30 s，重復 3 次，再灌注 4 h;假手術組及模型組給予等體積0.5%羧甲基纖維素鈉。大鼠冠脈結扎按文獻〔3〕方法稍加改進，在乙醚麻醉下仰位固定于手術臺，自左側3～4肋間開胸，暴露心臟，于肺動脈圓錐及左心房間找出冠脈左前降支，除假手術組僅穿線不結扎外，其余各組均以0號線立即結扎冠脈，結扎時用一細小乳膠管墊于血管與結扎線之間，將心臟送回胸腔，并擠出胸腔內血液和氣體，迅速關閉胸腔，開胸時間不超過30 s。各組動物在結扎30 min后松解結扎線進行再灌注，再灌注4 h后，以戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔注射麻醉，每組動物腹主動脈插管取血，通過7150型生化自動分析儀(日本)檢測血清天冬酸氨基轉移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)和心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性;按試劑盒方法測血清MDA含量，SOD、GSH-Px活性;用放免法〔4〕測血漿前列環素(PGI2)和TXA2的代謝產物6-Keto-PG F1α和TXB2水平;腹主動脈取血 1.5 ml，以 109mmol/L枸櫞酸鈉抗凝。1 500 r/min離心 5 min，取上層富血小板血漿(PRP)，余血3 000 r/min離心10 min，取貧血小板血漿(PPP)，用PPP調PRP至血小板數6×1011/L～7×1011/L。取血后剖取大鼠心臟，用生理鹽水洗凈心腔內積血，去掉心房組織及脂肪，稱重，將左心室心肌橫切4～5片，然后浸入氯化硝基四氮唑藍(NB-T)磷酸緩沖液中，置37℃恒溫水浴，待染色完全后取出，正常組織染色，缺血組織不染色。切下缺血心肌稱重，用缺血心肌與左心室濕重的百分比計算心肌梗死范圍(MIS)。

1.3 統計學方法 應用SPSS 13.0統計軟件進行分析，數據資料以s表示，多組間均數比較采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 實驗性心肌缺血再灌注損傷大鼠MIS及心肌酶學變化 與假手術組相比，模型組大鼠的MIS及AST、LDH、CK-MB均顯著升高(P＜0.01)。與模型組比較，厄貝沙坦組與聯合組可見大鼠的MIS明顯縮小(P＜0.01)，血清AST、LDH及CK-MB活性明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)。與厄貝沙坦組比較，聯合組大鼠的MIS及血清心肌酶學均無顯著性差異(P＞0.05)。見表1。

2.2 實驗性心肌缺血再灌注損傷大鼠血清 MDA、SOD及GSH-Px變化 與假手術組相比，模型組血清 MDA含量、GSH-Px活性明顯增加，而SOD明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)。與模型組比較，厄貝沙坦組與聯合組均可見血清MDA含量顯著降低(P＜0.05)，SOD活性顯著提高(P＜0.05，P＜0.01)。與厄貝沙坦組比較，聯合組血清MDA含量及SOD及GSH-Px活性均無顯著性差異(P＞0.05)。見表2。

表1 四組MIS及心肌酶活性變化(n=10s)

表1 四組MIS及心肌酶活性變化(n=10s)

與假手術組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與模型組比較:3)P＜0.05，4)P ＜0.01;下表同

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表2 四組氧化應激指標的變化(n=10±s)

表2 四組氧化應激指標的變化(n=10±s)

組別 MDA(CB/nmol/L)SOD(ρB/mg/L)GSH-Px(λB/U/ml)假手術組6.06±1.5 269.3±29.4 43.5±10.3模型組 8.6±2.32) 224.0±25.12) 56.1±14.91)厄貝沙坦組 6.2±1.93) 262.0±35.03) 44.4±8.83)聯合組 6.2±1.73) 264.3±26.94) 39.1±14.93)

2.3 實驗性心肌缺血再灌注損傷大鼠血漿PGI2及TXA2變化 與假手術組相比，模型組血漿TXA2水平明顯升高，PGI2水平及PGI2/TXA2比值明顯降低(P＜0.05，P＜0.001)。與模型組比較，厄貝沙坦組與聯合組均可見血漿TXA2水平顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)，血漿 PGI2水平及 PGI2/TXA2比值顯著提高(P＜0.05，P＜0.01)。與厄貝沙坦組比較，聯合組血漿TXA2和 PGI2水平及 PGI2/TXA2比值均無明顯變化(P＞0.05)。見表3。

表3 各組血漿PGI2及TXA2變化(n=10±s)

表3 各組血漿PGI2及TXA2變化(n=10±s)

組別 PGI2(ρB/ng/L) TXA2(ρB/ng/L) PGI2/TXA2假手術組458.1±86.20 185.7±20.7 2.5±0.6模型組 344.5±52.42) 267.8±36.11) 1.3±0.32)厄貝沙坦組 400.6±57.73) 223.0±51.53) 1.9±0.63)聯合組 403.4±58.73) 207.2±27.24) 2.0±0.44)

3 討論

急性心肌梗死日益威脅著人類的生命，其主要的治療方法為梗死相關動脈的再灌注即急診經皮冠狀動脈介入治療(PCI)，但有時缺血心肌的再灌注損傷可能會抵消PCI所達到的效果。有研究表明，心肌缺血再灌注損傷會進一步加大MIS，其心功能障礙程度比急性心肌梗死還嚴重，病死率更高〔5〕。心肌酶存在于細胞質中，當心肌缺血再灌注損傷時細胞壞死，造成心肌細胞各種酶釋放入血。因此，血清CK-MB、LDH及AST的活性測定可用來判斷心肌缺血再灌注損傷程度及藥物抗心肌缺血再灌注損傷療效和預后的指標之一。本實驗表明，厄貝沙坦及聯合組能明顯縮小心肌缺血再灌注損傷大鼠的MIS，降低血清CK-MB、LDH及AST活性，證實其對缺血再灌注心肌具有明顯保護作用。但是厄貝沙坦組和聯合組的作用無統計學差異。

氧化應激是心肌缺血再灌注損傷的主要機制之一〔6〕。MDA是氧自由基引發脂類過氧化反應的產物，其含量反映氧自由基水平和脂質過氧化的強度和速度，是了解氧自由基致機體組織細胞損傷的重要指標之一。機體存在抗氧化防護系統，SOD及GSH-Px是主要的內源性抗氧化酶，可減少氧自由基的生成。因此可以通過MDA含量及SOD、GSH-Px活性變化評定心肌缺血再灌注損傷的程度及藥物作用的機制〔7〕。本實驗表明，厄貝沙坦及聯合組能明顯降低血清MDA含量，升高SOD活性，提示其可通過某種機制使脂質過氧化過程受到抑制，同時又能提高內源性抗氧化酶活性而減輕氧自由基對心肌的損傷，但是厄貝沙坦組和聯合組的作用無顯著差異。

心肌缺血再灌注損傷時，動脈內皮受損，循環血液中的血小板黏附在損傷部位，致使PGI2合成受干擾，進一步釋放以TXA2為主的縮血管物質，從而導致平衡失調。PGI2和TXA2的平衡是維持正常血小板功能、血管張力以及保護內皮細胞免受損傷的重要環節。因此，TXA2與PGI2的平衡失調可能是心肌缺血或心肌壞死的主要原因之一〔8，9〕。本實驗表明，厄貝沙坦組和厄貝沙坦與缺血后處理聯合應用可明顯降低血漿TXA2水平，增高PGI2水平及PGI2/TXA2比值，提示其可能通過糾正PGI2/TXA2失衡發揮抗心肌缺血再灌注損傷，但是厄貝沙坦組和厄貝沙坦與缺血后處理聯合應用的作用無統計學差異。

1 Zhao ZQ，Corvera JS，Halkos ME，et al.Inhibition of myocardial injury by ischemic postconditioning during reperfusion:comparison with ischemic preconditioning〔J〕.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2003;285(2):579-88.

2 趙學忠.福辛普利與厄貝沙坦對大鼠實驗性心肌缺血再灌注損傷及心室重構的對比研究〔D〕.吉林大學博士論文，2000.

3 睢大員，曲紹春，于小風，等.刺五加葉皂苷對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用〔J〕.中國中藥雜志，2004;29(1):71-4.

4 趙艷威，于小風，徐華麗，等.人參果皂苷注射液對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響〔J〕.吉林大學學報:醫學版，2005;31(3):407-10.

5 王 天，徐華麗，曲紹春，等.碟脈靈注射液對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用〔J〕.吉林大學學報:醫學版，2006;32(1):78-81.

6 Valko M，Leibfritz D，Moncol J，et al.Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease〔J〕.Int J Biochem Cell Biol，2007;39(1):44-84.

7 王 麗，趙學忠，于曉鳳，等.重組人腦利鈉肽對大鼠實驗性心肌缺血再灌注損傷的保護作用〔J〕.中國老年學雜志，2010;30(6):813-5.

8 黃漫翔，婓 紅，林萬蓮.葛根素對心血管系統作用的研究進展〔J〕.廣東藥學，2000;10(2):9-12.

9 羅 偉，李保東，楊瑞華，等.葛根素對高血壓患者血漿內皮素及血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α含量的影響〔J〕.中國中西醫結合雜志，2000;20(1):68-9.