艾灸關元、足三里穴對不同月齡大鼠空間學習記憶能力的影響

王淑娟 王艷杰 石星業 宮 菲 趙 胤 (遼寧中醫藥大學針灸推拿學院，遼寧 沈陽 0032)

記憶能力減退是機體早期衰老的臨床表現，也是腦老化的重要標志。Morris水迷宮是研究大鼠空間學習記憶能力的重要行為學方法。本實驗運用Morris水迷宮方法，從空間學習記憶能力方面入手，觀察保健灸法對不同月齡大鼠行為學的改善作用，為艾灸防治衰老提供科學的佐證。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 SD雌性大鼠70只，由北京維通利華有限公司提供，許可證號:SCXK(京2006-0009)青年對照組14只，3 月齡，體重190 ～250 g，10月齡28 只，體重350～450 g，隨機分為2組，即10月齡灸治組及10月齡對照組。12齡28只，體重390～450 g，隨機分為12月齡灸治組及12月齡對照組。各組動物在同等條件下常規喂養，實驗室光照充足，通風良好，溫度保持在(24±2)℃，濕度保持在40% ～60%。

1.2 實驗方法 10月齡灸治組及12月齡灸治組動物每周灸關元、足三里4次，持續灸2個月，青年組及對照組每周相同時間同樣抓取，但不灸，亦不讓其聞到灸的味道。持續2個月。

1.3 灸治的部位和方法 大鼠關元、足三里穴定位，參照大鼠標準穴位圖譜。關元位于大鼠兩后肢根部連線的中點。足三里在大鼠膝關節后外側，即脛骨粗隆下緣與腓骨小頭下緣連線之中點處。灸前將穴區直徑約1 cm左右的鼠毛剪干凈，暴露穴區皮膚。自制艾炷:底盤直徑0.7 cm，艾柱直徑0.1 cm，重1.0 g，放置于帶有小孔附雙面膠的橡皮墊上，將橡皮墊粘貼在穴區，小孔對準穴位，點燃艾炷。灸后局部皮膚略紅，無發泡。

1.4 定位航行實驗〔1，2〕水槽分東、南、西、北四個象限(NE、SE、SW、NW)，實驗前將大鼠背部栓一紅繩做標記物(計算機對紅色分辨率高)。實驗開始2個月后，開始進行定位航行實驗。

實驗第一天，水槽中不放置平臺，將大鼠放入水中180 s，自由游泳以適應環境。正式訓練時，在水槽北象限放一平臺，平臺直徑為10 cm，低于水面大約2 cm，迷宮上方安裝有顯示系統的攝像機，同步記錄大鼠運動軌跡。

第二天開始訓練，連續6 d，每天1次。訓練時隨機選擇一個入水點，將大鼠面向水槽壁放入水中，記錄大鼠找到平臺的時間(逃避潛伏期)，每次計時120 s，若120 s未找到平臺，便把大鼠放到平臺上10 s讓其熟悉，逃避潛伏期記錄為120 s。連續訓練第7天后正式測試。將大鼠背對平臺投入水槽中，記錄其尋找到平臺的潛伏期，評價動物空間記憶的獲得能力。實驗全過程要求保持安靜，水槽周圍物品固定，作為動物的空間參照物。并應及時清除水槽內大鼠糞便，以免影響實驗結果。

1.5 空間搜索實驗 定位航行實驗結束次日，撤出平臺，在隨意入水點將大鼠面向水槽壁放入水中，各組大鼠根據記憶尋找原平臺所在象限，監測時間為120 s，由計算機自動跟蹤并記錄下大鼠游泳軌跡，并計算出大鼠跨越原平臺的次數及在原平臺所在象限停留時間。評價大鼠的空間記憶保持能力。

1.6 統計學處理 采用SPSS15.0軟件包進行統計分析。計量資料以±s表示，組間均數比較用單因素方差分析。

2 結果

2.1 一般狀況觀察 10月齡對照組大鼠游泳速度較快，但運動軌跡大多為環形，在平臺所在象限游動時間短，而10月齡灸治組大鼠游泳速度快與青年組相似，運動軌跡多為直線，在平臺所在象限附近游動時間長，對面象限游動很少。12月齡對照組大鼠運動減少，反應遲緩，運動軌跡大多沿著池壁進行環繞且遠離平臺所在象限游動，12月齡灸治組大鼠游泳速度慢，運動軌跡大多沿著池壁進行環繞。

2.2 定位航行實驗 各組大鼠在6 d的水迷宮定位航行訓練中，尋找平臺的平均逃避潛伏期有明顯變化，隨著訓練次數的增加，各組潛伏期均有不同程度的縮短。各組在訓練第4天后逃避潛伏期基本趨于平穩。訓練后第7天各組大鼠逃避潛伏期時間見表1。大鼠逃避期代表認知能力，逃避潛伏期越短，學習能力越強。青年組平均逃避潛伏期的時間最短，12月齡對照組平均逃避潛伏期的時間最長，10月齡灸治組逃避潛伏期較對照組明顯縮短(P＜0.05)。而12月齡灸治組逃避潛伏期與對照組相比較無顯著性差異(P＞0.05)。

2.3 空間搜索實驗 撤去平臺后，觀察各組大鼠的空間探索能力，即尋找原來平臺所在象限，青年組的游泳軌跡基本集中在平臺象限，高齡對照組大鼠的游泳軌跡集中趨勢不明顯，各組之間比較有顯著差異(P＜0.05)。說明隨著月齡的增加，大鼠的空間搜索記憶能力明顯下降。10月齡灸治與對照組比較，通過平臺的次數及在原平臺象限時間比率，有顯著差異。而12月齡灸治與對照組比較，通過平臺的次數及在原平臺象限時間比率，未見顯著差異。說明灸法可以提高大鼠的空間搜索能力，但對于高齡的大鼠效果并不明顯。各組大鼠通過平臺的次數及在原平臺象限停留時間見表1。

表1 各組大鼠學習記憶能力的檢測(x ± s，n=14)

3 討論

《素問·陰陽應象大論》載“年四十而陰氣自半也，起居衰矣，年五十體重耳目不聰矣。”即人類從四十歲開始，體內陰精自耗過半，精力體力腦力開始呈現衰退趨勢。本實驗采用類似于人類年齡40歲(更年期前期)與50歲(更年期)相近似的10月齡及12月齡雌性自然老化大鼠為研究對象〔3，4〕。觀察評價保健灸對不同月齡大鼠在Morris水迷宮中定位航行及空間搜索試驗中的學習記憶能力的影響。以其探求預防衰老的最佳保健灸治時機。

無病而灸，又稱“逆灸”、保健灸，是未老先灸。通過在具有保健功效作用的穴位上施灸，逐漸積累灸效，以達到防病保健的目的。關元，為任脈與足三陰經的交會穴。《針灸穴名解》中稱此穴為“人身陰陽元氣交關之處，為養生家聚氣凝神之所”，聯系命門真陽，為陰中之陽穴。艾灸關元穴可補攝下焦元氣，扶助機體元陰元陽，延年益壽?！夺t學入門》載:“關元主諸虛損”。足三里，具有溫補脾胃，益氣養血，扶正培元的功效?！锻馀_秘要》云“三里養后天之氣，灸三里可使元氣不衰”。兩穴為保健灸法的常用穴，上下相配，共奏補腎健脾、益氣活血、培元固本、延年益壽之功。

學習記憶是大腦的高級神經活動，是認知活動的組成部分，學習是接受外界環境的信息而影響自身行為的過程，記憶是對獲得的信息在腦內進行儲存、加工和提取的過程〔5〕，可分為記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現。Morris水迷宮實驗是20世紀80年代初建立起來的評估嚙齒動物學習、記憶、空間定向及認知功能的可靠試驗方法。主要包括定位航行試驗和空間探索實驗兩部分。是檢測大鼠在多次訓練后，學會尋找固定位置隱蔽平臺，形成穩定的空間位置認知的能力。大鼠與人類一樣隨著年齡的增長，會出現學習記憶能力的減退〔6〕，大鼠逃避潛伏期可反映大鼠尋找安全平臺的空間認知能力，而大鼠在水迷宮中定位游泳尋找平臺所在象限及在平臺穿越的次數，可以反映大鼠的空間記憶能力。本實驗結果客觀地證實了艾灸關元、足三里穴可以提高不同月齡大鼠的學習及記憶能力，以10月齡大鼠表現尤為明顯。提示灸法應提早進行。

1 韓太真，吳馥梅.學習與記憶的神經生物學〔M〕.北京:北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1998:61.

2 張均田.現代藥理實驗方法學(上冊)〔M〕.北京:北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1998:1022.

3 劉宏艷，王 濱.電針對更年期大鼠神經內分泌免疫網絡的影響〔J〕. 江蘇中醫藥，2003;24(1):94-6.

4 俞 瑾，李超荊.更年春治療更年期綜合征的臨床和藥理研究〔J〕.生殖醫學雜志，2000;9(5):266-71.

5 程 明，朱熊兆.學習記憶的行為學研究方法〔J〕.中國行為醫學科學，2005;14(1):65-6.

6 王 蓉，唐 玉，葉翠飛，等.大鼠學習記憶功能隨增齡變化的實驗研究〔J〕. 中國行為醫學科學，2006;15(3):200-1，210.