負載羥喜樹堿的納米粒子制備及其釋放性質

柳懷玉 王 斕 周小洲 韓 冰 張海鋒 才子斌 (吉林大學動物實驗中心，吉林 長春 00)

羥喜樹堿是目前我國臨床上應用較多的喜樹堿類藥物，其活性強于喜樹堿數十倍〔1〕。喜樹堿類藥物比較難溶于水〔2〕，而易溶于堿性溶液，在堿性溶液中，內酯環結構易于打開，從而形成鈉鹽;但是喜樹堿類藥物的內酯結構是發揮抗癌作用的重要結構，所以增加水溶性后療效會降低。本研究運用復乳法將羥基喜樹堿包裹于聚乳酸羥基乙酸(PLGA)中制備羥喜樹堿PLGA緩釋納米粒，從而延長羥喜樹堿發揮抗腫瘤作用的時間，提高患者的依從性和生物利用度。本文觀察羥喜樹堿PLGA納米粒的表觀形態、粒徑、載藥量、體外釋放等特性。

1 材料與方法

1.1 材料 羥喜樹堿購于上海龍翔生物科技公司;PLGA購于美國雷克少公司;二氯甲烷、乙腈等常規試劑購于天津化工;BS124S型電子天平(德國賽多麗絲公司);JY88-IIN型超聲細胞破碎儀(寧波新芝科技公司);高效液相色譜儀(德國安捷倫公司)。

1.2 方法

1.2.1 羥喜樹堿PLGA納米粒的制備 取一定量的PLGA，用有機溶液將其溶解，并向其中加入一定量的羥喜樹堿水溶液，溶解后超聲處理制備成乳狀溶液。將此溶液逐滴加入到50 ml聚乙烯醇(PVA)水溶液中，高速攪拌，之后加水稀釋，將PVA濃度控制在2%，700 r/min低速攪拌2 h。將外水相濾出，對剩余溶液進行離心，每次20 min，離心2次。最后將其濃縮后，向納米粒中加入5%的甘露醇并進行凍干。

1.2.2 納米粒的表面形貌觀測及粒徑測定 取一定量的羥喜樹堿PLGA納米粒樣品，用水溶解后用顯微鏡進行觀察，記錄表面形貌。利用粒度分析儀對納米粒的粒徑進行測定并記錄分析。

1.2.3 納米粒的載藥量測定 取5 mg納米粒樣品，將之置于10 ml離心管底部，向其中加入乙腈溶液，渦旋振蕩處理，而后利用高效液色譜儀相對羥喜樹堿進行檢測，利用上述方法對多批制備得到的羥喜樹堿PLGA納米粒分別進行載藥量的測定。

1.2.4 納米粒的體外釋放檢測 取20 mg納米粒樣品，置于10 ml離心管底部，加入5 ml pH7.0的磷酸鹽緩沖液(PBS)，封口膜封口，將離心管置于37℃的搖床中，120 r/min進行搖動，固定的時間點離心，取出4 ml上清液，其中20 ml用于液相檢測，其余棄掉，同時向離心管中補充4 ml新鮮PBS緩沖液，使釋放繼續進行。每次相應檢測時間點重復上述檢測。共對3批制備得到的納米粒樣品進行體外釋放檢測，繪制三批樣品的平均釋放曲線。

2 結果

2.1 納米粒的表面形貌及粒徑 經測定羥喜樹堿PLGA納米粒的平均粒徑為139.4 nm。制備的羥喜樹堿PLGA納米粒表觀形態完整，細小均勻。見圖1。

圖1 羥喜樹堿PLGA納米粒的表面形態

2.2 納米粒的載藥量 A、B、C三組的羥喜樹堿PLGA納米粒的平均載藥量為6.03%，各組制備的羥喜樹堿PLGA納米粒的載藥量無統計學差異(P＜0.01)。結果顯示羥喜樹堿PLGA納米粒制備的工藝重現性良好，組間差異小。見表1。

表1 A、B、C三組的羥喜樹堿PLGA納米粒載藥量結果(%)

2.3 納米粒的體外釋放 將釋放藥物累積后做百分比圖，其中橫坐標為時間，縱坐標為累計釋放百分比，納米粒的體外藥物釋放基本呈現0級釋放，釋放周期維系1個月左右。見圖2。

圖2 羥喜樹堿PLGA納米粒的藥物體外釋放曲線

3 討論

近幾年來，藥劑學的快速發展使緩釋制劑得以很好的發展，很多藥物都逐步開始了在緩釋制劑平臺的應用研究工作〔3〕。制備納米粒的材料很多，本研究采用的是新型聚合物PLGA，該材料具有良好的生物降解性、生物相容性及降解速度可調節性。PLGA同時是美國食品藥品管理局(FDA)批準的可用于注射的藥用輔料。復乳法超聲載藥納米粒相對殼聚糖、蛋白材料、脂質體材料等制備出的納米粒穩定性較好，可顯著延長納米粒的使用時間并使給藥持久體現血藥濃度，同時降低系統中藥物產生的毒性刺激性。該羥喜樹堿PLGA納米粒的體外釋放圖譜顯示在體外釋放液中，羥喜樹堿PLGA納米粒釋放平穩，藥物顯效期可長達一個月，說明該納米粒具備良好的釋放特性。本文利用復乳法成功制備了羥喜樹堿PLGA納米粒，結果表明，納米粒可以成為難溶性的喜樹堿類抗腫瘤藥物的極具潛力的給藥系統。

1 Zhou YY，Du YZ，Wang，L，et al.Preparation and pharmacodynamics of stearic acid and poly(lactic-co-glycolic acid)grafted chitosan oligosaccharide micelles for 10-hydroxycamptothecin〔J〕.Int J Pharmacol，2010;393(1):143-51.

2 Chow DS，Gong L，Wolfe MD.Modified lactone/carboxylate salt equilibria in vivo by liposomal delivery of 92nitro-camptothecin〔J〕.Ann N Y Acad Sci，2000;922:164-74.

3 Han B，Wang HT，Liu HY，et al.Preparation of pingyangmycin PLGA microspheres and related in vitro/in vivo studies〔J〕.Int J Pharmacol，2010;398(1-2):130-6.