P16 INK4A與MIB-1在宮頸癌及宮頸癌前病變中的表達(dá)

王志新，肖明明

1.遼寧省康平縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，遼寧康平 110500；2.遼寧省人民醫(yī)院病理科，遼寧沈陽 110016

宮頸癌在女性癌癥發(fā)生率中位居第二，有5%的女性患者死于宮頸癌[1]。但宮頸癌是目前唯一可以預(yù)防、早期診斷并可治愈的癌癥。宮頸細(xì)胞涂片及活組織學(xué)檢查的病理診斷，對減少宮頸癌的死亡率起著至關(guān)重要的作用[2]。但由于宮頸涂片篩查的主觀性強(qiáng)，所以該法并不是十分精確，這使得宮頸病變顯現(xiàn)出很大的篩查局限性，所以迫切需要尋找到一種特異性非典型細(xì)胞的生物標(biāo)志物，來輔助宮頸病變的篩查及診斷。P16 INK4A是一種抑癌基因，其編碼的蛋白質(zhì)能特異性地抑制CDK4的活性，阻止細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期和DNA合成的啟動，對細(xì)胞的生長周期起負(fù)性調(diào)節(jié)作用。MIB-1抗原（Ki-67抗原）是表達(dá)于增殖期細(xì)胞中的核抗原，參與細(xì)胞周期的調(diào)控。本文采用免疫組織化學(xué)方法檢測P16 INK4A與MIB-1在正常宮頸組織及宮頸病變組織中的表達(dá)情況，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

63例宮頸組織標(biāo)本取自20～70歲患者，均經(jīng)陰道鏡活檢，并做宮頸涂片。對于宮頸表達(dá)有過度出血及壞死的標(biāo)本視為不滿意標(biāo)本，不列入研究組中。組織活檢均由病理專家做出病理分級及分型。根據(jù)FIGO方法將病例分為CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌。宮頸涂片的細(xì)胞學(xué)檢查按改良的巴氏分級法分為低級別病變、高級別病變、宮頸癌。

1.2 方法

采用免疫組織化學(xué)方法對63例組織學(xué)標(biāo)本及38例細(xì)胞學(xué)標(biāo)本進(jìn)行檢測。鼠單克隆抗體TRU-P16-432（P16）、鼠抗人克隆ki-67（MIB-1）均購自中杉公司，選擇宮頸癌標(biāo)本作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

P16免疫染色彌漫均勻一致地定位于細(xì)胞核和 （或）細(xì)胞漿中，染色不均勻或局部區(qū)域細(xì)胞核陽性均定為陽性，弱陽性定為陰性。根據(jù)陽性細(xì)胞量的多少進(jìn)行染色分級，0～3級，分別對應(yīng)的陽性細(xì)胞量為 1%～10%，10%～50%，＞50%[3]。MIB-1免疫染色定位于細(xì)胞核。在宮頸鱗狀上皮中基底部陽性表達(dá)屬于正常，故把鱗狀上皮上2/3陽性被認(rèn)為是陽性表達(dá)，以陽性核所占的百分比分為Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組，分別對應(yīng)的陽性核所占百分比為 0%～10%，10%～20%，＞20%[4]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用STATA 9.2軟件包分析。兩組間均數(shù)的比較采用Kruskall Wallis test。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

在正常宮頸組織上皮細(xì)胞、化生的細(xì)胞、宮頸管內(nèi)及炎性反應(yīng)性的病變中均無P16的表達(dá)。所有宮頸上皮內(nèi)腫瘤及宮頸癌中顯示細(xì)胞核及細(xì)胞漿中陽性或局部細(xì)胞核及細(xì)胞漿陽性。從正常宮頸組織到浸潤性宮頸癌中瘤細(xì)胞P16陽性表達(dá)率逐漸增高。MIB-1表達(dá)在正常宮頸組織中位于基底層細(xì)胞。所有宮頸上皮內(nèi)腫瘤及宮頸癌中都有不同程度的陽性表達(dá)。各組間比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表1。

表1 宮頸病變組織中P16及MIB-1的表達(dá)情況（例數(shù)）

3 討論

近年來，許多生物標(biāo)志物被研究并應(yīng)用于宮頸癌及癌前病變的診斷，P16 INK4A與MIB-1也顯示了其巨大的潛在的臨床意義。P16 INK4A是一種腫瘤抑制蛋白，其只表達(dá)于非典型增生的宮頸上皮細(xì)胞中[5]。MIB-1表達(dá)于增生活躍的處于分裂期的細(xì)胞中，此類細(xì)胞在宮頸涂片中可以檢測到，通過抑制CDK4和CDK6激酶的活性，使PRb不能磷酸化，進(jìn)而導(dǎo)致未磷酸化的PRb增多，達(dá)到抑制細(xì)胞增殖的目的[6]，因此P16與MIB-1在宮頸涂片中的陽性表達(dá)，可以作為宮頸非典型細(xì)胞的標(biāo)志。單一的宮頸涂片的檢查受到敏感度欠佳、重復(fù)率低的制約，由于非典型細(xì)胞的結(jié)果，會造成很多假陰性和假陽性的結(jié)果。為了彌補(bǔ)這一不足，篩查工作就要反復(fù)的檢查，并且對陽性病例要追蹤隨診，此外對于醋白陽性的患者有可能會做一些陰道鏡活檢。因此在宮頸病變篩查中輔以生物標(biāo)志物的檢測來提高檢出率已成為必然。

有文獻(xiàn)顯示，P16在所有CINⅠ病例中均表達(dá) （n=47），在所有的CINⅡ中均表達(dá)（n=32），在所有的CINⅢ中均表達(dá)（n=60），58例宮頸鱗癌中有56例表達(dá)。在正常的宮頸上皮、炎性病變、低危HPV感染CINⅠ中無表達(dá)，與本研究結(jié)果相似。本研究免疫組織化學(xué)測定結(jié)果顯示，P16表達(dá)于CINⅠ（15/15）、CINⅡ（15/15）、CINⅢ（3/3）、宮頸癌（15/15）中，因此P16的表達(dá)可以提示宮頸上皮細(xì)胞的異常增殖；有2例低度病變在細(xì)胞學(xué)中表達(dá)陰性，但在組織學(xué)中表達(dá)陽性，提示P16在宮頸上皮內(nèi)病變中幾乎很少表達(dá)為陰性，故可以作為聯(lián)合生物標(biāo)志檢測的指標(biāo)對宮頸病變進(jìn)行篩查，P16的檢測可以減少不同觀察者間的差異性沖突，也可以減少假陰性及假陽性的干擾，很大程度上改善宮頸癌及癌前病變的篩查工作。此研究結(jié)果與Klaes等[7]報道一致。

MIB-1免疫組織化學(xué)檢測顯示在宮頸正常組織、宮頸上皮內(nèi)病變、宮頸癌中的陽性表達(dá)明顯依次增強(qiáng)，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05），而組內(nèi)差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05）。 MIB-1 抗體可以檢測 Ki67 抗原在 G1，S，G2，M 期中表達(dá)，但在G0期無表達(dá)，因此MIB-1是檢測宮頸癌及癌前病變細(xì)胞增殖性的有效指標(biāo)。本研究顯示CINⅠ（14/15）、CINⅡ（15/15）、CINⅢ（3/3）、宮頸癌（15/15），Mravunac 等[8]報道 顯示，MIB-1高的表達(dá)指數(shù)可以提示宮頸的高度病變，但MIB-1低的表達(dá)指數(shù)并不能完全排除宮頸高度病變，本研究中并沒有觀察到宮頸高度病變有MIB-1低表達(dá)指數(shù)的病例，雖然與上述文獻(xiàn)中的研究有不一致的地方，但MIB-1的檢測對觀察者進(jìn)行宮頸病變的判斷還是很有輔助作用的。

綜上所述，P16與MIB-1的表達(dá)增強(qiáng)提示宮頸病變，建議在宮頸低度病變中，由于P16有表達(dá)陰性的可能，故應(yīng)與MIB-1表達(dá)情況、HPV的檢測情況結(jié)合起來分析，對于高度病變，P16則是具有高度敏感性及特異性的指標(biāo)。在進(jìn)行宮頸病變的篩查工作中應(yīng)結(jié)合形態(tài)學(xué)輔以P16及MIB-1的檢測診斷宮頸病變，以免再行不必要的組織活檢。這在宮頸細(xì)胞學(xué)中不失為一種簡單、可靠、易行的檢測方法。

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