北五味子配方顆粒提取工藝的正交設計試驗優選

葉綠萍，李啟軍，劉小意

1.廣西中醫學院一附院藥學部，廣西南寧 530023；2.廣西壯族自治區南寧市武鳴縣人民醫院藥劑科，廣西南寧 530100

中藥配方顆粒又稱免煎中藥，單味中藥濃縮顆粒是將單味中藥飲片經過科學加工并提取中藥材的有效成分后，制成的中藥飲片新劑型[1]。五味子配方顆粒劑以五味子藥材或飲片為原料，經水提取后加適量輔料，濃縮，噴霧干燥，干式制粒而制成的顆粒劑型，臨床要求其要具有與原藥材相同的功效[2]。本實驗依據中藥傳統湯劑的煎煮方法，以提取率、五味子甲素（DSSD）、五味子乙素（γ-schisandrin，γ-SSD）含量為指標，采用正交試驗法優選北五味子配方顆粒的最佳提取工藝。現報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

美國Agilent 1100高效液相色譜儀，G1322A-Degasser（真空脫氣機），G1311A 四元泵（QuatPump），G1313A 自動進樣器（ALS），DAD 檢測器，Agilent Chemstation（化學工作站）。AND GR202 電子分析天平（0.01 mg，日本），CREST 超聲波清洗器 （美國），旋轉蒸發儀RE-52A（上海亞榮生化儀器廠），KDM型連續可調控溫電熱套（山東鄄城）。

1.2 試藥

五味子甲素 （中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110764-200905）、五味子乙素（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110765-200905）。北五味子配方顆粒（自制，批號：20100401、20100501、20100502）。 HPLC 用甲醇（天津四友生物醫學技術有限公司，色譜純），娃哈哈純凈水（桂林娃哈哈飲用水有限公司），氯仿等化學試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（75∶25）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：254 nm；柱溫：室溫；進樣量：10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取減壓干燥至恒重的五味子甲素及五味子乙素對照品適量，分別加甲醇配制成0.100 mg/ml及0.125 mg/ml的對照品。

2.2.2 供試品溶液的制備 取北五味子顆粒約2.0 g，精密稱定，加氯仿10 ml，超聲提取30 min，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解，定容至10 ml量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 線性關系考察

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件，測定DSSD及γ-SSD的含量。結果在既定的HPLC測定方法下，北五味子配方顆粒中 DSSD 及 γ-SSD 含量分別在 0.265～1.590 μg和 0.638～3.188 μg范圍內，進樣量與峰面積的線性關系良好（r=1.0000和r=0.9999），平均回收率分別為101.12%和100.38%，RSD值分別為1.75%和1.10%。

2.4 正交因素水平的選定

北五味子的傳統用法主要是與其他藥材配成處方，加水煎成湯劑服用，而北五味子配方顆粒是北五味子飲片的替代品。為保留中藥湯劑的特點，筆者在設計處理因素時，主要選擇水作為提取溶媒，以用水量（倍數）、提取次數、提取時間作為處理因素，每個因素選擇三個水平，進行L9（34）正交試驗，以五味子DSSD、γ-SSD含量作為評價指標，同時參考提取率，篩選出五味子提取的最佳條件。考察因素水平見表1。

表1 考察因素水平情況

2.5 正交試驗篩選五味子的提取工藝

依據L9（34）進行實驗安排，按照既定要求提取并制備北五味子配方顆粒，計算綜合評分時，由于顆粒中DSSD、γ-SSD含量較低，故在計算綜合評分時，將該數據擴大500倍，以求合理性。綜合評分=提取率+五味子甲素含量（%）×500+五味子乙素含量（%）×500。結果顯示，影響北五味子配方顆粒提取率 （%）、DSSD、γ-SSD含量的主要因素依次為提取次數、提取時間、用水量，其中提取次數對實驗結果有顯著影響，最佳工藝條件為B3C3A2，即加水量為10倍，提取3次，每次2 h。 結果見表2、3。

表2 L9（34）正交試驗篩選五味子的提取工藝結果

表3 方差分析結果

2.6 驗證試驗情況

稱取北五味子50 g，共3份，按照最優條件B3C3A2提取，真空減壓濃縮至80 ml，按“供試品溶液的制備”項下操作，測定峰面積，計算提取率、藥液中五味子甲素及五味子乙素的含量。結果顯示，驗證結果與正交設計試驗預測結果基本接近，測得DSSD平均含量為0.024%，γ-SSD平均含量為0.049%，平均提取率為36.12%。即該提取工藝具有提取率穩定性好、五味子甲素及五味子乙素得率高、操作簡單且成本較低的特點，提示該提取工藝穩定、可行。見表4。

表4 驗證試驗結果（%）

3 討論

北五味子[Schisandra chinensis （Turcz.） Baill.]別名為五味子，為木蘭科植物五味子屬多年生落葉木質藤本植物的干燥成熟果實，因其果實甘、酸、辛、苦、咸五味俱全而得名[3]。北五味子主產于遼寧、黑龍江、吉林等地。有研究表明，其水提液具有延緩衰老的作用；而乙醇提取液則有安眠鎮靜作用；木酯素類具有保肝護肝作用，而且五味子制劑對動物的長期不良反應少[4]，臨床多用于久咳虛喘、夢遺滑精、遺尿、尿頻、久瀉不止、自汗、盜汗、津傷口渴、短氣脈虛、內熱消渴、心悸失眠等[5]。

目前，為了使配方顆粒的功效及特性盡可能地與中藥湯劑接近，國內大部分專家、學者都主張采用以水作為提取溶媒，所以在北五味子配方顆粒制備過程中，筆者也采納了這一個主張。由于北五味子提取液中五味子甲素、五味子乙素含量較低，這可能與用水作為溶媒有關，不同批次的北五味子原料中五味子甲素、五味子乙素含量有一定的差異，所以生產過程中工藝參數的控制及原料的選取應給予足夠的重視。值得注意的是，由于南五味子中不含五味子乙素，所以本配方顆粒原料只能選用北五味子。結果顯示，其最佳工藝條件為加水量為10倍，提取3次，每次2 h。并測得DSSD平均含量為0.024%，γ-SSD平均含量為0.049%，平均提取率為36.12%。提示該提取工藝穩定、可行。

[1]諸明娜.免煎中藥配方顆粒與傳統中藥飲片的比較[J].湖北中醫雜志,2004,26(11):55.

[2]國家藥品監督管理局.中藥配方顆粒管理暫行規定[S].2001.

[3]聶江力,裴毅,祖元剛.北五味子果實超臨界CO2萃取工藝的研究[J].植物研究,2005,25(2):213-215.

[4]楊放,袁軍,付平.五味子的研究概況[J].華西藥學雜志,2003,18(6):438-440.

[5]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學工業出版社,2005:44-45.