頂空進樣法測定更昔洛韋的殘留溶劑

江冬英，胡巧云

福建生物工程職業技術學院，福建福州 350002

更昔洛韋（Ganciclovir），化學名為 9-（1，3-二羥基-2-丙氧甲基）鳥嘌呤，是美國Syntex公司研發的抗病毒藥，1988年6月首次于英國上市[1]。臨床上主要用于治療免疫缺陷巨細胞病毒患者感染和輪狀病毒腸炎、嬰兒巨細胞病毒肝炎、皰疹性口炎、皰疹性咽峽炎、兒童病毒性腦炎、眼帶狀皰疹、小兒水痘、風疹、毛細支氣管炎、小兒流行性腮腺炎合并腦膜炎、小兒腺病毒肺炎、兒童傳染性單核細胞增多癥等。本品具有廣譜抗病毒活性，能有效抑制Ⅰ型、Ⅱ型單純皰疹病毒及水痘皰疹病毒的復制，也可抑制巨細胞病毒和皰疹病毒等的復制[2-3]。其廣闊的應用環境，使目前市場上更昔洛韋有多種劑型：注射液、粉針劑、膠囊劑、滴眼液、眼膏、分散片、凝膠、片劑和顆粒等。更昔洛韋工業生產的合成、精制過程中，用到了人用藥品注冊技術規范國際協調會（ICH）限制的多種有機溶劑[4]，其中有二類溶劑N，N-二甲基甲酰胺（DMF，限度0.088%）及三類溶劑乙酸乙酯（限度0.5%）[5]。目前關于乙酸乙酯和DMF殘留量的檢測，尚未見有文獻報道。本文按《中國藥典》2010年版與ICH相關要求，建立了頂空氣相色譜法來測定該藥中乙酸乙酯、DMF和乙醇殘留量，旨在為制訂采用該合成路線制備的更昔洛韋原料藥的質量標準提供依據。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N氣相色譜儀、安捷倫7694E頂空自動進樣裝置 （配有Agilent操作控制及積分軟件）；Mettler Toledo AG285電子天平；乙醇、乙酸乙酯和二甲基亞砜（DMSO）和DMF均為分析純；更昔洛韋原料樣品由湖北保樂制藥有限公司提供。

2.方法與結果

2.1 氣相色譜條件

色譜柱為 HP-5 （30 m×0.25 mm，0.25 μm） 毛細管色譜柱，柱溫采用程序升溫，初始溫度為40℃，維持2 min，再以20℃/min升至200℃并維持3 min；采用氮氣作為載氣，流速為 1 ml/min，分流比為 1∶5；檢測器為氫火焰（FID）檢測器，溫度為250℃；頂空平衡溫度為70℃，平衡時間為25 min，進樣口溫度150℃，取頂空瓶上部氣體1 ml進樣測定。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取乙醇、乙酸乙酯、DMF適量，精密稱定，用DMSO溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含乙醇、乙酸乙酯、DMF分別為1.0、1.0、0.5 mg的溶液，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液5 ml置于50 ml量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 樣品溶液的制備 精密稱取原料10 g加入二甲基亞（DMSO）溶解，搖勻，定容至100 ml量瓶中，制得100 mg/m的供試品溶液。

2.3 方法的系統適用性試驗

分別取對照品溶液和樣品溶液按上述色譜條件進行測定，并記錄色譜圖。結果顯示，空白溶劑、乙醇、乙酸乙酯與DMF各色譜峰之間分離度符合要求，峰形良好；扣除本底后，出峰次序依次為乙醇（tR=4.34 min）、乙酸乙酯（tR=5.44 min）、DMF（tR=8.48 min）。對照品溶液和樣品溶液所得色譜圖，分別見圖 1、2。

圖1 對照品溶液的典型色譜圖

圖2 樣品溶液的典型色譜圖

2.4 線性關系考察

分別精密量取上述對照品儲備液 0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 ml于10 ml量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，搖勻。再分別精密量取上述系列溶液各2 ml，置20 ml頂空瓶中，在上述色譜條件下密封進樣，記錄色譜圖，以待測物的峰面積為縱坐標（Y），以對照品溶液的濃度為橫坐標（X），進行線性回歸，得到各溶劑的線性回歸方程。結果見表1。

表1 不同線性范圍下的線性回歸方程

2.5 精密度試驗

精密量取對照品溶液2 ml，置20 ml頂空瓶中，共6份，在上述色譜條件下密封進樣，記錄色譜圖，結果乙醇、乙酸乙酯和 DMF峰面積的 RSD （n=6） 分別為 1.45%、2.01%和1.04%。

2.6 重現性試驗

取更昔洛韋樣品（批號為20100401）約100 mg，精密稱定，共6份，按“2.2.2”項下配制供試品溶液，在上述色譜條件下進樣檢測，依法分析。所得乙醇、乙酸乙酯和DMF均未檢出。

2.7 加樣回收率試驗

精密稱取更昔洛韋樣品（批號為20100401）100 mg，共9份，置于9個100 ml量瓶中，分別精密加入對照品儲備液0.8、1.0、1.2 ml各三份，加DMSO稀釋至刻度，搖勻，制成分別相當于對照品質量濃度80%、100%和120%的溶液。分別取上述溶液各2 ml，在設定的色譜條件下，頂空進樣分析，根據峰面積計算回收率。結果乙醇、乙酸乙酯和DMF的平均回收率（n=9）分別為99.7%、102.1%和97.3%，RSD分別為 4.78%、3.14%和4.51%。

2.8 溶液穩定性試驗

取已測定線性關系良好的對照品溶液，在上述色譜條件下，分別于 0、1、2、4、6、8 h 進樣，考察溶液穩定性。 所得乙醇、乙酸乙酯和DMF各溶劑峰面積的RSD分別為1.38%、1.60%和2.02%。

2.9 最低檢測限試驗

精確配制系列標準濃度的溶液，逐步稀釋，在上述色譜條件下進樣，記錄色譜圖，測定主峰的響應值與基線噪聲的比值約為3∶1時，乙醇、乙酸乙酯和DMF的最低檢測濃度分別為：30 ng/ml、45 ng/ml和 82 ng/ml。

2.10 樣品測定結果

取更昔洛韋樣品約100 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加DMSO溶解并稀釋至刻度，依上述方法和色譜條件測定，以外標法計算各組分含量。結果批號為20100401、20100504和20100607的3批樣品中乙醇、乙酸乙酯和DMF均未檢出。

3 討論

3.1 程序升溫的選擇

三種溶劑中，乙醇和乙酸乙酯的沸點非常接近，均在80℃以下，但DMF的沸點較高，可達150℃以上，為了在短時間內達到有效的分離，筆者采用了上述程序升溫的條件，在200℃時保持3 min以保證溶媒DMSO全部被吹出，而不影響下一次進樣的測定。

3.2 溶媒的選擇

根據更昔洛韋的溶解特性，同時考慮沸點與出峰時間，筆者選擇DMSO為溶媒，樣品的乙醇、乙酸乙酯和DMF得到了比較理想的分離，可以準確地測定該藥中的殘留溶劑。

3.3 本方法的優點

本研究采用頂空進樣法測定有機殘留溶劑，與直接進樣相比，可以避免樣品溶液對色譜柱的污染以及樣品基質的干擾，操作簡單，不易損壞色譜柱，柱效也較高[6-7]。

綜上所述，本文所用方法的分離度、精密度和準確度均達到《中國藥典》2005年版的相關規定，三種溶劑的檢測下限均遠遠小于ICH中這三種溶劑的用量限制。因此，本實驗建立的方法可以用來控制更昔洛韋中有機溶劑的殘留量。

[1]李收,黃翠翠.更昔洛韋臨床研究進展[J].中國社區醫師:綜合版,2009,11(18):23.

[2]秦偉玲,阮毅燕,黃章瓊.更昔洛韋、鹽酸氨溴索治療小兒毛細支氣管炎57例的療效分析[J].廣西醫學,2009,31(8):1166-1167.

[3]李桂賢,吳國瓊.胸腺素、更昔洛韋治療小兒傳染性單核細胞增多癥80例的療效觀察[J].廣西醫學,2008,30(11):1803-1804.

[4]高曉榮,常宏宏,魏文瓏.更昔洛韋合成路線圖解[J].中國醫藥工業雜志,2010,41(3):229-231.

[5]周海鈞.藥品注冊的國際技術要求(質量部分)[M].北京:人民衛生出版社,2000:223.

[6]李會輕,欒成章,王尊文,等.頂空氣相色譜法測定鹽酸拉貝洛爾中有機溶劑殘留量[J].中國藥事,2010,24(4):397-398.

[7]劉冬,戰寒秋,王茜,等.頂空氣相色譜法測定西維來司鈉中的殘留溶劑[J].中國藥品標準,2010,11(3):199-201.