鋅對酒精性肝損害小鼠保護作用的研究

張素云，許秀舉

1.內蒙古自治區包頭市蒙醫中醫醫院消化內科，內蒙古包頭 014040；2.包頭醫學院，內蒙古包頭 014040

隨著人們生活水平的提高及經濟活動日趨活躍，飲酒人數越來越多，現在飲酒已經成為很多人生活中必不可少的一部分。但酒精引起的相關疾病也逐漸被人們所認識。酒精可引起肝臟、胃、心臟、腦組織等多個臟器的損害，尤其是酒精性肝病發病率最高。酒精性肝病已成為男性的第四大死因[1]。目前，解酒保肝已成為醫學界與生物界迫切需要解決的問題。本研究采用一次大劑量白酒灌胃的方法，制作白酒模型[2]，探討急性大量飲酒對肝組織酶的影響以及不同劑量鋅對急性酒精性肝損害小鼠的干預作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小鼠，均為雄性，體重18～24 g，由內蒙古大學實驗動物中心提供，為清潔級動物。合格證號為SCXKC蒙2002-0001。

1.1.2 主要試劑 葡萄糖酸鋅，北京高科藥物有限責任公司生產；紅星二鍋頭酒，紅星股份有限公司生產；谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、肝組織谷丙轉氨酶（ALT）、肝組織谷草轉氨酶（AST）測定試劑盒，均由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組及處理 將50只健康昆明種小鼠（均為雄性）隨機分為5組，每組各10只，分別為空白對照組，白酒對照組和鋅低、中、高3個劑量組，含鋅劑量分別為1.25、2.50、5.00mg/kg。其中空白對照組和白酒對照組飲用自來水；其他各組飲用自由溶于水的鋅溶液。各組大鼠均采用自由飲用的方式，連續飲用30 d。在實驗期間，每周稱一次體重，觀察小鼠的一般狀況。第30天時對小鼠進行空腹白酒灌胃實驗。實驗時采用一次大劑量白酒灌胃的方法[2]，按12 ml/kg體重對各組小鼠進行灌胃，16 h后處死小鼠，取小鼠肝組織，測定各項指標。

1.2.2 肝組織勻漿的制備 處死小鼠后立即打開腹腔取出肝組織，制成組織勻漿。組織勻漿用低溫離心機離心10 min，取適量上清液進行MDA、GSH-Px、ALT、谷AST的測定。

1.2.3 各項生化指標測定 肝勻漿谷胱甘肽活性、MDA含量測定：采用二硫代對硝基苯甲酸法（DTNB法）測定肝勻漿中GSH-Px，硫代巴比妥酸法（TBA法）測定肝勻漿中MDA含量。肝勻漿ALT、AST含量測定：采用賴氏法測定，按試劑盒說明操作進行。

1.3 統計學分析

采用SPSS 11.5統計軟件包進行分析，計量資料數據均以均數±標準差 （±s）表示。采用單因素方差分析 （One-Way ANOVA）比較組間差異。

2 結果

2.1 實驗動物的一般情況

在整個實驗過程中，所有小鼠活動正常，健康狀況良好，無死亡現象發生。隨著實驗的進行，各組小鼠體重逐漸增加，但各組間平均體重比較，差異無統計學意義（P＞0.05）

2.2 小鼠肝組織酶測定結果

見表1。由表1可見，白酒對照組及各劑量鋅組與空白對照組比較，肝組織谷胱甘肽明顯下降，差異有高度統計學意義（P＜0.01）。各劑量鋅組與白酒對照組比較稍有升高，但差異無統計學意義（P＞0.05）。說明飲白酒可使肝組織受損，谷胱甘肽過氧化物酶明顯下降，但葡萄糖酸鋅干預對肝組織的谷胱甘肽保護作用不明確。

表1 小鼠肝組織谷胱甘肽測定結果[±s，mmol/（kg·min）]

表1 小鼠肝組織谷胱甘肽測定結果[±s，mmol/（kg·min）]

注：P1值表示與白酒對照組比較，P2值表示與空白對照組比較

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2.3 小鼠肝組織丙二醛測定結果

見表2。從表2可見，白酒對照組與空白對照組相比，肝組織丙二醛明顯升高，差異有高度統計學意義（P＜0.01）。各劑量鋅組與白酒對照組比較明顯降低，差異有高度統計學意義（P＜0.01）。說明飲白酒可使肝組織受損，丙二醛明顯升高，經葡萄糖酸鋅干預可使肝組織中丙二醛下降。

表2 小鼠肝組織丙二醛測定結果（±s，μmol/g）

表2 小鼠肝組織丙二醛測定結果（±s，μmol/g）

注：P1值表示與白酒對照組比較，P2值表示與空白對照組比較

P2值空白對照組白酒對照組鋅低劑量組鋅中劑量組鋅高劑量組組別 只數1010101010丙二醛測定值1.5861±0.70594.0310±1.40182.9256±1.25601.8177±0.87211.7688±0.7397 P1值0.0000.0070.0010.0010.0450.7220.7790.203

2.4 小鼠肝組織谷丙轉氨酶測定結果

見表3。由表3可見，白酒對照組與空白對照組相比，肝組織谷丙轉氨酶明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.05），不同劑量鋅干預與白酒對照組相比，谷丙轉氨酶有所下降，僅高劑量鋅組與白酒對照組相比，差異有統計學意義（P＜0.05）。說明葡萄糖酸鋅對酒精性肝損害小鼠谷丙轉氨酶影響與劑量相關。

表3 小鼠肝組織谷丙轉氨測定結果（±s，U/L）

表3 小鼠肝組織谷丙轉氨測定結果（±s，U/L）

注：P1值表示與白酒對照組比較，P2值表示與空白對照組比較

P2值組別 只數1010101010空白對照組白酒對照組鋅低劑量組鋅中劑量組鋅高劑量組谷丙轉氨酶測定值22.2860±7.170835.3600±12.661927.6950±4.064324.1500±11.101222.2870±4.9897 P1值0.0320.2040.0650.0320.0080.3570.5540.722

2.5 小鼠肝組織谷草轉氨酶測定結果

見表4。從表4可以看出，白酒對照組與空白對照組相比，肝組織谷草轉氨酶明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.05），不同劑量鋅干預與白酒對照組相比，谷草轉氨酶有所下降，中、高劑量鋅組與白酒對照組相比，差異有統計學意義（P＜0.05）。說明葡萄糖酸鋅對酒精性肝損害小鼠谷草轉氨酶有影響。

表4 小鼠肝組織谷草轉氨酶測定結果（±s，U/L）

表4 小鼠肝組織谷草轉氨酶測定結果（±s，U/L）

注：P1值表示與白酒對照組比較，P2值表示與空白對照組比較

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3 討論

酒精引起急慢性肝損害的原因非常復雜，研究普遍認為與脂質過氧化、炎癥介質、內毒素、細胞因子和免疫調節等多種因素有關[3-4]。有研究證實，脂質過氧化在酒精性肝病發生、發展中起重要作用[5]，從某種角度上來講，脂質過氧化是機體正常生理過程，但過度的脂質過氧化卻可以造成肝臟損傷[6]。抑制脂質過氧化反應是減輕肝臟損害的有效途徑。目前，國內外陸續有報道，N-乙酰半胱氨酸、卵磷脂及很多中藥，如三七、丹參、枳黃芳、決明子、鹿茸等對酒精性肝損傷具保護作用，其機制均與其抗氧化作用有關。但微量元素鋅對酒精性肝損傷保護作用研究很少。鋅是人體內的含量僅次于鐵的15種微量元素之一，具有抗氧化作用，能抑制脂質過氧化或硫醇氧化，維持生物膜的正常生理功能。本研究利用鋅的抗氧化作用來觀察其對急性酒精性肝損害的營養保護作用。MDA是氧自由基與生物膜多不飽和脂肪酸發生脂質過氧化的產物，與氧自由基的量一致，GSH-Px是細胞內抗脂質過氧化作用保護系統的主要成分，不僅是肝細胞損傷的標志，也反映體內對脂質過氧化拮抗能力的高低，所以，本研究以MDA和 GDH-Px作為反映機體脂質過氧化水平。ALT、AST是肝細胞受損后主要釋放的酶，其測定結果直接可反映肝細胞損傷程度，故本項研究將其列為觀察指標。常用的鋅源包括無機鋅、有機合成鋅和有機鋅，它們的生物學效價存在很大差異。本項研究中所使用的是葡萄糖酸鋅，是有機合成鋅。

本研究結果顯示：①白酒可造成急性酒精中毒小鼠肝臟功能及脂質過氧化損害。②鋅對酒精性肝損害小鼠具保護作用，并且與鋅劑量相關，在允許范圍內，鋅劑量越大，保護作用越強。在本研究中，各劑量組葡萄糖酸鋅均可使谷胱甘肽過氧化物酶升高，但與白酒對照組相比，差異無統計學意義，與理論不相符[4,7]，分析可能有以下原因：①實驗動物的樣本數較少，結果離散度較大。②可能與鋅源類型有關，不同鋅源吸收、利用度不同。③與乙醇處理的劑量和時間、動物品系及小鼠灌白酒后處死時間有關。為此，在今后的科研工作中筆者建議盡量增加樣本量，選擇吸收、利用度更好的鋅源，如氨基酸螯合鋅，同時增加測定肝組織中酶的種類，如一氧化氮、超氧化物歧化酶、乙醇脫氫酶，試圖找到更能反映鋅對酒精性肝損害起保護作用的酶類，為鋅對酒精性肝損害起保護作用提供理論依據。

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