不同基因型幽門螺桿菌與冠心病的相關(guān)性研究

曹平良，劉小強(qiáng)，唐瓊珍，劉 勇，王小瓊

江西省人民醫(yī)院干部保健門診，江西南昌 330006

冠心病是嚴(yán)重危害人類的健康的疾病之一。傳統(tǒng)的觀點(diǎn)認(rèn)為性別、吸煙、年齡、血壓、肥胖、血脂、糖尿病是其發(fā)病的主要因素。越來越多的實(shí)驗(yàn)亦表明冠心病與一些非傳統(tǒng)因素密切相關(guān)，例如高同型半胱氨酸（HCY）血癥、幽門螺桿菌（Hp）感染等。關(guān)于不同基因型Hp感染與血漿HCY的水平以及與冠心病的傳統(tǒng)因素之間的相互關(guān)系在國外研究尚少。本研究旨在探討不同基因型Hp與冠心病的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

冠心病組：選取2009年11月～2010年11月于我院心血管內(nèi)科住院的冠心病患者60例，包括穩(wěn)定型心絞痛36例（男22例，女14例），不穩(wěn)定型心絞痛17例（男9例，女8例），心肌梗死 7 例（男 5 例，女 2 例），年齡（51.9±5.8）歲，均經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)。非冠心病組（對(duì)照組）：選取同期收住我院心血管內(nèi)科的非冠心病患者60例，男33例，女27例，年齡（52.2±6.0）歲，均經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)。納入標(biāo)準(zhǔn)：心肌梗死患者處于穩(wěn)定期（心肌梗死后≥6個(gè)月）、不穩(wěn)定型心絞痛處于穩(wěn)定期（經(jīng)治療后病情穩(wěn)定＞1周）、無感染、無腫瘤、無全身免疫性疾病、無甲狀腺異常、無嚴(yán)重貧血、無肝腎功能不全、無嚴(yán)重心臟瓣膜病變、無肥厚性心肌病、無心肌再梗死等疾病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病患者長期血糖未控制在正常范圍之內(nèi)，高血壓病Ⅱ級(jí)以上，使用免疫抑制藥物。

1.2 方法

詳細(xì)記錄所有入選患者的年齡、性別、身高、體重、血壓、纖維蛋白原、吸煙史等資料。空腹取血，EDTA抗凝，以3000 r/min離心10 min，分離血漿，置于-70℃保存?zhèn)錅y。采用ELISA法測定HCY，試劑盒購自法國GM公司。采用免疫散射比濁法測定CRP，以散射比濁法測定血漿纖維蛋白原。用Olympus Au5400型全自動(dòng)生化儀測定血脂、血糖。

胃鏡下取胃黏膜組織，制備組織切片，采用甲苯胺藍(lán)法檢測Hp。對(duì)于Hp陽性者，將石蠟切片烤箱中烘烤過夜，二甲苯脫蠟、無水乙醇脫水5 min，2次，空氣中干燥；經(jīng)硫氰酸鈉、胃蛋白酶的作用，讓樣本DNA完全變性，-20℃梯度乙醇中各脫水1 min；滴加cagA基因型探針混合液于組織上孵育24 h，最后再洗脫、封片、遮光保存，在熒光顯微鏡下觀察。幽門螺桿菌cagA基因型DNA探針試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包完成，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。統(tǒng)計(jì)前首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行Levene方差齊性檢驗(yàn)，兩組計(jì)量資料之間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 冠心病組與對(duì)照組一般情況比較

冠心病組 SBP[（134±8）mm Hg vs（126±9）mm Hg]、DBP[（78±9）vs（73±8）mmHg）]、TC[（4.92±1.13）mmol/L vs（4.54±1.26）mmol/L）]、LDL-C[（3.60±1.18）mmol/L vs（3.45±1.09）mmol/L）]、CRP[（7.68±5.62）mg/L vs（3.57±2.68）mg/L]顯著高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P＜0.05），而在性別、吸煙（35/25、37/23）、年齡、BMI[（22.9±2.9）vs（22.7±3.0）kg/m2]、TG[（1.86±0.58）vs（1.78±0.62）mmol/L]、HDL-C[（1.12±0.34）mmol/L vs （1.13±0.43）mmol/L）]、空腹血糖[（5.32±0.76）mmol/L vs（5.29±0.81）mmol/L）]、Fib[（4.58±0.78）g/L vs （3.82±0.67）g/L]方面與對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P＞0.05）。

2.2 冠心病組與對(duì)照組Hp感染率及cagA基因型Hp的檢出率比較

冠心病組的Hp感染率顯著高于對(duì)照組Hp感染率（55%vs 30%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.67，P＜0.01）。 冠心病組中Hp陽性患者的cagA基因檢出率高于對(duì)照組中Hp陽性患者（60.6%vs 27.8%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.01，P＜0.05）。

2.3 Hp感染患者與無Hp感染患者血漿同型半胱氨酸水平比較

Hp 陽性患者血漿 HCY 水平[（17.91±3.08）μmol/L]顯著高于 Hp 陰性患者血漿 HCY 水平[（13.13±4.08）μmol/L]，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；無論冠心病組還是對(duì)照組Hp陽性患者血漿HCY水平均顯著高于Hp陰性患者。見表 1。

表1 Hp感染與血漿HCY水平之間的關(guān)系

2.4 不同基因型Hp感染患者的HCY水平比較

Hp陽性患者中cagA基因型患者血漿HCY水平[（21.19±4.69）μmol/L] 高于非 cagA 基因型患者血漿HCY水平[（15.80±2.79）μmol/L]，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。 冠心病組中cagA 基因型患者血漿 HCY 水平[（22.61±4.98）μmol/L]高于非cagA基因型患者血漿 HCY 水平[（17.10±3.41）μmol/L]，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。對(duì)照組中cagA基因型患者血漿 HCY 水平[（16.92±3.82）μmol/L]高于非 cagA 基因型患者血漿 HCY 水平[（13.99±1.92）μmol/L]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 2。

表2 不同基因型Hp感染與血漿HCY水平之間的關(guān)系

2.5 不同基因型Hp與冠心病傳統(tǒng)因素的關(guān)系

2.5.1 冠心病組中，cagA基因型患者與非cagA基因型患者的血壓、性別、吸煙與否、年齡、肥胖、血脂、血糖、纖維蛋白原相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；cagA基因型患者與非cagA基因型患者的CRP水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

2.5.2 對(duì)照組中，cagA基因型患者與非cagA基因型患者的血壓、性別、吸煙與否、年齡、肥胖、血脂、血糖、纖維蛋白原相比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；cagA基因型患者與非cagA基因型患者的CRP水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表3 冠心病組中不同基因型幽門螺桿菌與冠心病傳統(tǒng)因素之間的關(guān)系（）

表3 冠心病組中不同基因型幽門螺桿菌與冠心病傳統(tǒng)因素之間的關(guān)系（）

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3 討論

3.1 Hp感染在冠心病發(fā)病中的作用

大量研究表明血漿高同型半胱氨酸血癥是冠心病的一個(gè)新的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[1]。目前，許多實(shí)驗(yàn)表明Hp的感染與冠心病的發(fā)生有密切關(guān)系，許多學(xué)者通過臨床和血清流行病學(xué)等方面進(jìn)行了大量研究，雖然存在一些爭議，但絕大多數(shù)學(xué)者肯定了兩者之間的關(guān)系。賈愛堂等[2]通過對(duì)抗Hp治療組、對(duì)照組隨訪1年后發(fā)現(xiàn)抗Hp治療組心肌缺血事件發(fā)生顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）。這表明Hp的感染可明顯提高冠心病的發(fā)生率。本研究亦發(fā)現(xiàn)：冠心病組與對(duì)照組相比，冠心病組的Hp感染率明顯高于對(duì)照組，這一結(jié)果與國外Ponzetto[3]、Patel[4]等報(bào)道基本一致。這說明Hp感染是CHD發(fā)病的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素。

表4 對(duì)照組中不同基因型幽門螺桿菌與冠心病傳統(tǒng)因素之間的關(guān)系（）

表4 對(duì)照組中不同基因型幽門螺桿菌與冠心病傳統(tǒng)因素之間的關(guān)系（）

傳統(tǒng)因素 性別（男/女）吸煙（是/否）BMI（kg/m2）TC（mmol/L）TG（mmol/L）HDL-C（mmol/L）LDL-C（mmol/L）血糖（mmol/L）Fib（g/L）CRP（mg/L）cagA基因型非cagA基因型χ2/t值P值3/26/70.272＞0.0513/79/40.062＞0.05年齡（歲）53.6±5.851.4±6.20.374＞0.05 SBP（mm Hg）126±8125±90.217＞0.05 DBP（mm Hg）72±973±70.252＞0.0521.8±3.220.1±3.40.495＞0.054.56±1.224.51±1.130.083＞0.051.72±0.281.81±0.360.501＞0.051.10±0.431.01±0.320.488＞0.053.46±1.04340±1.100.105＞0.055.26±0.944.92±0.441.069＞0.053.14±0.703.01±0.640.377＞0.053.68±1.022.06±1.002.355＜0.05

3.2 不同基因型HP感染與HCY水平的關(guān)系

Franceschi等[5]發(fā)現(xiàn)，多克隆cagA抗體與人正常臍靜脈組織和動(dòng)脈硬化組織中的平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞表面抗原發(fā)生交叉反應(yīng)，在動(dòng)脈硬化形成過程中，內(nèi)皮細(xì)胞功能受損，平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞大量增殖，導(dǎo)致了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。本研究亦發(fā)現(xiàn)冠心病組中cagA基因型Hp患者的檢出率高于對(duì)照組，cagA基因型患者血漿HCY水平顯著高于非cagA基因型患者血漿HCY水平。Pasceri等[6]通過對(duì)社會(huì)背景相似冠心病患者和相同年齡、性別的對(duì)照中，攜帶cagA抗原的、毒力更強(qiáng)的Hp感染發(fā)生率進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，冠心病患者幽門螺桿菌的IgG抗體顯著高于對(duì)照組。由此可見,在Hp感染中，以cagA基因型Hp感染與冠心病密切相關(guān)，這說明cagA基因型Hp感染是冠心病發(fā)病的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素。

3.3 不同基因型幽門螺桿菌與CRP的關(guān)系

血清CRP含量不但是預(yù)測未來心血管危險(xiǎn)因素的炎癥標(biāo)志物，也是心血管疾病的直接致病因素[7]。左晶[8]和董立[9]等的研究結(jié)果表明Hp感染和CRP水平及冠心病危險(xiǎn)事件發(fā)生率相關(guān)，對(duì)冠心病的病變程度有預(yù)測價(jià)值。本研究表明：不同基因型Hp組，冠心病傳統(tǒng)因素之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是cagA基因型Hp感染患者血漿CRP水平顯著高于非cagA基因型Hp感染患者，與吳鈺燕等[10]的研究結(jié)果一致。總之，cagA基因型Hp感染與CRP水平和冠心病發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。

3.4 cagA基因型Hp感染致冠心病發(fā)生的機(jī)制

cagA基因型Hp感染致冠心病發(fā)生的機(jī)制尚不明確，可能是通過：①cagA+Hp感染誘導(dǎo)抗原模擬現(xiàn)象；②cagA+Hp感染與自身免疫反應(yīng)；③cagA+Hp感染與全身性或動(dòng)脈局部炎癥反應(yīng)[11]。本研究認(rèn)為可能是cagA基因型Hp感染后通過增高血漿HCY水平、增加血漿中CRP的濃度這一中間環(huán)節(jié)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展

本實(shí)驗(yàn)中由于樣本容量有限，并未給予Hp感染對(duì)照治療組，但是否冠心病伴Hp感染者一律給予抗Hp感染尚需進(jìn)一步研究。

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