高效液相色譜法測定芍黃通便湯中芍藥苷含量

韓 平，胡 敏，曹 陽，劉 燕

(1.四川省南充市中心醫院中藥劑科，四川 南充 637000; 2.四川省南充市食品藥品檢驗所，四川 南充 637000)

芍黃通便湯為我院自制品種，由白芍、大黃、芒硝、決明子等8味中藥組方，臨床用作腸道準備用藥和治療各種原因引起的便秘，用于治療晚期腫瘤患者便秘，療效好且持續時間長[1]。方中白芍為君藥，故采用白芍的主要成分芍藥苷作為質量控制指標，建立高效液相色譜(HPLC)法測定芍黃通便湯中芍藥苷的含量，方法簡便，準確，重復性好，可作為該制劑的含量測定方法。現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀(2695泵、自動進樣器、柱溫箱，2487二極陣列檢測器);電子天平。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為0736－9912);芍黃通便湯(批號為101121)及陰性樣品均為我院自制;乙腈、磷酸為色譜純，水為超純水，其余試劑試藥均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱:Phenomene C18柱 (250 mm ×4.60 mm，5 μm;流動相:乙腈－0.1%磷酸(20 ∶80);流速:1.0 mL/min;檢測波長:230 nm;柱溫:37 ℃;進樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

稱取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含68.2μg的溶液，即得對照品溶液。精密量取本品2 mL，加乙醇稀釋，搖勻，過濾，取濾液，定容至25 mL，即得供試品溶液。取不含白芍的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法，同法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:取2.2項下3種溶液各10 μL，進樣測定，記錄色譜圖。供試品溶液色譜中，芍藥苷與鄰分峰達到基線分離，峰形對稱，分離效果良好，且陰性樣品對測定無干擾，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密量取芍藥苷對照品溶液(質量濃度為68.2μg/mL)2，4，8，10，12，15，30 μL 進樣，測定其峰面積，以峰面積值(Y)對進樣量(X)進行回歸，得標準曲線方程 Y=1.59×106X+5.05×103，r=0.9997(n=7)。結果表明，芍藥苷進樣量在 0.136～2.046μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，連續進樣6次，測定峰面積。結果的 RSD=0.92%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8，12 h 時進樣測定峰面積。結果的 RSD=0.9%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內穩定。

重復性試驗:取同一批(批號為101121)樣品6份，依法制備供試品溶液，進樣測定。結果芍藥苷含量為1.613g/L，RSD=1.3%(n=6)，表明方法重復性好。

加樣回收試驗:精密量取已知含量的樣品6份(質量濃度為1.613 g/L，批號為110121)，每份1 mL，分別加入對照品溶液(質量溶度為 1 g/L)，1.5，1.5，1.6，1.6，1.7，1.7 mL，按擬訂的方法和色譜條件，制備加樣回收溶液并注入高效液相色譜儀。結果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取樣品，按擬訂的方法制備供試品溶液。分別吸取對照品溶液及供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按外標法(峰面積)計算含量。結果批號分別是 101121，101224，101229，110109，110126，110223 的樣品中芍藥苷含量分別為 1.613，1.593，1.734，1.659，1.681，1.708 g/L。

3 討論

參照2010年版《中國藥典(一部)》白芍含量測定項[2]，以乙腈－0.1%磷酸溶液(14∶86)為流動相，芍藥苷的出峰時間為14 min，且峰高度比較低、峰形較鈍。改用乙腈－0.1%磷酸溶液(20∶80)為流動相，出峰時間縮短至6 min，且峰形更尖。故芍黃通便湯的芍藥苷含量測定流動相最終采用乙腈－0.1%磷酸溶液(20∶80)。

[1]楊興華，唐澤琴，陳金華，等.芍黃通便湯治療晚期腫瘤患者便秘的效果觀察[J].西部醫學，2010，22(11):2112－2113.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:97.