薄層色譜法檢查姜紅活血止痛酊中烏頭堿限量

郭廷東，唐志立，曹 陽，雷果平

(1.四川省南充市中心醫院，四川 南充 637000;2.四川省南充市食品藥品檢驗所，四川 南充 637000)

姜紅活血止痛酊為醫院自制制劑，由姜黃、紅花、生馬錢子、生天南星、生半夏、生川烏、生草烏、雪上一枝蒿等11味藥材制成，具有活血化瘀、消腫止痛、舒筋活絡等功效，用于跌打損傷、風濕骨痛等。由于方中川烏、草烏、雪上一枝蒿中均含有劇毒的烏頭堿類酯型生物堿[1]，為了更好地控制產品質量、保證用藥安全有效，必須對制劑中烏頭堿含量進行限量控制。筆者采用薄層色譜法對姜紅活血止痛酊中烏頭堿含量進行限量檢查，現報道如下。

1 儀器與試藥

層析缸，玻璃噴霧器，微量點樣器，薄層制版器，電子天平。烏頭堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110720－200410);姜紅活血止痛酊(自制，批號為101213，101214，101215);姜紅活血止痛酊陰性樣品(自制，批號為101221);乙醚，氯仿，硅膠G，羧甲基纖維素鈉，試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

精密吸取20 mL樣品，于蒸發皿中低溫(40℃以下)揮去乙醇，殘渣加氨試液2 mL濕潤，加乙醚60 mL，分3次提取，提取液低溫蒸干(40℃以下)，殘渣加氯仿溶解，定容至2 mL，作為供試品溶液。取烏頭堿對照品，精密稱定，加異丙醇－氯仿(1∶1)混合液制成1 g/L的溶液，作為對照品溶液。精取20 mL陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.2 顯色劑制備

稱取0.85 g堿式硝酸鉍，加10 mL冰乙酸與40 mL水溶解，臨用前取5 mL，加碘化鉀溶液(取碘化鉀4 g溶于10 mL水)5 mL，再加冰乙酸20 mL，加水稀釋至100 mL，即得碘化鉍鉀溶液。

2.3 檢查法

按薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液2 μL、對照品溶液2 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板上，以正己烷 －乙酸乙酯 －甲醇(6.4∶3.6∶1)為展開劑，在氨蒸氣飽和20 min的層析缸內，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液顯色。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜斑點相應位置上，斑點應小于對照品色譜的斑點，即可證明每1 mL本品含有的烏頭堿低于100 μg。

2.4 方法學考察

重現性試驗 :取 6批樣品(批號為 081121，081122，081123，081124，081125，081126)，依法檢查。結果薄層色譜斑點清晰，且供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜斑點相應位置上，斑點小于對照品色譜的斑點，表明方法重現性良好。

專屬性試驗:照薄層色譜法[3]試驗，吸取供試品溶液、陰性對照品和對照品溶液各2 μL，按2.3項下方法操作，檢視斑點大小及顏色。結果在陰性對照品溶液色譜中，與對照品溶液色譜斑點相同位置上不出現斑點，其他斑點則與供試品溶液色譜相同，說明陰性無干擾，方法專屬性好。薄層色譜圖見圖1。

回收試驗:取陰性樣品20 mL，加入對照品溶液1 mL，照供試品溶液制備方法制備溶液，分別吸取該溶液 1，2，4，6，8，10 μL 以及對照品溶液2 μL，依法檢查。溶液色譜中，在與對照品溶液色譜斑點相應位置上顯相同顏色的斑點，且斑點顏色隨點樣量增加而加深。

圖1 薄層色譜圖

檢出限確定:精密吸取陰性樣品20 mL，加入對照品溶液0.1 mL，照供試品溶液制備方法制備溶液，分別吸取該溶液2，4，6，8 μL以及對照品溶液2 μL，依法檢查。溶液色譜中，在與對照品溶液色譜斑點相應位置上，點樣量在4 μL時即顯清晰斑點，故檢出限確定為 0.2 μg。

耐用性試驗:采用自制和青島海洋生物制品廠生產的硅膠G薄層板，在不同溫度(5，10，20，30 ℃ )、濕度(相對濕度為 45% ，70%)條件下展開?？梢姡跍囟?～30℃、相對濕度45% ～70%條件下展開，采用自制和廠家生產的硅膠G板得到的薄層色譜圖斑點均清晰。

2.5 樣品檢查

依法對3批姜紅活血止痛酊進行檢查。結果3批樣品溶液的薄層色譜中，在與對照品溶液色譜斑點相應位置上，所顯斑點均小于對照品斑點，表明3批樣品的烏頭堿限量檢查合格。

3 討論

酊劑中的烏頭堿在堿性條件下，經乙醚萃取，在硅膠G板上進行分離、顯色，將樣品與對照品比較，在相同斑點的 Rf值位置，可根據斑點大小和顏色深淺進行定量檢查。根據2010年版《中國藥典(一部)》及相關文獻[2－3]，綜合分析認為，烏頭堿含量生川烏應低于0.17%，生草烏應低于0.50%，雪上一枝蒿應低于0.10%。本方中含有生川烏6 g，生草烏6 g，雪上一枝蒿6 g，制成1000 mL，烏頭堿的理論限度應為100.2 μg/mL。樣品檢查結果表明，每1 mL本品中含有的烏頭堿低于100 μg，低于理論限度，說明此方法可靠[4]。

[1]南京中醫藥大學.中藥大辭典[M].第2版.上海:上?？茖W技術出版社，2006:301－305，2128－2131，2930－2931.

[2]高繼武，蔣山好.離子對萃取光度法測定雪上一枝蒿總生物堿含量[J].中國民族民間醫藥雜志，2000，43(2):88－91.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:36，220.

[4]梁生旺.中藥制劑分析[M].北京:中國中醫藥出版社，2003:315－316.