銀杏外種皮黃酮類化合物的提取方法研究

宋國斌，席國萍

(山西大同大學醫學院，山西 大同 037009)

銀杏是地球上現存最古老的中生代孑遺植物之一[1]，屬銀杏科銀杏屬落葉喬木，又稱白果樹、公孫樹，為我國特有樹種[2]。銀杏外種皮是銀杏果仁的皮層，即種子硬殼外面的肉質皮層，俗稱白果衣胞[3]。銀杏外種皮的主要化學成分是黃酮類化合物、銀杏內酯等，其中黃酮類化合物具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、防治心血管疾病、增強免疫能力等重要作用。我國有著豐富的銀杏資源，但銀杏外種皮的研究相對較少。在銀杏產區，通常只取其仁，而將外種皮丟棄，既嚴重污染環境，又浪費了可觀的生物資源。作者在此分別以水、乙醇、丙酮作為提取溶劑，對銀杏外種皮黃酮類化合物的不同提取方法進行比較研究，擬為銀杏外種皮資源的開發利用提供依據。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

銀杏外種皮，采自貴州省貴陽市烏當區楊昌鎮。

蘆丁對照品，中國藥檢所；其它試劑均為分析純。

UNICO UV-2000型紫外可見分光光度計，上海麗度電子科技發展有限公司；RE-25型旋轉蒸發儀，上海亞榮生化儀器廠；METTLER-AE240型電子天平，瑞士梅特勒公司；康氏電動振動儀，北京通縣醫療器械廠。

1.2 方法

1.2.1 銀杏外種皮的前處理

將銀杏外種皮自然風干后，置于50 ℃烘箱中烘至變脆，粉碎，置于冰箱中保存。

1.2.2 銀杏外種皮總黃酮提取液的制備

準確稱取10 g銀杏外種皮，以甲醇為溶劑，用索氏提取器在70 ℃提取至提取液無色，濃縮至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待測。

1.2.3 銀杏外種皮黃酮類化合物提取液的制備

(1)浸提法

準確稱取3份銀杏外種皮，每份10 g，在室溫下，分別以5 BV的水、乙醇、丙酮作為提取溶劑，浸提3次，每次1 h；合并提取液，于50 ℃減壓濃縮至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待測。

(2)振蕩提取法

準確稱取3份銀杏外種皮，每份10 g，在室溫下，分別以5 BV的水、乙醇、丙酮作為提取溶劑，振蕩提取3次，每次1 h；合并提取液，于50 ℃減壓濃縮至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待測。

(3)回流提取法

準確稱取3份銀杏外種皮，每份10 g，在70 ℃下，分別以5 BV的水、乙醇、丙酮作為提取溶劑，回流提取3次，每次1 h；合并提取液，于50 ℃減壓濃縮至干，用70%乙醇溶解定容至50 mL，待測。

1.3 測定方法

1.3.1 標準曲線的繪制

以蘆丁為標準品、70%乙醇為溶劑，準確配制0.13 mg·mL-1的蘆丁標準溶液。精確量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL蘆丁標準溶液置于10 mL具塞試管中，加30%(體積分數)乙醇至5 mL；再加5%(質量濃度)NaNO20.3 mL，搖勻，放置6 min；再加10%(質量濃度)Al(NO3)30.3 mL，搖勻，放置6 min；再加4%(質量濃度)NaOH 4 mL；用蒸餾水稀釋至10 mL，室溫放置15～20 min，以蒸餾水為空白。在波長510 nm處測定吸光度，由最小二乘法得濃度與吸光度標準曲線方程，并據此計算黃酮類化合物含量[4]。

1.3.2 銀杏外種皮總黃酮的含量測定

準確量取1 mL銀杏外種皮總黃酮提取液，置于具塞試管中，按1.3.1法測定吸光度，由標準曲線方程計算黃酮類化合物的濃度，進而計算銀杏外種皮總黃酮的含量。

1.3.3 銀杏外種皮提取液黃酮類化合物的含量測定

準確量取1 mL銀杏外種皮提取液，置于具塞試管中，按1.3.1法測定吸光度，由標準曲線方程計算黃酮類化合物的濃度，進而計算銀杏外種皮提取液黃酮類化合物的含量。按下式計算黃酮類化合物的提取率(%)：

2 結果與討論

2.1 標準曲線方程

用最小二乘法對標準曲線進行線性回歸，得線性方程：

Y=0.09894A+0.00180(R=0.9995)

式中：Y為蘆丁標準溶液濃度，mg·mL-1，A為吸光度。

2.2 銀杏外種皮總黃酮的含量

按1.3.2方法，測得銀杏外種皮總黃酮的含量為30.78 mg·g-1。

2.3 銀杏外種皮黃酮類化合物的提取效果比較(表1)

表1 不同溶劑、不同方法銀杏外種皮黃酮類化合物的提取率比較/%

由表1可以看出，從溶劑方面比較，乙醇的提取率最高；從提取方法比較，回流提取法提取率最高。因此，以乙醇作為溶劑、采用回流提取法提取銀杏外種皮黃酮類化合物的提取效果最好，提取率超過84%。

2.4 重復性實驗

以乙醇為提取溶劑，采用回流提取法進行3次平行實驗，提取率分別為84.60%、84.53%、84.71%，平均提取率為84.61%，標準偏差為0.0009，RSD為0.10%。表明所確定的最佳方法的重復性良好。

3 結論

比較了不同溶劑、不同方法對銀杏外種皮黃酮類化合物的提取效果。結果表明，以乙醇作為提取溶劑，采用回流提取法提取銀杏外種皮黃酮類化合物的效果最好，提取率超過84%，標準偏差為0.0009，RSD為0.10%。為銀杏外種皮資源的開發利用提供了依據。

[1] 馮彤，于新，吳建生，等.不同處理方法對銀杏外種皮黃酮含量變化的影響[J].農業工程學報，2006，22(4)：178-181.

[2] 李春美，何靜仁，杜紅祥，等.銀杏果外種皮總黃酮提取工藝研究[J].食品科學，2002，23(12)：70-74.

[3] 唐于平，樓鳳昌，王歡，等.銀杏外種皮的化學成分和藥理作用[J].藥學進展，2000，24(3)：152-155.

[4] 盧錦花，胡小玲，岳紅，等.大孔吸附樹脂對銀杏葉黃酮類化合物吸附及解吸的研究[J].化學研究與應用，2002，14(2)：164-166.