MM P-7和 HGF在白血病中的表達及其相關性研究

李 慧 ,田黎明 ,徐王月王月 ,蘇雪瑩

(佳木斯大學附屬第一醫院,黑龍江 佳木斯 154003)

白血病是造血干細胞的惡性克隆性疾病,與多發性骨髓瘤和淋巴瘤共同組成血液系統三大惡性腫瘤,發病率為2.76/10萬,與亞洲國家相近,稍低于歐洲國家水平。在惡性腫瘤死亡率中 ,白血病居第6位 (男性 )和第8位(女性),在兒童及35歲以下成人中則居第1位。其重要生物學特征是白血病細胞的侵襲和轉移。所以近幾年尋找能反映白血病細胞侵襲和轉移的標記物成為研究的熱點。肝細胞生長因子(HGF)來源于間質細胞,其受體是原癌基因 C-met的產物。HGF是組織細胞分泌的含728個氨基酸的無活性的單鏈前體蛋白經胰蛋白酶樣水解酶作用裂解成有活性的二聚體即肝素結合糖蛋白[1]。研究證明 HGF/C-met不僅參與調節正常細胞粘附、分化和遷移,也參與其惡性轉化。基質金屬蛋白酶(MM Ps)家族在正常骨髓中通過調整骨髓細胞外基質的結構調節多種細胞的生長增殖分化粘附和遷移等[2],是目前已知的唯一能夠降解膠原纖維的酶類。由于他們對細胞外基質的降解,從而更利于腫瘤細胞的侵襲和轉移。其家族成員MM P-7更是在腫瘤細胞的凋亡中起了重要的作用。本實驗中,我們用酶聯免疫法檢測 HGF和 MM P-7在白血病中的表達及研究它們的相關性。從而探討它們與白血病發生發展的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

50例白血病患者外周血均取自 2010— 05～ 2011— 09佳木斯大學附屬第一醫院血液科,其中男 21例,女29例,年齡18～ 79歲,中位年齡48.5歲。白血病患者中初治 31例,復發19例。50例白血病患者均經療程的化療治療后依據其骨髓細胞學分析分為 CR28例和 PR22例。白血病患者診斷標準參照張之南主編 《血液病診斷及療效標準(第 3版)》,40例對照組標本取自同期佳木斯大學第一附屬醫院生化實驗室。

1.2 實驗方法

所有標本均經室溫下放置 2h后于 1000g離心20min,取上清液,將標本放置于-20℃保存。用酶聯免疫方法檢測MM P-7和 HGF在白血病患者外周血中的表達用純化的抗體包被微板孔,制成固相載體,依次加入標本或標準品、生物素化的抗 MM P-7(或 HGF)抗體、HRP標記的親和素、經徹底洗滌后用底物 TM B顯色。試劑盒購自天津索羅門生物科技有限公司。

1.3 結果判定標準

TM B在經過氧化物酶的催化下轉成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色深淺與標本中 (HGF或 MM P-7)的量成正相關。

1.4 統計學處理

采用 SPSS17.0軟件包進行統計學分析,數據資料進行 t檢驗及 Spearman相關分析,α=0.05作為檢驗水準。

2 結果

2.1 MM P-7在白血病外周血清中的表達

白血病患者外周血中 HGF與 MM P-7的表達明顯高于對照組 (P＜0.05)。白血病組中,AM L與 ALL中的表達無顯著差異性 (P＞ 0.05);AM L與 CM L中的表達無顯著差異性 (P＞ 0.05);ALL與 CM L中的表達無顯著差異性(P ＞ 0.05)。見表1。

表1 HGF及 MMP-7在各型白血病組及對照組中的表達 ±s)

表1 HGF及 MMP-7在各型白血病組及對照組中的表達 ±s)

#P＜0.05,compared with the control group

2.2 MMP-7與 HGF在白血病患者外周血中的表達相關性分析

HGF與 MM P-7在白血病患者外周血清中的表達呈正相關 (r= 0.303,P＜0.05),且二者關系程度較密切。

2.3 HGF與 MM P-7在初治組與復發組中的表達

白血病患者初治組與復發組患者外周血中 HGF與MM P-7的表達差異不顯著,無統計學意義 (P＞ 0.05)。見表2。

表2 HGF及 MMP-7初治組及復發組中的表達 ±s)

表2 HGF及 MMP-7初治組及復發組中的表達 ±s)

2.4 CR組與 PR組的比較

MM P-7與 HGF在白血病 CR組中的表達水平高于 PR組,差異具有統計學意義 (P ＜0.05)。(見表3)

表3 HGF及 MMP-7在 CR組及 PR組中的表達 ±s)

表3 HGF及 MMP-7在 CR組及 PR組中的表達 ±s)

3 討論

本研究測定了白血病患者外周血清中 MMP-7和 HGF的水平。實驗結果表明,白血病患者血清中 HGF和 MM P-7的水平均明顯高于對照組且 CR組 MM P-7和 HGF的表達水平明顯低于 PR組,差異具有顯著性。根據 Liotta曾提出腫瘤轉移的“三步驟”假說[3],惡性腫瘤細胞要想發生、發展、侵襲與轉移所必須要攻克的屏障即是基底膜與細胞外基質。MM Ps是骨髓微環境的重要組成部分,在正常的生理條件下以酶原的形式直接分泌到細胞外基質,通過對除多糖外的大多數細胞外基質的降解而促進腫瘤細胞對周圍組織的浸潤[4]。另外,MM P-7通過作用于多種刺激信號而啟動凋亡程序發揮抗凋亡作用,其如 Fas程序。腫瘤細胞或正常細胞表面的跨膜 Fas配體(mFasl)通過與 MM P-7作用而產生可溶性 Fas配體(sFasl)保護腫瘤細胞逃避由 fas介導的細胞凋亡過程[5]。在許多實體瘤中,MMP-7蛋白的高表達與惡性腫瘤化療療效相關[6]。其機制可能與 MMp-7的抗凋亡作用有關。同時 MMP-7缺少基質金屬蛋白酶組織抑制劑(TIM P)在 MM Ps家族的作用靶點 C末端區域,所以目前對MM P-7的抑制劑正有待研究。所以認為 MM P-7在白血病中的作用機制、發生、發展、轉移乃至白血病患者的治療上都有較廣闊的研究空間。HGF通過分解 IV型膠原、破壞基底膜,然后穿過內皮細胞進入血管內,從而增強癌細胞的運動能力,加速癌細胞的血管內游走和惡性腫瘤的遠處轉移[7]。Pepper[8]認為 HGF主要是上調尿激酶及受體的基因表達水平,導致細胞產生過多的尿激酶,引起細胞外基質的(ECM)局灶性降解,有利于細胞的浸潤和轉移。另外 HGF在促進腫瘤血管的發生中起到了積極地作用:HGF與內皮細胞表面受體 c-Met結合可激活受體酪氨酸激酶,使β亞基磷酸化,直接誘導血管內皮的增殖及遷移,同時參與血管內皮細胞的修復。除此之外,HGF增強內皮細胞在模擬血管生成的胞外微環境(如三維膠原)中管狀結構形成的能力。

MM P-7和 HGF分別通過各自的方式直接或間接參與了腫瘤細胞的浸潤和轉移。且共同降解細胞外基質。HGF和其特異性受體 c-met通過特有的信號傳導途徑促進 MMP的表達。Morishita[9]等研究發現,HGF在體外誘導人皮膚微血管內皮細胞和冠狀動脈內皮細胞 M T1-MM P的生成,同時可以激活 MMP-2的活性。MM P-7由于其能夠抑制腫瘤細胞凋亡,激活其他 MM P成員(MM P-2,MMp-9等 )和滅活 serpins(絲氨酸蛋白酶抑制劑),而被認為與腫瘤細胞轉移直接相關。本實驗研究表明 MM P-7與 HGF在白血病患者外周血中的表達呈正相關,所以我們推測白血病患者外周血中 HGF與 mmp-7之間存在一種必然聯系共同作用于白血病細胞而促進其增殖及浸潤,二者之間具體的作用機制需要更進一步的研究。HGF及 MM P-7在白血病患者中的測定有望成為白血病的早期診斷及治療提供新的理論依據及治療新靶點。

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