黃芪注射液預處理對大鼠缺血再灌注后神經功能評分的影響

王淑賢,原德新

(1.佳木斯大學第一附屬醫院婦產科,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯大學基礎醫學院組胚教研室,黑龍江 佳木斯 154007)

腦卒中分為缺血性腦卒中和出血性腦卒中,其中以缺血性腦卒中占 80%左右[1]。當今社會缺血性腦卒中是威脅人類健康的主要疾病之一,我國為腦卒中高發國家,2009年我國缺血性腦卒中發生者達 160萬人,在生存者中,75%留有不同程度的殘疾,給社會、家庭和個人帶來很大的經濟負擔和巨大的精神壓力。缺血性腦卒中的發病率逐年呈上升的趨勢,發病的年齡越來越趨向于年輕化,逐漸威脅中老年人群的健康問題。黃芪注射液是從黃芪中提取的有效成分精制而成的,其主要成分有:黃酮類、多糖、氨基酸、黃芪皂苷、微量元素等物質,在體內能清除氧自由基,抗氧化損傷及促進Na+-K+-ATP酶活性等作用,對腦缺血再灌注后腦損傷有保護作用。本實驗通過建立大鼠大腦中動脈栓塞模型,探討黃芪注射液預處理對大鼠腦缺血再灌注后的神經功能評分的影響。

1 材料和方法

1.1 材料

動物:雄性 Wistar大鼠,體重 (250±30)g,佳木斯大學實驗動物中心提供。藥物:黃芪注射液由上海福達制藥有限公司生產;水合氯醛購自北京鼎國生物公司。儀器:眼科手術剪;眼科手術鑷等。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組和給藥:實驗前自行飼養 7d,隨機分為 3組,分別為:正常對照組(即 A組 ,10只);假手術組(即 B組,10只,僅分離血管 ),腦缺血再灌注組 (即 C組,10只 )、黃芪注射液預處理組 (即 D組,10只)。 C組與 D組術前 7天開始用黃芪注射液 4.5g/kg腹腔注射,每日一次,共 7次。A組與B組用等量的生理鹽水腹腔注射。C組與 D組大鼠于腦缺血2h再灌注 24h后取材。

1.2.2 模型的建立:采用改良的 Longa[2]模型建立大鼠大腦中動脈缺血 /再灌注線栓法模型,大鼠用 10%水合氯醛(0.35mL/100g)腹腔注射麻醉后,頸正中剪開,分離出左側頸總動脈、頸內動脈和頸外動脈并結扎頸總動脈和頸外動脈,用動脈夾夾閉頸內動脈,用眼科剪將頸總動脈距離分叉2mm處剪一小口,選擇合適的魚線型號,插入魚線,深度18mm左右,稍遇到阻力后 ,結扎頸內動脈 ,縫合(留一部分魚線在皮膚外易于拔線)。假手術組僅分離出頸總動脈、頸內動脈和頸外動脈 ,不結扎血管。C組和 D組于缺血 2h將魚線退至頸內動脈與頸總動脈分叉處,再灌注 24h后取材。參照Zea-longa的分級標準進行評分:1～ 3分者入組 ,死亡和不合格的動物隨機替補。

1.2.3 神經功能評分:參照 Zea-longa的分級標準進行行為學評分:0分,無神經缺損體征;1分,不能充分屈曲右側前爪;2分,向右側轉圈;3分,向右側傾倒;4分,不能自發行走,意識喪失。各組大鼠于拔線后 2h進行神經功能評分。

1.3 統計學分析

數據均用 SPSS17.0統計軟件包進行統計,各組計量數據以± s表示。 各組數據的顯著性比較 ,采用 studen’tt檢驗,多組間比較采用單因素方差分析。以 P＜0.05為有統計學差異。

2 結果

黃芪注射液預處理對腦缺血再灌注后神經功能評分的影響:正常對照組和假手術組均未出現神經功能障礙,腦缺血再灌注組和黃芪注射液預處理組均有神經功能障礙;與腦缺血再灌注組相比,黃芪注射液預處理組可以明顯降低腦缺血 2h再灌注 24h的神經功能評分,有顯著統計學差異(P ＜0.01),結果見表1。

表1 黃芪注射液預處理對腦缺血再灌注后大鼠神經功能評分的影響(±s,n=10)

表1 黃芪注射液預處理對腦缺血再灌注后大鼠神經功能評分的影響(±s,n=10)

◆P ＜ 0.01,vs A組和 B組;★P ＜ 0.01,vs C組。

3 討論

大腦中動脈栓塞模型被普遍認為是局灶性腦缺血的標準模型[3～6],理由是:大鼠的腦血管也有 Wllis環,解剖結構與人類較接近;血管損傷部位較恒定、重復性好;可行性強、操作簡單;費用低;大鼠飼養管理方便、體重小;大鼠腦體積小易于固定和免疫組織化學分析;純種鼠近親交配,品種相對一致等方面[7]。腦缺血再灌注損傷可以引起神經功能障礙,主要表現有:對側肢體無力,出現運動及感覺障礙,尤其以運動障礙最為明顯[8]。參照再 Zea-Longa評分標準,對栓塞大腦中動脈的大鼠進行神經功能評分,結果顯示:黃芪注射液預處理組能明顯降低大鼠腦缺血 2h再灌注 24h的神經功能評分,改善神經功能。本實驗為臨床上使用黃芪注射液來減少神經元損傷促進其功能恢復提供實驗基礎。

[1] 楊彬源.促紅細胞生成素在腦缺血再灌注損傷中對神經元線粒體的影響及作用機制的研究 [D].廣州:廣州醫學院,2009

[2] Longa EZ,Weinstei PR,Carlson S,et al.Reversiber middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84-91

[3] 陶宗玉,李方成.大鼠局灶性腦缺血動物模型的研究進展 [J].中國微侵襲神經外科雜志,2004,9(8):377-379

[4] 吳松笛,耿曉英.改良線栓法制作大鼠局灶性腦缺血再灌注模型的實驗研究 [J].陜西醫學雜志,2006,35(10):1316-1318

[5] 張秋玲,孫遠標,李金國,等.局灶性腦缺血及鬧缺血再灌注模型的制作 [J].中國臨床康復,2006,38(10):106-109

[6] 劉昌云,林毅,許國英,等.大鼠大腦中動脈閉塞局灶腦缺血再灌注改良模型的建立 [J].福建醫科大學學報,2003,37(4):372-376

[7] 陳春富,郭述蘇.鼠局灶性腦缺血模型研究進展 [J].前衛醫藥雜志,1995,12(2):120-122

[8] Bickler PE.Clinical persoectives:neuroprotection lessons from hypoxia-tolerant organism[J].Exp Biol,2004,207(12):3243-3249