HPLC法測定穿龍骨刺膠囊中淫羊藿苷的含量

賓天海 黃健軍

1.廣西古方藥業(yè)有限公司，廣西 南寧 530221;2.廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西 南寧 530001

穿龍骨刺膠囊由穿山龍、淫羊藿、狗脊、川牛膝、熟地黃、枸杞子等6味藥組成的復(fù)方制劑，功能主要用于補(bǔ)腎，健骨，活血，止痛。用于骨質(zhì)增生，骨刺疼痛等。本方中淫羊藿含淫羊藿苷成分，淫羊藿苷為本方中有效成分之一。因此測定本品中淫羊藿苷的含量，可作為本品質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證藥品使用安全、有效，本文采用HPLC法測定了淫羊藿苷的含量。

1 儀器與試藥

LC－10AP型高效液相色譜儀 (日本島津公司);SPD－10Avp紫外－可見檢測器;LC－10ATVP7725(i)型手動進(jìn)樣器;威瑪龍色譜數(shù)據(jù)工作站;Aglient 8456紫外可見分光光度計;kh－250db型超聲處理器 (昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。

淫羊藿苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為:0737－200111(含量測定用 );穿龍骨刺膠囊 (購自A廠，共3批);甲醇、乙腈為色譜純;其余試劑為分析純，水為超純水。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜條件為:色譜柱為Dikma OP－ODS柱 (4.6×250mm，5μm);流動相為乙腈 －水 (30∶70)，流速為1.0ml/min，檢測波長為210nm，進(jìn)樣量為10μl;柱溫為室溫;理論塔板數(shù)按淫羊藿苷計算應(yīng)不低于5000。在上述色譜條件下，供試品中淫羊藿苷能完全分離，對照品與陰性對照品溶液中沒有峰重疊，色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含淫羊藿苷0.05mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇溶液20ml，具塞，稱定重量，超聲 (功率250W，頻率50kHz)40min。取出，放至室溫，稱重，用70%乙醇溶液補(bǔ)足損失的重量，用微孔濾膜 (0.45μm)濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，以上述色譜條件測定，根據(jù)淫羊藿苷峰面積，以外標(biāo)法計算供試品中淫羊藿苷含量。

2.5 線性關(guān)系考察 取濃度為0.512mg/ml淫羊藿苷對照品溶液，分別精密量取適量，分別加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.01024、0.0256、0.0512、0.0768、0.1024mg/ml的淫羊藿苷對照品溶液，分別進(jìn)樣10μl，按擬定的色譜條件測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)、淫羊藿苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算得回歸方程:r=9472.1X－6038.4，r=0.9998。結(jié)果表明:淫羊藿苷濃度在0.01～0.1mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗 取同一供試品溶液，精密量取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定淫羊藿苷峰面積，其RSD為1.13%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液 (批號:20091001)10μl，分別于0、4、8、12、16、24小時進(jìn)行測定，其峰面積RSD為1.11%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 陰性對照試驗 按處方比例取處方中缺淫羊藿的各味藥材，照制法制取缺淫羊藿陰性樣品。取陰性樣品按供試品溶液提取方法制成陰性對照溶液，測定，在上述色譜條件下，缺淫羊藿陰性對照溶液，在淫羊藿苷色譜峰處無干擾峰出現(xiàn)，表明對被測成分無干擾。

2.9 重復(fù)性試驗 取供試品10粒，取其內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取五份，每份約0.2g，按前述方法制成供試品溶液，按擬定的色譜條件測定峰面積，RSD%=1.31，表明重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗 采用加樣回收法，取已知含量的穿龍骨刺膠囊 (20091001)內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取6份，每份0.1g，分別添加已配制好的濃度為0.408mg/ml淫羊藿苷對照品溶液1ml，蒸干，按“供試品溶液制備”項下的方法制成供試品溶液。按擬定的色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.11 樣品中淫羊藿苷的含量測定 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液3批，按上述色譜條件測定，以外標(biāo)法計算，結(jié)果見表2。

表1 淫羊藿苷回收率試驗結(jié)果

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 流動相的選擇 參考文獻(xiàn) ［1］乙腈－水 (27∶73)溶液，乙腈－水 (30∶70)通過比較兩者不同配比下的分離效果，最終確定為乙腈－水 (30∶70)，此條件下，從色譜圖形分析看，淫羊藿苷拖尾因子較小，樣品分離效果好，陰性對照無干擾。

3.2 提取溶劑的選擇 以文獻(xiàn)［2］甲醇、70%乙醇和80%乙醇為提取溶劑時，都能充分提取樣品中的淫羊藿苷，考慮到甲醇的毒性，最終選用70%乙醇溶液為提取溶劑。

［1］劉燦輝，譚浩軍.高效液相色譜法測定老年咳喘片中淫羊藿苷含量［J］.中國藥業(yè)，2009，18(18):36.

［2］喻貴英，劉偉霞，郭平牯，等.穿龍刺骨片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.中國醫(yī)藥雜志，2004，1(6):231－234.