妊娠期甲型H1N1流感患者T淋巴細胞亞群變化

邸慶國，張 玲，孫寶華，呂 靜，遲玉敏，杜俊鳳，姜明明，王曉晟，李桂馨

(河北醫科大學附屬滄州市中心醫院，河北滄州061000)

2009年甲型H1N1流感具有以往流感相同的特點就是妊娠期婦女更易發展成重癥患者［1，2］。有報道稱妊娠期婦女患病住院率為普通人群的4倍［2］。本研究收集滄州地區兩家三級綜合醫院確診重癥/危重癥甲型H1N1流感病例56例，其中32例為妊娠期婦女，現對所有妊娠期病例資料進行整理分析，探討T淋巴細胞亞群在妊娠期合并重癥/危重癥甲型H1N1流感發病過程中的變化及其臨床意義。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 收集滄州地區兩家三級綜合醫院隔離病房2009年11月10日～12月31日收治確診重癥/危重癥甲型H1N1流感56例，選取其中妊娠期患者32例(A組)，年齡19～30歲。診斷標準參考衛生部辦公廳印發《甲型H1N1流感診療方案(2009年第三版)》標準。重癥與危重病例診斷依據:出現以下情況之一者為重癥病例:①持續高熱＞3 d;②劇烈咳嗽，咳膿痰、血痰，或胸痛;③呼吸頻率快，呼吸困難，口唇紫紺;④神志改變:反應遲鈍、嗜睡、躁動、驚厥等;⑤嚴重嘔吐、腹瀉，出現脫水表現;⑥影像學檢查有肺炎征象;⑦肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)等心肌酶水平迅速增高;⑧原有基礎疾病明顯加重。出現以下情況之一者為危重病例:①呼吸衰竭;②感染中毒性休克;③多臟器功能不全;④出現其他需進行監護治療的嚴重臨床情況。A組于入院當日或次日采血完成相關化驗檢測。正常妊娠組(B組):隨機抽取同期產科門診健康孕婦20例，無妊娠合并癥或并發癥，孕期未使用過激素治療。隨機選取同期我院健康未孕生育期護士20例作為正常對照組。各組間平均年齡、妊娠組檢測孕周無顯著性差異。

1．2 T淋巴細胞亞群測定 晨起采集所有檢測者外周靜脈血2 ml，加入EDTA抗凝管，充分混勻后取抗凝全血 100 μl，分別加入 20 μl鼠抗 IgG1-FITC/IgG1-PE/IgG1-PC5、CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5、CD3-FITC/CD16CD56-PE(試劑源于美國BD公司)，渦旋器充分混勻，閉光孵育20～40 min，加入紅細胞裂解液2 ml，閉光孵育10 min至液體透亮，離心，PBS緩沖液洗滌，過濾后，加入PBS緩沖液300 μl上流式細胞儀檢測。所用流式細胞儀FACS Calibur購自美國BD公司，數據獲取采用Cell Quest 3．2，檢測T淋巴細胞亞群和NK細胞。同時抽取孕婦靜脈血2 ml查血常規，以獲得外周血白細胞計數，計算出淋巴細胞絕對值，用淋巴細胞絕對值乘以各亞群細胞百分率計算各亞群的絕對值。

1．3 統計學方法 采用SPSS13．0統計軟件，計量資料用±s表示，兩組間比較用t檢驗，以P≤0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 各組外周血白細胞及分類比較 見表1。

2．2 各組T淋巴細胞亞群和NK細胞改變 見表2。

表1 各組外周血白細胞及分類比較(/μl，±s)

表1 各組外周血白細胞及分類比較(/μl，±s)

注:與對照組比較，*P ＜0．05;與B 組比較，△P ＜0．05

組別 白細胞 中性粒細胞 淋巴細胞 單核細胞A 組絕對值(×109/L) 6．76±3．30△ 5．79±4．28 0．71±0．14＊△ 0．10±0．13＊△百分比(%) — 87．62±3．98＊△ 9．99±3．93＊△ 1．04±1．56＊△B組絕對值(×109/L) 9．90 ±2．31* 7．25 ±2．71* 2．59 ±0．87 0．54 ±0．26*百分比(%) — 74．13±6．84* 18．37±5．23* 5．56±2．18對照組絕對值(×109/L) 7．26 ±1．51 4．78 ±3．69 2．61 ±0．45 0．36 ±0．16百分比(%) —57．95 ±5．68 33．24 ±4．60 5．38 ±3．54

表2 各組T淋巴細胞亞群和NK細胞改變(/μl，±s)

表2 各組T淋巴細胞亞群和NK細胞改變(/μl，±s)

注:與對照組比較，*P ＜0．05;與B 組比較，△P ＜0．05

組別 CD3 CD4 CD8 CD4/CD8 CD15+56 A 組絕對值(×109/L) 546±308＊△ 231±158＊△ 207±210＊△ — 96±52＊△百分比(%) 69．82 ±10．67 35．53 ±8．25 33．41 ±9．21＊△ 0．89 ±0．37＊△ 7．59 ±2．98＊△B組絕對值(×109/L) 1 203±523* 538±183* 364±106* — 204±113*百分比(%) 66．12 ±6．36 38．47 ±5．21 28．25 ±3．82 1．40 ±0．27* 11．48 ±6．86*對照組絕對值(×109/L) 1 559±502 988±360 542±178 — 520±98百分比(%) 62．60 ±8．43 40．03 ±7．84 22．06 ±4．78 2．07 ±0．46 21．57 ±8．13

3 討論

目前，世界范圍內流行的甲型H1N1流感是由人類甲型H1N1亞型的新病毒株引起的一種新型流感，大部分患者病情具有自限性，重癥和死亡病例多有并發癥或慢性基礎疾病。孕產婦感染甲型H1N1流感病情進展迅速，如出現肺炎或急性呼吸窘迫綜合征還可能危及孕產婦及胎兒的生命。

本組資料中甲型H1N1組白細胞總數與正常對照組比較無顯著差異，中性粒細胞百分比高于對照組，同時伴隨淋巴細胞百分比和絕對值的下降，單核細胞絕對值下降，推測中性粒細胞百分比的增加可能與后兩者絕對值的減少相關。正常妊娠組外周血白細胞總數增加，并以中性粒細胞增加為主伴單核細胞絕對值增加，而淋巴細胞百分比下降。Minagawa等認為，妊娠期粒細胞增加及淋巴細胞減少可能與母體交感神經興奮相關。張建平等［3］認為妊娠期粒細胞及單核細胞的增加與妊娠免疫耐受引起細胞免疫功能下降所致機體特異性免疫受到抑制，非特異性免疫代償性增強有關。H1N1妊娠組比正常妊娠組外周血淋巴細胞和單核細胞的絕對值、百分比均下降，提示H1N1病毒加劇妊娠母體外周血白細胞組分的不均衡，使機體細胞免疫功能進一步急劇下降，這種改變可能與妊娠期患者易發重癥相關。

研究已證實CD4+T細胞和細胞毒性T細胞(活化的CD8+細胞)是宿主肺部抵御感染的主要細胞，T淋巴細胞亞群測定可以比較準確的反應機體細胞免疫功能狀態。妊娠期T淋巴細胞亞群變化尚有爭議，本研究顯示正常妊娠較正常未孕婦女外周血中CD4+、CD8+T細胞、CD4/CD8比值、NK細胞均降低。推測妊娠期母體細胞免疫功能狀態受到一定抑制，這種改變可能與妊娠期免疫耐受相關。合并H1N1組比正常妊娠組上述指標進一步下降，這可能與外周血T細胞分布異常及淋巴細胞受到病毒攻擊有關，提示機體細胞免疫功能受到嚴重抑制，與文獻報道［4］相符。黃美先等［5］認為總 T 細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、NK細胞可能與疾病嚴重程度正相關。Stephen E等研究顯示孕婦淋巴細胞絕對值的減少及CD4/CD8比值的下降導致輔助T淋巴細胞減少，這部分效應被完全甚至過強的體液免疫所代替。Laibl等認為妊娠期肺炎病程較非妊娠期延長3倍，嚴重度增加9倍，需機械通氣比例更高，這與妊娠期輔助性T細胞數目減少和NK細胞活性降低有關［6］。流感病毒感染后的第1周內(急性期)以高病毒、高抗原濃度及高促炎因子濃度為特點［7］，這些抗原呈遞并推動效應性T細胞增值和分化，進而產生大量高度分化的T細胞，并積累到肺部發揮強大的效應功能，對于妊娠期婦女原本減少的淋巴細胞在此階段則不能充分發揮其固有免疫防御機制。提示妊娠期T淋巴細胞亞群改變可能是妊娠期婦女患重癥甲型H1N1流感肺炎的重要原因。

本研究結果提示，妊娠期免疫耐受所致細胞免疫功能抑制可能參與重癥H1Nl流感的發生發展過程，應用細胞免疫增強劑可能對疾病過程有積極影響。

［1］Saleeby E，Chapman J，Morse J，et al．H1N1 influenza in pregnancy:cause for concern ［J］．Obstet Gynecol，2009，114(4):885-891．

［2］Jamieson DJ，Honein MA，Rasmussen SA，et al．H1N1 2009 influenza virus infection during pregnancy in the USA ［J］．Lancet，2009，374(9688):451-458．

［3］張建平，陳立斌，王蘊慧，等．足月妊娠分娩發動時孕婦外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞的變化［J］．中山醫科大學學報，2002，23(4):245-247．

［4］Lapinsky SE．H1N1 novel influenza A in pregnant and immunocompromised patients［J］．Crit Care Med，2010，38(4 Suppl):e52-57．

［5］黃美先，朱婧，潘韻峰，等．重型甲型H1N1流感患者外周血免疫細胞變化及其臨床意義［J］．國際流行病學傳染病學雜志，2010，37(4):236-238．

［6］Laibl V，Sheffield J．The management of respiratory infections during pregnancy［J］．Immunol Allergy Clin North Am，2006，26(1):155-172．

［7］Wang JP，Kurt-Jones EA，Finberg RW．Innate immunity to respiratory viruses［J］．Cell Microbiol，2007，9(7):1641-1646．