腹腔液中單核細(xì)胞趨化蛋白－1水平與子宮內(nèi)膜異位癥

文 思，方小玲

（1.廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，廣東 廣州 510080；2.廣東省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廣州 510080；3.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖南 長沙 410011）

子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，內(nèi)異癥）是婦產(chǎn)科常見和多發(fā)的良性疾病，有學(xué)者認(rèn)為，內(nèi)異癥患者腹腔液中巨噬細(xì)胞的含量和活性增加，其所誘發(fā)的一系列免疫功能變化，在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用。單核細(xì)胞趨化蛋白－1(monocyteche motaticprotein-1，MCP-1)是最有效的單核/巨噬細(xì)胞趨化因子之一，是腹腔內(nèi)巨噬細(xì)胞增多的始動(dòng)因素之一。本研究通過用酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ELISA）法檢測內(nèi)異癥患者腹腔液中MCP-1的水平，了解其與內(nèi)異癥發(fā)病、疾病分期及月經(jīng)期別的關(guān)系，探討其在疾病發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象和分組

2005年7月—2006年2月中南大學(xué)湘雅附二院婦科經(jīng)腹腔鏡確診的內(nèi)異癥患者40例為研究組，同期因子宮肌瘤、卵巢良性腫瘤行腹腔鏡手術(shù)的非內(nèi)異癥患者40例為對(duì)照組。兩組患者年齡在14～45歲之間，月經(jīng)規(guī)律，術(shù)前至少3個(gè)月未經(jīng)任何內(nèi)分泌藥物治療、抗炎治療，均無內(nèi)分泌代謝性疾病、惡性腫瘤、結(jié)締組織病及乙型肝炎、結(jié)核等慢性疾病。研究組年齡為（30.10±0.86）歲，對(duì)照組年齡為（27.93±0.90）歲，兩組比較，差異無顯著性（P>0.05）。采用修訂后的美國生育協(xié)會(huì)內(nèi)異癥分期評(píng)分法（r-AFS）[1]，對(duì)研究組患者進(jìn)行分期，早期（Ⅰ～Ⅱ期，輕型）20例，晚期（Ⅲ～Ⅳ期，中重型）20例。根據(jù)末次月經(jīng)及月經(jīng)周期確定，研究組中19例患者手術(shù)時(shí)為增殖期，21例為分泌期；對(duì)照組中20例患者手術(shù)時(shí)為增殖期，20例為分泌期。

1.2 方法

（1）標(biāo)本的收集和處理：腹腔鏡手術(shù)常規(guī)置鏡后，于進(jìn)行手術(shù)操作開始前，直視下通過吸管吸取子宮直腸凹和膀胱子宮凹腹腔液。收集到的腹腔液立即于4℃下3000 r/min離心10min，取上清液少量分裝于－70℃冷凍保存待測。

（2）MCP-1的測定：采用雙抗體夾心橋聯(lián)親和素-生物素酶聯(lián)免疫吸附劑測定(A B C-E L I S A法，試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司)。按照人MCP-1定量E L I S A試劑盒所定程序，測定腹腔液MCP-1水平。將零孔設(shè)為空白對(duì)照，用酶標(biāo)儀在450 n m測定O.D.值，Well scanMK2酶標(biāo)儀帶有自動(dòng)軟件可進(jìn)行定量分析，直接得到相應(yīng)的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0f or windows軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料均以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)及單因素方差分析進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組腹腔液中MC P-1的含量

研究組腹腔液中MCP-1濃度高于對(duì)照組，差異有顯著性（P＜0.01），見表 1。

表1 對(duì)照組與研究組，腹腔液中MC P-1濃度（p g/mL）

2.2 腹腔液中MC P-1含量與內(nèi)異癥疾病分期的關(guān)系

研究組早期、晚期腹腔液中MCP-1濃度均高于對(duì)照組，差異均有顯著性（P＜0.01）。研究組早期腹腔液中MCP-1濃度高于晚期，差異有顯著性（P＜0.01），見表 2。

表2 對(duì)照組與研究組早期、晚期，腹腔液中MC P-1濃度（p g/mL）

2.3 兩組腹腔液中MC P-1含量與月經(jīng)期別的關(guān)系

對(duì)照組和研究組，不同月經(jīng)期別腹腔液中MCP-1濃度均無顯著性差異（P＞0.05），見表 3。

表3 對(duì)照組及研究組中，不同月經(jīng)期別，腹腔液中MC P-1濃度（p g/mL）

3 討論

3.1 MC P-1與內(nèi)異癥的關(guān)系

內(nèi)異癥患者腹腔液里觀察到的主要細(xì)胞是巨噬細(xì)胞，它是自然免疫系統(tǒng)的主要成分，在正常情況下，通過參與免疫反應(yīng)，清除月經(jīng)期逆流入盆腔的子宮內(nèi)膜碎片，以防止異位內(nèi)膜植入[2]。

MCP-1屬于C-C趨化因子（CCL2），是吸引單核細(xì)胞浸潤至腫瘤及組織中的有效介質(zhì)。它能募集外周血單核細(xì)胞遷移進(jìn)入腹腔，通過提高細(xì)胞膜對(duì)鈣的通透性而使單核細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加和呼吸爆發(fā)，產(chǎn)生并釋放超氧陰離子，釋放溶酶體酶，最終活化成為巨噬細(xì)胞，并能上調(diào)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞黏附分子的表達(dá)以及細(xì)胞因子I L-1，I L-6的產(chǎn)生，導(dǎo)致腹腔液中巨噬細(xì)胞的數(shù)量和活性增加。

本研究顯示（表1），內(nèi)異癥患者腹腔液中MCP-1濃度顯著高于對(duì)照組。腹腔液中高濃度的MCP-1能募集大量單核/巨噬細(xì)胞進(jìn)入腹腔，并激活巨噬細(xì)胞，導(dǎo)致腹腔中巨噬細(xì)胞的數(shù)量和活性明顯增加。而活化的巨噬細(xì)胞能分泌許多血管源性生長因子和其他細(xì)胞因子，其分泌的細(xì)胞因子刺激腹膜間皮細(xì)胞產(chǎn)生MCP-1[3，4]，巨噬細(xì)胞本身也可分泌高水平的 MCP-1[5]，又可募集血液中的其他單核/巨噬細(xì)胞不斷地遷入腹腔，并活化，從而形成一個(gè)正反饋級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)。

在這種情況下，腹腔液中被MCP-1活化的巨噬細(xì)胞喪失了正常情況下清除異位內(nèi)膜組織的功能，反而促進(jìn)異位子宮內(nèi)膜的種植和生長，參與內(nèi)異癥形成，提示MCP-1可能參與內(nèi)異癥的發(fā)病。

3.2 MC P-1與內(nèi)異癥疾病分期的關(guān)系

Y i n等報(bào)告，內(nèi)異癥Ⅰ期患者腹腔液中MCP-1濃度顯著高于對(duì)照組，但對(duì)照組與Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ期患者之間無顯著性差異[6]，Khaleque等報(bào)道，Ⅰ，Ⅱ期患者腹腔液中MCP-1濃度顯著高于非患者[7]，均提示MCP-1與疾病早期形成有關(guān)。

本研究顯示（表2），內(nèi)異癥患者腹腔液中MCP-1水平在疾病的早期、晚期均顯著高于對(duì)照組，雖然增高的幅度不同，但是仍然提示在內(nèi)異癥疾病過程中，腹腔液中MCP-1水平增高并不僅僅出現(xiàn)于早期，而是在疾病的全過程都持續(xù)增高，提示MCP-1可能參與內(nèi)異癥的發(fā)生。

Y i n等報(bào)告，Ⅰ期患者M(jìn)CP-1濃度高于Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ期，但是內(nèi)異癥各期之間無顯著性差異[6]；Khaleque等報(bào)道，Ⅰ，Ⅱ期患者腹腔液中MCP-1濃度顯著高于Ⅲ，Ⅳ期患者[7]；李紅等觀察到早期病例MCP-1濃度顯著高于晚期病例[8]；Pizzo等則指出從Ⅰ期、Ⅱ期到Ⅲ期，內(nèi)異癥患者腹腔液中MCP-1濃度逐漸增加[9]。可見，腹腔液中MCP-1濃度與內(nèi)異癥的疾病分期有沒有關(guān)系、有怎樣的關(guān)系，不同的研究者有各自不同的看法。

本研究顯示（表2），內(nèi)異癥早期患者腹腔液中MCP-1濃度顯著高于晚期。即在內(nèi)異癥發(fā)病的初始階段，腹腔液中MCP-1增高的幅度更加顯著，此時(shí)異位內(nèi)膜細(xì)胞的黏附、植入、異位病灶周圍血管化均處于關(guān)鍵時(shí)期。提示，MCP-1可能主要參與內(nèi)異癥的早期形成，有利于異位內(nèi)膜的黏附、植入、生長、侵襲，可能與內(nèi)異癥的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

3.3 MC P-1與月經(jīng)期別的關(guān)系

Y i n等認(rèn)為，腹腔液中MCP-1濃度，在各組患者中，均與所處月經(jīng)期別無關(guān)[6]；Khaleque卻指出，在對(duì)照及各組患者中，分泌期腹腔液中MCP-1濃度均高于增殖期[7]。

本研究顯示（表3），內(nèi)異癥組和對(duì)照組、增殖期與分泌期，腹腔液中MCP-1水平均無顯著差異，支持Y i n等的觀點(diǎn)。內(nèi)異癥是一種雌激素依賴性疾病，但本研究的證據(jù)提示，內(nèi)異癥組和對(duì)照組，月經(jīng)期別均與腹腔液中MCP-1水平無顯著相關(guān)。

4 結(jié)論

MCP-1可能參與內(nèi)異癥的發(fā)病，并與內(nèi)異癥的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。內(nèi)異癥組和對(duì)照組，月經(jīng)期別均與腹腔液中MCP-1水平無顯著相關(guān)。

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[9]Pizzo A，Salmeri FM，Ardita FV，et al.Behaviour of Cytokine Levels in Serumand Peritoneal Fluid of Women with Endometriosis.Gynecol Obstet Invest，2002，54:82-87.