環氧合酶-2與子宮內膜異位癥血管形成相關性研究

馮曉娜，杜佳秋

（佳木斯大學附屬第一醫院婦產科，黑龍江 佳木斯 154002）

子宮內膜異位癥（endometriosis，EMs）是育齡婦女的常見病，其所表現的痛經和不孕嚴重威脅著廣大育齡女性的身心健康。雖然內異癥是一種良性婦科疾病，但它的某些生物學行為卻與惡性腫瘤類似，特別是其組織侵襲和血管生成能力，但其病因及發病機制尚未完全闡明，主導理論是1927年Sampson提出的經血逆流的子宮內膜種植學說。但是大量的研究已證實：經血逆流是一種育齡女性經期常見的生理現象，發生率高達70%～90%，而只有10%～15%的患者發生內異癥，提示經血逆流只是誘因，而闡明異位內膜黏附、侵襲和血管形成等機制才是認識內異癥發生、發展的關鍵。環氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）是催化膜磷脂花生四烯酸轉化為前列腺素類物質的限速酶，這些代謝產物在炎癥、腫瘤、免疫、過敏等病理過程中起著重要作用。炎癥過程中前列腺素的產生主要由COX-2來催化合成，而炎性前列腺素則被認為是促血管生成原。一些研究認為，COX-2參與子宮內膜異位癥的血管形成，與EMs密切相關。血管形成在EMs的發病中具有重要作用，其中，血管內皮生長因子（vascularendothelial growth factor，VEGF）作為特異性的內皮細胞有絲分裂素，是最為關鍵的血管形成因子，它可以刺激血管內皮細胞生長和體內新生血管形成，通過自分泌與旁分泌的方式調控異位病灶的種植與發展。隨經血逆流入腹腔的子宮內膜附著在腹膜和其他部位時，異位內膜本身及其周圍組織新血供的建立和維持是子宮內膜異位種植成活和EMs發生的基本條件。已有研究表明，COX-2和VEGF在包括乳腺癌、消化道腫瘤、泌尿生殖系統腫瘤、腦腫瘤以及肺癌在內的多種腫瘤中明顯增高，并與其生物學行為相關，但與子宮內膜異位癥的關系報道較少。為此，醫院采用免疫組織化學方法檢測COX-2和VEGF在EMs組織中的表達，探討COX-2和VEG F之間的相互關系，以及COX-2對EMs組織血管形成的影響，為子宮內膜異位癥的病因及靶向治療提供一條新的線索。

1 資料與方法

1.1 一般資料

（1）異位內膜組：選擇佳木斯大學附屬第一醫院2011年1月—2011年6月入院EMs患者32例，年齡27～45（平均36.7）歲。術后病理檢查證實為子宮內膜異位，并且異位病灶組織內可見完整的腺體和間質。同時選用在位及異位內膜標本32份，其中增生期14例，分泌期18例。

（2）正常對照組:因子宮肌瘤行子宮切除術后取子宮內膜的患者共33例（病理檢查顯著增生期內膜18例，分泌期內膜15例），年齡40～56（平均49.8）歲。后病理證實為正常子宮內膜組織。

兩組年齡分布、內膜分期無明顯差異（P>0.05）。所有納入實驗的患者無內分泌疾病及其他內外科疾病，術前6個月內均未接受過非甾體類激素藥物治療、放置宮內節育器及放、化療，子宮內膜無病理改變。內膜分期及病理結論由病理科醫師判斷及復核。

1.2 結果判斷

用定位定性法，低倍鏡下觀察切片5個視野，取其平均值為每張切片的觀察結果，根據染色強度與范圍作出每張切片分級。結果評定方法：COX-2、VEG F陽性效應產物為棕黃色顆粒，分布于胞漿。以細胞漿著色程度（淺、中、深）及計數100個細胞中的陽性細胞數來判定。組織學評定：陰性（-）：細胞無著色，記分為0分；弱陽性（+）：細胞輕度著色染成淡黃色，陽性細胞數<25%，記分為1分；陽性（++）：細胞著色染成黃色，陽性細胞數25%～50%，記分為2分；強陽性（+++）：細胞明顯著色，呈棕黃色，陽性細胞數>50%，記分為3分。其中，陰性、弱陽性、陽性和強陽性，分別表示不表達、弱表達、中度表達和強表達。結果判斷在雙盲下進行，每張切片有兩位病理醫師分別計數。

1.3 統計學處理

免疫組化測定結果應用SPSS for windows 11.0統計分析軟件進X2檢驗和spearman等級相關分析，P<0.05為差異有顯著性。

2 結果

2.1 子宮內膜異位癥患者異位與在位內膜及對照組正常子宮內膜COX-2的表達

無論在位與異位內膜，COX-2的染色主要定位于腺體細胞的胞質，間質細胞染色差異較大，不計入陽性計數。32例異位內膜中，有26例COX-2表達為陽性；32例在位內膜中，有20例COX-2表達為陽性；33例對照組正常子宮內膜中，有18例COX-2表達為陽性。見表1。

表1 COX-2在E Ms組織及對照組織中的表達

注：異位內膜與在位內膜相比*P<0.01，差異有顯著性。異位內膜與正常內膜相比**P<0.01，差異有顯著性。在位內膜與正常內膜相比***P>0.05，差異無顯著性。

COX-2在對照組正常子宮內膜、EMs患者在位內膜、異位內膜組織中的表達陽性率分別為54.5%、62.5%、81.25%，呈現逐漸升高，差異具有顯著意義（P<0.01）。異位內膜組與在位內膜組COX-2表達差異具有顯著意義（P<0.01）；異位內膜組與正常內膜組COX-2表達差異具有顯著意義（P<0.01）；在位內膜組與正常內膜組COX-2表達差異無顯著意義（P>0.05）。

2.2 COX-2的表達與月經周期的關系

在EMs中的異位內膜組織不隨月經周期而發生變化，大部分為增生期改變，推測其機制可能是月經周期的激素調控機制可能無法影響COX-2的表達，但其具體機制還需要其他相關試驗的進一步證明。33例正常子宮內膜，增生期18例中有9例COX-2表達為陽性，分泌期15例中有9例COX-2表達為陽性。32例EMs在位內膜，增生期14例中有8例COX-2表達為陽性，分泌期18例中有12例COX-2表達為陽性。見表2。

正常子宮內膜中COX-2的表達，分泌期陽性率60%，增生期陽性率50%，兩者比較差異具有顯著意義（P<0.01），EMs在位內膜中的COX-2的表達，分泌期陽性率66.67%，增生期陽性率

表2 COX-2的表達與月經周期的關系

2.3 子宮內膜異位癥患者異位與在位內膜及對照組正常子宮內膜VEG F的表達

無論在位與異位內膜，VEG F染色主要定位于腺體細胞的胞質，同時也分散存在于周圍間質細胞及血管內皮細胞的胞漿中，但是為弱著色，不計入陽性計數。32例異位內膜中，有30例VEG F表達為陽性；32例在位內膜中，有19例VEG F表達為陽性；33例對照組正常子宮內膜中，有17例VEG F表達為陽性。見表3。

表3 VEG F在E Ms組織及對照組織中的表達

VEG F在對照組正常子宮內膜、EMs患者在位內膜、異位內膜組織中的表達陽性率分別為51.51%、59.38%、93.75%，呈現逐漸升高，差異具有顯著意義（P<0.01）。異位內膜組與在位內膜組VEG F表達差異具有顯著意義（P<0.01）；異位內膜組與正常內膜組VEG F表達差異具有顯著意義（P<0.01）；在位內膜組與正常內膜組VEG F表達差異無顯著意義（P>0.05）。

2.4 VEG F的表達與月經周期的關系

33例正常子宮內膜，增生期18例中有9例VEG F表達為陽性，分泌期15例中有8例VEG F表達為陽性。32例EMs在位內膜，增生期14例中有6例VEG F表達為陽性，分泌期18例中有13例VEG F表達為陽性，見表4。

正常子宮內膜中VEG F的表達，分泌期陽性率53.33%，增生期陽性率50%，兩者比較差異具有顯著意義（P<0.01），EMs在位內膜中的VEG F表達，分泌期陽性率72.22%，增生期陽性率42.86%，兩者比較差異具有顯著意義（P<0.05），EMs在位分泌期內膜的VEG F的表達高于正常分泌期內膜，差異具有顯著意義（p<0.05）。

表4 VEG F的表達與月經周期的關系

2.5 COX-2與VEG F在子宮內膜異位癥中表達的關系

COX-2表達陽性的EMs異位內膜組織中，VEG F的陽性表達率為100%（26/26）；COX-2表達陰性的EMs異位內膜組織中，VEG F的陽性表達率為66.67%（4/6），等級相關分析表明，兩者的表達有相關性（r=0.78，P<0.01），見表 5。

表5 COX-2與VEG F在E Ms組織中的表達等級相關分析

3 本的收集和處理：腹腔鏡手術常規置鏡后討論

COX-2被認為是一種快速反應基因，在大多數正常組織中活性很低，較少表達，但在細胞受到各種刺激，如炎性介質、生長因子、細胞因子、促癌劑等的誘導下迅速合成，參與炎癥過程和腫瘤的細胞增殖與分化過程。本實驗中，COX-2在EMs組織中的陽性表達率明顯高于正常對照組，提示COX-2可能對EMs的發生發展有重要作用，與Ota等實驗結果相符，Ota等認為，異位的子宮內膜COX-2的過度表達及活性異常導致前列腺素合成異常，可能是EMs表現為炎癥及慢性疼痛的主要原因，并促進了其病理生理過程。

VEG F是一種高度特異性的血管內皮細胞有絲分裂原，與以血管過度生成為特點的病理過程密切相關。本實驗研究發現，VEGF染色主要定位于腺體細胞的胞質，同時也分散存在于周圍間質細胞及血管內皮細胞的胞漿中。其在正常內膜中的陽性表達率為51.51%，其中分泌期與增殖期相比P<0.05，差異有顯著意義，與Smith等研究結果相符。EMs患者在位內膜和對照組正常內膜的VEG F在分泌期腺上皮的染色強度明顯升高，提示在分泌期內膜種植更易于成功。內異癥組在位內膜VEG F表達增強，說明這種血管生成活性增強的子宮內膜返流入腹腔后，可能比正常子宮內膜更容易刺激周圍腹膜形成新的血管，從而使患病的可能性增加。VEG F的高表達使病灶部位有著更為豐富的血管生成，這位異位內膜的種植和存活提供了物質條件，而另一方面，異位內膜的生長可以表達更多的VEG F，又進一步促進血管增生，形成了一種惡性循環。

Mestre等報道，COX-2可使腫瘤中的VEG F表達上調，抑制COX-2則可抑制VEG F的表達。其機制為一些細胞因子誘導COX-2表達上調后可能通過增高的PG上調了VEG F的表達，VEGF又通過旁分泌或自分泌的形式作用于子宮內膜細胞，刺激血管生成。通過本文研究，可以為子宮內膜異位癥的治療提供一條新思路。