HPLC法測定癸氧喹酯固體分散體有關物質及其含量

肖 芳，周 霽，嚴少康，黎璐平，劉永瓊

(武漢工程大學化工與制藥學院，綠色化工過程省部共建教育部重點實驗室，湖北省新型反應器與綠色化學工藝重點實驗室，湖北 武漢 430074)

0 引 言

癸氧喹酯(decoquinate)為喹啉類抗球蟲病藥，能阻斷蟲體線粒體電子傳遞鏈中輔酶Q10與細胞色素b之間的電子轉運，抑制柔嫩艾美耳球蟲的呼吸作用，使球蟲不能正常發育，從而起到抗球蟲的作用.癸氧喹酯常用于防治雞的柔嫩、毒害、堆型、巨型、變位和布氏艾美耳球蟲等引起的球蟲病，另外，癸氧喹酯對隱孢子蟲引起的動物腹瀉也可以起到緩解和治療作用[1-2].由于癸氧喹酯不溶于水和大多數有機溶劑，目前國內市場上銷售的制劑品種只有癸氧喹酯的預混劑.本文通過藥物制劑新技術將難溶性的癸氧喹酯制成固體分散體可改善其在水中的溶解度，從而提高其生物利用度.為了制定其科學合理的質量控制方法，參照相關文獻[3-6]，建立了高效液相色譜法對癸氧喹酯固體分散體中的有關物質及含量進行分離、測定.

1 實驗部分

1.1 儀器

高效液相色譜儀(DIONEX，P680 HPLC PUMP)；色譜柱(C185μm，4.6×250mm，Dionex)；UV-VIS8500型紫外可見分光光度計(上海天美科學儀器有限公司)；KQ5200DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)； SZ-93自動雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)；臺式干燥箱(中外合資重慶四達實驗儀器有限公司)；電熱鼓風干燥箱(重慶銀河試驗儀器有限公司).

1.2 材料與試劑

癸氧喹酯原料藥(浙江新三和動物保健品有限公司提供，批號：20080501，質量分數98.00%)；癸氧喹酯對照品(本實驗室精制，質量分數99.20%)；癸氧喹酯固體分散體(自制，批號：20080517，20080519，20080521)；藥用鋁箔袋(昆山市天地包裝材料有限公司)；甲醇(色譜純，國藥集團化學試劑有限公司)；二氯甲烷(分析純，天津市福晨化學試劑廠)；氯化鈣(分析純，天津博迪化工有限公司)；娃哈哈純凈水.

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 溶劑的制備 二氯甲烷-無水甲醇(1∶6)溶液(每1 000 mL溶劑加入10 g氯化鈣).

2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱取樣品適量(約相當于癸氧喹酯40 mg)置于100 mL容量瓶，加少量溶劑超聲使之完全溶解，用溶劑稀釋至刻度，精密量取10 mL于100 mL容量瓶，用溶劑定容即得(質量濃度40 μg/mL).

2.1.3 對照品溶液的制備 精密稱取約40 mg癸氧喹酯對照品置于100 mL容量瓶，加少量溶劑超聲使完全溶解，用溶劑稀釋至刻度，精密量取10 mL于100 mL容量瓶，用溶劑定容，即制成質量濃度為40 μg/mL的對照品溶液.

2.2 色譜條件

用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以無水甲醇為流動相；流速為1.0 mL/min；柱溫為30 ℃；進樣量為20 μL；檢測波長為267 nm；理論塔板數不低于1 500.

2.3 方法學考察

2.3.1 空白溶劑及空白輔料的干擾實驗 在色譜條件2.2下，分別測定空白溶劑、對照品溶液、空白輔料溶液、供試品溶液的高效液相色譜圖(圖1～4).由圖1可知空白溶劑的保留時間為2.8 min，不干擾樣品測定.由圖2可知：癸氧喹酯的保留時間為4.8 min，用面積歸一化法測定癸氧喹酯對照品含量為99.23%，理論塔板數>1 500.由圖3、4可知溶液中輔料及其他雜質與癸氧喹酯可完全分離，不干擾樣品測定.

圖1 空白溶劑HPLC色譜圖

圖2 對照品溶液HPLC色譜圖

圖3 空白輔料HPLC色譜圖

圖4 供試品溶液HPLC色譜圖

2.3.2 檢測線 取癸氧喹酯對照品溶液，逐級稀釋，分別取樣20 μL注入液相色譜儀，直至主峰峰高為基線噪音的3倍，結果表明，最低檢測限為0.05 μg/mL.

2.3.3 專屬性實驗a.酸破壞實驗.酸溶液的配制：取5 mL HCl和5 mL的無水乙醇混勻配制成體積分數50%濃鹽酸乙醇溶液作為酸溶液.

精密稱取樣品(批號：20080517)適量(約相當于癸氧喹酯50 mg)置于100 mL容量瓶，加少量溶劑超聲溶解后溶劑定容，然后用移液管移取2 mL于25 mL容量瓶中，加2 mL酸溶液，靜置，避光放置24 h，溶劑定容，取20 μL進樣，照2.2項色譜條件測定，結果見圖5.

圖5 酸破環實驗

b.堿破壞實驗.堿溶液的配制：取適量NaOH溶于無水乙醇中，配置成過飽和NaOH溶液作為堿溶液.

精密稱取樣品(批號：20080517)適量(約相當于癸氧喹酯50 mg)置于100 mL的容量瓶，加少量溶劑超聲溶解后溶劑定容，然后用移液管移取2 mL于25 mL容量瓶中，加2 mL堿溶液，靜置，避光放置24 h，溶劑定容，取20 μL進樣，照2.2項色譜條件測定，結果見圖6.

圖6 堿破壞實驗

c.高溫破壞實驗.精密稱取樣品(批號：20080517)適量(約相當于癸氧喹酯50 mg)置于100 mL的容量瓶中，加少量溶劑超聲溶解后溶劑定容，然后用移液管移取1 mL于25 mL容量瓶中，置于(105±1) ℃下4 h，再用溶劑定容，取20 μL進樣，照2.2項色譜條件測定，結果見圖7.

圖2～7表明：癸氧喹酯對酸、堿、熱較穩定，降解產物與癸氧喹酯分離良好，說明該色譜條件能較好的對本品進行有關物質檢查.

2.3.4 線性關系考察 精密量取適量的癸氧喹酯對照品，以二氯甲烷和甲醇的混合溶液(比例為1∶6，每1 000 mL加入10 g氯化鈣)為溶劑，配成系列濃度的標準品溶液(1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50 μg/mL)，分別進樣20 μL，照2.2項色譜條件測定，以樣品濃度(C)為橫坐標，峰面積(A)為縱坐標進行線性回歸，其方程為：A=1.647 9C-0.354(R2=0.999 8，n=11).表明癸氧喹酯的含量在1.0～50 mg/mL之間具有良好的線性關系.

圖7 高溫實驗

2.3.5 回收率與精密度實驗

a.回收率實驗.按照癸氧喹酯固體分散體的處方比例，配制對照品和輔料溶液，混勻，用溶劑配成含癸氧喹酯質量濃度為10、20、30 μg/mL的溶液，每次進樣20 μL，每種質量濃度的溶液進樣三次，測定結果見表1.由表1結果計算其回收率分別為101.8%、101.2%、100.9%，在98%～102%之間，表明此法準確度高，符合定量分析的要求.

表1 回收率實驗結果

b.精密度實驗.精密量取適量的癸氧喹酯對照品，以二氯甲烷和甲醇的混合溶液(比例為1∶6，每1 000 mL加入10 g氯化鈣)為溶劑，配制質量濃度為20 mg/mL的溶液，進樣量為20 mL，注入液相色譜儀中，進樣6次，照2.2項色譜條件測定，由表2結果計算其標準偏差S= 0.177 607(n=6)和相對標準偏差RSD=0.84%(n=6)，由RSD=0.84%<2%[7]，知精密度良好.

表2 精密度實驗結果

2.4 樣品含量測定

取三批放大樣品(批號：20080517；20080519；20080521)適量，加二氯甲烷和甲醇(1∶6)的混合溶液(1 000 mL加入10 g氯化鈣)適量使之溶解，稀釋成約40 μg/mL的溶液，取樣20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍，以外標法計算癸氧喹酯固體分散體的含量.測定結果見表3.

表3 含量測定實驗結果

結果表明，本品三批樣品的含量均在標示量的95%～105%范圍之內.

3 結 語

a.方法學考察結果說明在建立的色譜條件下，系統適用性良好，線性、溶液穩定性、精密度、回收率均好.

b.建立的高效液相色譜法對癸氧喹酯固體分散體中的有關物質及含量進行分離、測定，能準確檢測樣品中的有關物質，輔料無干擾，且操作簡便、方法可行、準確度高.不同批號的癸氧喹酯固體分散體樣品測定結果表明，癸氧喹酯含量穩定，可用于質量控制.

c.由專屬性結果顯示，降解產物與癸氧喹酯分離良好，說明該色譜條件能較好的對本品進行有關物質檢查.

參考文獻：

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