脂必泰膠囊中紅曲的含量測定＊

溫中明 ，張 法 ，黃 毅 ，謝 靜 ，羅江秀 ，魏照星 ，原文鵬

(1.廣東省深圳市光明新區公明人民醫院藥劑科，廣東 深圳 518106;2.廣東省深圳市沙灣醫院藥劑科，廣東 深圳 518114;3.廣東省深圳市人民醫院·暨南大學第二臨床醫學院藥學部，廣東 深圳 518020)

紅曲為禾本科植物稻 Oryza satira L.的種子經人工接種紫紅曲霉菌 Monascus Purpureus Went.發酵后打粉而成，在我國食品和醫藥上的應用至少有1 800年的歷史[1-2]。近年來，我國應用現代科技手段模擬古代紅曲生產工藝，以紅曲發酵而得的特制紅曲提取物生產了一些新制劑并應用于臨床。脂必泰膠囊是我國開發的含紅曲的新型中藥制劑，對高脂血癥的臨床療效肯定[3]，其調血脂的主要有效成分已明確為在發酵過程中產生的天然成分洛伐他汀(lovastatin)[4]。筆者建立了測定脂必泰膠囊中洛伐他汀含量的高效液相色譜法，對于確保制劑質量、充分發揮其療效具有重要意義，現報道如下。

1 儀器與試藥

戴安Ultimate 3000型高效液相色譜儀;Diode Array二極管陣列檢測器;XS205型電子天平(瑞士梅特勒-托利多集團);KQ2200B型超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)。洛伐他汀對照品(中國藥品生物制品檢定所，含量為99.4%，批號為100600-200301);脂必泰膠囊(成都地奧九泓制藥廠，批號分別為080105，090103，090204);甲醇為色譜純，乙醇等試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

取脂必泰膠囊6粒，將內容物混合均勻，取約0.15 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加75%乙醇約80 mL，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)10 min，取出，冷至室溫，加75%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。精密稱取洛伐他汀對照品0.011 83 g，置25 mL量瓶中，加入75%乙醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為0.473 2 g/L的對照品溶液。取按處方及制法制成缺紅曲的陰性對照樣品，取相當于供試品0.15 g的量，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.2 樣品處理方法選擇

2.2.1 提取方法和提取時間

取脂必泰膠囊(批號為080105)6粒，傾出內容物混合均勻，取約0.15 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加75%乙醇80 mL，分別超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)10，20，30 min和回流提取20，40，60 min，取出，放冷，加75%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，分別測定洛伐他汀的含量。結果見表1。可見，超聲20，40，60 min所得供試品溶液中洛伐他汀含量無明顯差異，而超聲10 min與回流提取20 min結果相當，因此選擇超聲提取10 min。

表1 樣品提取方法和時間考察

2.2.2 提取溶劑

取脂必泰膠囊(批號為080105)內容物約0.15 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，分別加30%乙醇、75%乙醇、95%乙醇、甲醇溶劑各20 mL，超聲(功率500 W，頻率40 kHz)處理10 min，取出，冷至室溫，加相應溶劑至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，分別測定洛伐他汀的含量。結果采用30%乙醇、75%乙醇、95%乙醇、甲醇為提取溶劑時，洛伐他汀的含量分別為 2.9，8.0，7.5，8.4 mg/粒。從環境保護和資源節約角度考慮，選取75%乙醇作為提取溶劑。

2.3 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，即Dionex-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 -水(75∶25);流速:1 mL/min;柱溫:22℃;檢測波長:236 nm;進樣量:10 μL;定量方法:外標法。在此色譜條件下，洛伐他汀峰無雜質干擾，峰形對稱，保留時間適中，色譜圖見圖1。

2.4 方法學考察

線性關系考察:分別精密吸取對照品溶液25，50，100，250，500，1 000 μL，置1 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液各10 μL，依次進樣、測定，記錄峰面積積分值(A)，以峰面積積分值為縱坐標、進樣質量濃度(C)為橫坐標，得洛伐他汀回歸方程 A=531.97 C-0.506 2，r=0.999 9(n=3)。結果表明，洛伐他汀質量濃度在0.011 83～0.473 2 g/L范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

圖1 高效液相色譜圖

重復性試驗:取樣品(批號為080105)內容物約0.15 g，共6份，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定含量。結果樣品中洛伐他汀含量為8.3 mg/粒，RSD為1.0%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:取樣品(批號為080105，含量為8.344 mg/粒)約0.075 g，共6份，分別精密加入2.502 g/L的對照品溶液1 mL，按含量測定方法測定，計算回收率。結果見表2。

表2 洛伐他汀加樣回收試驗結果(n=6)

穩定性考察:取樣品(批號為080105)約0.3 g，依法制備供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，10 h 時進樣測定。結果平均峰面積為30.466 3，RSD為0.8%(n=6)，表明供試品溶液在制備后10 h內基本穩定。

2.5 樣品含量測定

取樣品3批，依法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，依法測定，用外標法計算洛伐他汀的含量。結果見表3。

表3 樣品含量測定結果

3 討論

用二極管陣列檢測器采集3D數據，洛伐他汀對照品溶液和供試品溶液色譜圖中，洛伐他汀色譜峰的最大吸收波長為235.9 nm。綜合考慮，選用236 nm為檢測波長。用二極管陣列檢測器采集3D數據，檢查峰純度，結果供試品溶液色譜中洛伐他汀峰的純度因子在±50%峰寬處值均大于比閾值900，表明該峰純度良好，出峰位置無其他雜質。

參照文獻[5]以甲醇-水-磷酸(72∶28∶0.5)為流動相Ⅰ，參考文獻[6]以甲醇-水(75∶25)為流動相Ⅱ，分別進行色譜分析，結果對照品溶液及供試品溶液中洛伐他汀色譜峰純度均達到要求，對照品峰均能達到基線分離、峰形對稱。鑒于流動相Ⅱ配制簡便，且甲醇較乙腈價廉、毒性小，故選擇流動相Ⅱ。

對樣品采用直接的處理方法，與文獻[5-6]相比更簡單，雖未過中性氧化鋁柱和堿化處理，但分離效果較好且基線平穩，譜峰尖銳，測定結果較滿意。

脂必泰膠囊是復方中藥制劑，國家藥品標準[7]規定含量測定指標是熊果酸。但脂必泰膠囊中治療高脂血癥的主要成分是紅曲，紅曲中調血脂活性成分主要是洛伐他汀[4]。因此，對洛伐他汀進行含量測定是控制脂必泰膠囊質量的必然方法。本試驗建立的方法樣品的處理簡單，操作簡便、重復性好、結果準確，適用于脂必泰膠囊中洛伐他汀的含量測定。

[1]李 東，劉 源，謝 靜，等.紅曲的起源、分類學及生藥學鑒定[J].中國藥業，2009，18(3):1-2.

[2]李 東，謝 靜，王 敏，等.紅曲起源新考[J].中藥材，2007，30(4):484-487.

[3]魯衛星，王俊顯，朱建貴，等.脂必妥膠囊治療高脂血癥多中心臨床試驗[J].中國新藥與臨床雜志，1999，18(6):365-367.

[4]宓鶴鳴，宋洪濤，陳 磊，等.紅曲中降血脂活性成分的研究[J].中草藥，1999，30(3):172-174.

[5]羅仁才，孫開奇，謝申猛，等.紅曲中洛伐他汀總量的測定方法[J].衛生研究，2003，32(2):157-158.

[6]張小茜，周富榮，石濟民.高效液相色譜法測脂必泰膠囊及紅曲中洛伐他汀的含量[J].中國中藥雜志，1997，22(4):222-224.

[7]WS3-119(Z-119)-2004(Z)，衛生部頒國家藥品標準[S].