原子吸收分光光度法測定骨碎補藥材中的重金屬＊

王永來，熊明玲，陳紅軍

(廣州中醫藥大學附屬深圳市中醫院藥學部，廣東 深圳 518033)

骨碎補(Rhizoma Drynariae)為水龍骨科植物槲厥 Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm的干燥根莖，具有補腎強骨、續傷止痛的功效，是我國名貴中草藥之一。隨著中醫中藥的快速發展，國際需求的日益增加，以及我國綠色中藥材的興起，建立中藥材中重金屬殘留限量檢測方法、制定合適標準，已成為緊迫工作[1]。在中藥材重金屬殘留檢測方面，我國規定的有鉛(Pb)、鎘(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、銅(Cu)等元素。骨碎補是我院傳統制劑滋腎降糖丸的君藥，2009年深圳市科技計劃立項完善其質量標準。筆者參考文獻[2]采用原子吸收分光光度法和原子熒光光譜法對10批不同產地的骨碎補藥材進行上述5種元素的重金屬殘留量分析，旨在了解市售骨碎補的安全性，為藥材的質量控制提供科學依據。現報道如下。

1 儀器與試藥

消解罐為XK96-A型快速混勻器(姜堰市新康醫療器械有限公司);Hitachi 180-80型原子分光光度儀(日立);AFS-820型雙道原子熒光光度計(北京吉天儀器有限公司)。鉛、鎘、砷、汞、銅單元素標準溶液(廣東省藥品檢驗所提供);骨碎補藥材，購自藥材市場或采自中藥材基地;硝酸(色譜純)，高氯酸(色譜純)，鹽酸，硫脲(分析純)和抗壞血酸(分析純)，購自汕頭化學試劑廠。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

本試驗應用硝酸-高氯酸進行濕法消化，有效消除了有機成分對測定結果的影響[3]。精密稱取骨碎補樣品粉末2 g，置100 mL錐形瓶中，加入15 mL硝酸和3 mL高氯酸，用小漏斗蓋住瓶口，浸泡24 h后，置消解罐上，調節溫度至120℃，消解至硝酸揮發完畢(即紅棕色氣體揮發完畢，此過程中溫度不能超過140℃)，再將溫度升高至170℃，使高氯酸分解、揮發，待錐形瓶中酸液揮發完畢，用3%鹽酸溶解剩余物，并沖洗錐形瓶合并洗液，定容至25 mL，靜置，使溶液自然沉淀澄清，上清液即為測定用的供試品溶液。

2.2 方法學考察

線性關系考察:將各單元素標準溶液用3%鹽酸溶液分別稀釋成一定濃度的標準貯備液，并按2005年版《中國藥典(一部)》附錄[4]規定的方法進行稀釋(分別作6個以上的測定濃度)，分別測定各自的吸光度(A)并繪制標準曲線，結果鉛(Pb)、鎘(Cd)、銅(Cu)、砷(As)、汞(Hg)分別在 0 ～40.0 μg/mL，0 ～32.0 μg/mL，0 ～80.0 μg/mL，0 ～40.0 μg/mL，0～60.0 μg/mL 質量濃度范圍內與吸光度線性關系良好，標準曲線方程分別為 APb=0.0072CPb+0.005 6(r=0.998 6)，ACd=0.002 3CCd+0.002 9(r=0.996 6)，ACu=0.006 9 CCu+0.009 3(r=0.998 6)，AAs=0.001 9CAs+0.002 5(r=0.996 7)，AHg=0.003 2CHg+0.005 1(r=0.996 9)。

檢測限確定:分別對已消化處理的空白溶液進行20次重復測定，以空白信號標準偏差(S)的3倍計算其檢測限。結果銅、鎘、銅、砷、汞的檢測限分別為 0.000 7，0.000 9，0.000 6，0.0005，0.000 8 μg/mL。

精密度試驗:分別精密量取線性關系考察項下的鉛、鎘、銅、砷和汞標準液各10.0 μg/mL，分別在各自最佳測定條件測定吸光度。結果鉛、鎘、銅、砷和汞精密度的 RSD分別為1.2%，0.6%，1.4% ，0.7%，0.8%(n=5)。

重現性試驗:取同一批(廣東河源)樣品，依法平行制備5份供試品溶液并測定吸光度。結果鉛、鎘、銅、砷和汞的 RSD分別為1.7% ，1.5%，1.6%，1.3% ，1.4%(n=5)。

穩定性試驗:精密量取線性關系考察項下的鉛、鎘、銅、砷和泵的標準液各 10.0 μg/mL，分別于各自最佳測定條件下的 0，1，2，4，8，10 h時測定吸光度。結果鉛、鎘、銅、砷和泵的 RSD分別為0.7%，0.9%，0.8%，0.6%，0.5%(n=6)，表明溶液在10 h內穩定。

加樣回收試驗:精密取已知鉛、鎘含量的同一批樣品(廣東河源骨碎補)適量，分別精密加入高、中、低3個量級的鉛、鎘標準液各2份，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定。結果見表1。同法對廣東河源骨碎補分別加銅、坤、汞高、中、低3個量級標準溶液各2份，依法測定。結果銅的平均回收率為98.22%，RSD=1.67%;砷的平均回收率為97.63%，RSD=1.66%;汞的平均回收率為98.06%，RSD=1.92%。

表1 鉛、鎘加樣回收試驗結果(n=6)

2.3 樣品含量測定

采用原子吸收分光光度法測定樣品中銅、鉛、鎘的含量，采用原子熒光光譜法測定樣品中砷、汞的含量，經試驗選擇的最佳測定條件見表2和表3。按線性關系考察項下方法測定，每個樣品10次重復，利用標準曲線方程，根據所測吸光度得供試品溶液質量濃度，再換算得所測中藥中銅、鉛、鎘的含量[5]，結果見表4。取2.1項下供試品液2 mL，置10 mL試管內，加入1 mL還原劑(2.5 g硫脲+2.5 g抗壞血酸，用超純水定容50 mL，現用現配)，再加入7 mL 3%的鹽酸溶液，用震蕩混勻器混勻，作為供試品溶液。按砷、汞標準曲線制備方法測定，每種樣品均重復3次測定，取均值作為測定結果。結果見表4。可見，10批骨碎補中重金屬殘留量測定結果銅為 2.687 5～8.521 7 mg/kg，鎘為 0.200 6～0.270 8 mg/kg，鉛為 0.250 4～1.000 mg/kg，汞為 0.003 4～0.029 4 mg/kg，砷為0.006 6～0.053 3 mg/kg。

表2 原子吸收法測定銅、鉛、鎘的最佳測定條件

表3 雙道原子熒光光譜法測定砷、汞的最佳測定條件

表4 10批骨碎補中重金屬殘留量(mg/kg)

3 討論

2005年版《中國藥典(一部)》和香港《中成藥注冊申請手冊》有關重金屬標準規定:鉛(Pb)≤5.0 mg/kg，鎘(Cd)≤0.3 mg/kg，汞(Hg)≤0.2 mg/kg，砷(As)≤2.0 mg/kg，銅(Cu)≤20.0 mg/kg。本研究結果顯示，由全國各地收集的10批骨碎補藥材樣品中，5種重金屬的殘留量均符合此規定[2]，且比闞連娣等[6]用同一方法對瓜蔞中鉛、鎘和汞的含量測定更全面，更能反映所測中藥材中的重金屬殘留量。

2005年版《中國藥典(一部)》首次對西洋參、白芍、甘草、丹參、金銀花、黃芪等提出了重金屬和有害元素的限量要求，而其他藥材尚未涉及，還需進一步完善。根據本研究結果，建議對骨碎補提出重金屬限量要求:銅(Cu)≤9.00 mg/kg，鉛(Pb)≤1.00 mg/kg，鎘(Cd)≤0.30 mg/kg，汞(Hg)≤0.03 mg/kg，砷(As)≤0.06 mg/kg。

中藥材重金屬殘留來自內源和外源，中藥內源的重金屬是植物吸收來自土壤、水源的重金屬，外源污染主要來自藥材加工、運輸和生產過程，控制中藥材重金屬殘留要從這兩方面因素著手。

[1]張春盛，吳舜芳，林炳國.西洋參等8種中藥中重金屬檢測[J].中國藥業，2009，18(17):20.

[2]趙德華，李居安，楊天壽.原子吸收分光光度法測定復方甘草片中重金屬的含量[J].中國藥房，2010，21(48):4 599-4 600.

[3]韓麗琴，董順福，劉建華.中藥柴胡中K、Ca、Zn、Fe和Mn含量測定及清除自由基機制分析[J].光譜實驗室，2007，24(2):78-80.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:43-44.

[5]王新平.火焰原子吸收光譜法測定中草藥刨花中的8種微量元素[J].光譜學與光譜分析，2005，25(2):293.

[6]闞連娣，巢志茂.原子吸收分光光度法對瓜蔞中鉛、鎘和汞的含量測定[J]. 中國中藥雜志，2007，32(12):1 238.