離子色譜法測(cè)定牛黃上清丸中二氧化硫殘留量＊

喬蓉霞，楊瑞瑞，劉海靜，袁向輝

(1.陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西 西安 710061;2.陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046)

牛黃上清丸是傳統(tǒng)中成藥，具有清熱瀉火、散風(fēng)止痛的功效，主要用于熱毒內(nèi)盛、風(fēng)火上攻所致頭痛眩暈、目赤耳鳴、咽喉腫痛、口舌生瘡、牙齦腫痛、大便燥結(jié)等證，由人工牛黃、薄荷、菊花、荊芥穗、白芷、黃連、黃芩、黃柏、川芎、梔子、大黃、連翹、赤芍、當(dāng)歸、地黃、桔梗、甘草、石膏、冰片加工而成[1]。2010年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄以蒸餾法作為二氧化硫殘留量的測(cè)定方法。筆者建立了測(cè)定牛黃上清丸中二氧化硫殘留量的離子色譜法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Dionex ICS-1100型離子色譜儀;電導(dǎo)檢測(cè)器;萬(wàn)能粉碎機(jī);水蒸氣蒸餾裝置;超純水系統(tǒng)(TTL-10B)。氫氧化鉀、亞硫酸鈉、乙二胺四乙酸、硫代硫酸鈉、碘、淀粉均為分析純;實(shí)驗(yàn)用水均為電阻率為18.2 MΩ·cm的去離子水;硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心(編號(hào)為 0942，標(biāo)示值為 1 000 μg/mL)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:AS-11-HC陰離子分析柱(250 mm×4 mm)，保護(hù)柱為AG-11-HC(50 mm×4 mm);淋洗液:20 mmol/L氫氧化鉀溶液，等度淋洗;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:25 μL 。

2.2 溶液制備

取硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，用去離子水逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度分別為500，300，200，150，100，50，30，20，10，5，3，2，1，0.5，0.3，0.2，0.1 μg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。取牛黃上清丸(大蜜丸，約6 g)1粒，剪碎，精密稱定，置水蒸氣蒸餾裝置的樣品瓶中，加水20 mL潤(rùn)濕，使其分散，在100 mL量瓶中加入3%的雙氧水20 mL作為接收液，吸取鹽酸5 mL快速加入樣品瓶，立即密封，進(jìn)行水蒸氣蒸餾;至接收瓶中液體接近100 mL時(shí)，停止蒸餾，取下接收瓶;用去離子水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):用牛黃上清丸組方中含有的菊花(未熏硫)作陰性對(duì)照，按供試品溶液制備方法同法制成陰性對(duì)照品溶液，依法測(cè)定。由圖1可見(jiàn)，沒(méi)有經(jīng)過(guò)硫磺薰制的菊花中未檢出二氧化硫。

圖1 離子色譜圖

線性關(guān)系考察:將2.2項(xiàng)下不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣25 μL，以峰面積和進(jìn)樣量繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，硫酸根進(jìn)樣量在0.1～500 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.999 9。

精密度試驗(yàn):取已制備好的同一對(duì)照品溶液，平行進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積分別為 453.7，473.2，456.9，479.6，451.1，456.8，RSD 為2.58%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取已制備好的同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果峰面積分別為 438.3，449.0，435.7，449.2，457.6，450.2，RSD為1.83%(n=6)，表明供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批牛黃上清丸，依法平行制備6份供試品溶液并測(cè)定。結(jié)果樣品中二氧化硫平均含量為24.18 μg/g，RSD為4.51%(n=6)，表明方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱定無(wú)水亞硫酸鈉，以0.05%乙二胺四乙酸溶解，臨用前用碘量法標(biāo)定[2]，以二氧化硫計(jì)質(zhì)量濃度為0.474 0 g/L。取牛黃上清丸1粒(約6 g)，精密稱定，用滴定管分別精密加入亞硫酸鈉對(duì)照品溶液0.4，1.2，6.0 mL，按供試品溶液的制備與測(cè)定方法每個(gè)質(zhì)量濃度平行操作3份，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

取6批樣品，依法檢測(cè)其中二氧化硫殘留量。結(jié)果批號(hào)為1002114，90603，90603，15057，15060，7015101 的 6 批樣品中，二氧化硫殘留量分別為 32，37，11，24，14，8 mg/kg，RSD 分別為 1.3%，0.9% ，1.3%，1.2% ，0.7%，1.0% 。

3 討論

牛黃上清丸的生產(chǎn)工藝是將方中飲片粉末研細(xì)、過(guò)篩、混勻后加煉蜜制成，其中甘草、當(dāng)歸、菊花、白芷、桔梗等中藥飲片在傳統(tǒng)加工過(guò)程中常采用硫磺熏蒸以達(dá)到潔白、防蟲(chóng)、防霉的效果，導(dǎo)致這些飲片中殘留有二氧化硫。而牛黃上清丸是以飲片粉末直接投料制成的，硫磺熏蒸過(guò)的飲片會(huì)將殘留的二氧化硫帶入到制劑中。二氧化硫多以結(jié)合態(tài)的亞硫酸鹽存在，亞硫酸鹽具有一定的毒性，可與蛋白質(zhì)的巰基發(fā)生可逆反應(yīng)，刺激消化道黏膜，服用后會(huì)出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹瀉等癥狀，進(jìn)而導(dǎo)致免疫力下降;過(guò)量攝入亞硫酸鹽，會(huì)影響人體對(duì)鈣的吸收，并破壞B族維生素;長(zhǎng)期攝入則會(huì)對(duì)肝臟造成損害[3]。目前，亞硫酸鹽的安全性問(wèn)題已引起廣泛關(guān)注，因此各國(guó)紛紛限定食品和藥品中二氧化硫和亞硫酸鹽的殘留量。目前我國(guó)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)對(duì)食品中亞硫酸鹽的允許量(GB 2706-1996)和檢測(cè)方法(GB/T 5009.34-1996)均作出了規(guī)定[4]。

加樣回收試驗(yàn)時(shí)，將硫酸根與亞硫酸根的量均折算成二氧化硫后計(jì)算;試驗(yàn)用水必須為電導(dǎo)率大于18 MΩ的超純水，樣品瓶及容量瓶都必須用超純水蕩洗;水蒸氣蒸餾法對(duì)樣品進(jìn)行提取時(shí)，應(yīng)注意密封。所建立的方法操作簡(jiǎn)便快速、干擾少、易于掌握，測(cè)定的精密度較好。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:554.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:894.

[3]陳飛東，戴志遠(yuǎn).食品中亞硫酸鹽測(cè)定方法的研究進(jìn)展[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2006，27(8):139-142.

[4]鐘志雄，梁春穗，杜達(dá)安，等.離子色譜法測(cè)定食品中亞硫酸鹽的應(yīng)用研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2003，13(1):29-32.