補虛顆粒對乙酰苯肼和環磷酰胺致血虛小鼠的補血作用研究

李春雷 ，劉 菁 ，朱雪松 ，李 鵬 ，鄭 芳 ，朱 瑜 ，周丹丹

(1.湖北醫藥學院附屬東風醫院中藥分析實驗室，湖北 十堰 442008;2.湖北醫藥學院藥檢學院2005級學生，湖北 十堰 442000)

補虛顆粒由黃芪、當歸、牛膝、防風4味中藥制成，具補氣養血、活血化瘀以及調節產婦分娩后虛證等功效。為了闡明該制劑的藥理作用，為臨床應用提供依據，筆者通過小鼠皮下注射乙酰苯肼和環磷酰胺建立小鼠血虛模型，研究補虛顆粒對血虛模型小鼠的“補虛”功效。

1 材料與方法

1.1 動物、試藥與儀器

昆明種SPF級小鼠，雌性，體重(20±2)g/只(湖北醫藥學院動物實驗中心，動物質量合格證號為NO00001675);補虛顆粒(湖北醫藥學院附屬東風醫院自制，每1 g相當于生藥3 g，批號為071229)，復方阿膠漿(山東阿膠股份有限公司，批號為080212)，乙酰苯肼(上海三愛試劑有限公司，批號為20020920)，環磷酰胺(江蘇恒瑞制藥有限公司，批號為07120721);POCH-100i型全自動血液分析儀(日本Sysmex)。

1.2 方法

試驗方法參照文獻[1]，稍有改動。將60只小鼠隨機分成6組，即正常對照組(A組)、生理鹽水組(B組)、復方阿膠漿組(C組)和補虛顆粒低、中、高劑量給藥組(D，E，F組)，每組10只。A組小鼠予正常飲食和水，不作任何處理;B組(陰性對照組)予生理鹽水0.03 mL/g，灌胃給藥;C組予復方阿膠口服液0.03 mL/g，灌胃給藥;D組(5 g/kg)予補虛顆粒0.03 mL/g，灌胃給藥;E組(10 g/kg)予補虛顆粒0.03 mL/g，灌胃給藥;F組(20 g/kg)予補虛顆粒0.03 mL/g，灌胃給藥。分組標記后，均連續給藥7 d。除A組外，各組小鼠分別于第2天、第4天皮下注射乙酰苯肼20 mg/kg和40 mg/kg，第4天腹腔注射環磷酰胺40 mg/kg，連續4 d。末次給藥2 h后從各組小鼠眼眶靜脈取血，檢測其白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血紅蛋白(Hb)和血小板(Plt)變化。用脊椎脫臼法將小鼠全部處死，取其胸腺和脾臟，稱重，根據公式計算胸腺指數和脾臟指數。胸腺或脾臟指數=胸腺或脾臟濕重(mg)/體重(g)×100%。

1.3 統計學方法

數據應用SPSS 11.5軟件統計分析，各組數據結果以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用 t檢驗。

2 結果

2.1 對血虛小鼠體重、胸腺、脾臟的影響

隨著所予乙酰苯肼和環磷酰胺量的增加，各組小鼠呈現不同程度的精神萎靡，活動減少，聚堆，蜷臥，嗜睡，飲食減少，毛色失去光澤，皮膚呈現不同程度的蒼白，尾色蒼白，陰性對照組血虛癥狀最明顯。陰性對照組小鼠的給藥后體重、胸腺指數和脾臟指數均較正常對照組低，具有統計學差異(P＜0.05)，說明環磷酰胺發揮了免疫抑制作用，小鼠血虛模型成功建立;與陰性對照組比較，復方阿膠漿組和補虛顆粒部分劑量組的給藥后體重、胸腺指數、脾臟指數有統計學差異(P＜0.05)，表明補虛顆粒能夠改善免疫抑制劑對血虛小鼠免疫器官的抑制作用。結果見表1。

表1 補虛顆粒對化學損傷性血虛小鼠體重、胸腺、脾臟的影響(±s)

表1 補虛顆粒對化學損傷性血虛小鼠體重、胸腺、脾臟的影響(±s)

注:與 A組比較，＊P＜0.05;與B組比較，△P＜0.05(下表同)。

組別A組(n=10)B組(n=10)C組(n=10)D組(n=10)E組(n=10)F組(n=10)給藥前體重(g)21.60±3.02 22.16±2.72 22.35±2.10 23.22±1.40 22.60±1.74 23.45±2.75給藥后體重(g)28.18±2.75 24.68±2.70＊25.75±1.59 26.44±1.60 26.34±1.37 27.85±1.34△胸腺指數0.245 7±0.03 0.196 9±0.05＊0.238 1±0.02△0.240 8±0.05△0.212 6±0.07 0.231 8±0.08△脾臟指數0.372 7±0.05 0.221 9±0.03＊0.617 7±0.08△0.602 6±0.13△0.565 5±0.11△0.594 7±0.03△

2.2 對血虛小鼠外周血的影響

試驗完畢檢測小鼠外周血常規各項指標，結果見表2。與正常對照組比較，陰性對照組各項指標均低于正常對照組，具有統計學差異(P＜0.05)，說明環磷酰胺和乙酰苯肼顯著抑制了小鼠的造血功能，本試驗所建立的血虛小鼠模型是可靠的。與陰性對照組比較，復方阿膠漿組和補虛顆粒中、高劑量組小鼠的外周血紅細胞、血紅蛋白、白細胞和血小板計數均明顯升高，具有統計學差異(P＜0.05)，提示補虛顆粒能夠改善免疫抑制劑對小鼠外周血的破壞作用，具有一定的補血功效。

表2 補虛顆粒對化學損傷性血虛小鼠的外周血的影響(±s)

表2 補虛顆粒對化學損傷性血虛小鼠的外周血的影響(±s)

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3 討論

中醫血虛的臨床證候與現代醫學的貧血癥狀有相似之處，血虛與貧血的主要臨床指征紅細胞計數和血紅蛋白值之間均存在著相關性[2]。因此，常采用現代手段模擬中醫血虛研究補虛的機理或藥物等。環磷酰胺作為細胞毒藥物，可以損傷外周血細胞和骨髓細胞，特別是白細胞損傷更明顯，乙酰苯肼能夠緩慢而專一地損傷紅細胞，兩者聯用共同損傷機體的血液系統，小鼠皮下注射兩藥能較好地反映中醫血虛的癥候。從試驗結果分析，聯合應用環磷酰胺和乙酰苯肼所建立的小鼠血虛模型是成功的，而補虛顆粒能改善化學物質致血虛小鼠的外周血常規，具有補血的功能。胸腺是機體內重要的免疫器官，脾臟既是免疫器官，也與造血有一定聯系，當機體失血時，脾臟可代償性地造血，致使脾臟體積擴大，質量增加[3]。因此以胸腺指數和脾臟指數作為小鼠免疫功能的觀察指標，觀察補虛顆粒對小鼠免疫功能的影響。結果顯示，補虛顆粒能夠改善小鼠胸腺指數和脾臟指數，可能對小鼠胸腺和脾臟的形態大小產生影響;能夠增強小鼠胸腺和脾臟的免疫活性，對免疫抑制所致小鼠血虛后的免疫功能具有一定作用。現代中藥藥理研究也顯示，補虛顆粒成分中的黃芪、當歸和牛膝均具有免疫增強功能。黃芪是扶正固本的常用中藥，黃芪多糖可從多方面發揮免疫增強作用[4];當歸一般被認為是補血佳品，具有補血活血、調經止痛的功效，研究顯示當歸多糖是當歸發揮免疫促進功能的主要成分，主要表現在促進機體的細胞免疫功能[5];牛膝具有活血祛瘀、補肝腎、強筋骨等功效，臨床用于月經不調、痛經以及產后淤阻腹痛等癥，不僅具有免疫增強活性，對生殖系統也有一定影響[6];防風能解表祛風、勝濕、止痙，具有抗炎鎮痛等藥理作用[7]。黃芪補氣固本，當歸補血，牛膝活血祛瘀，防風抗炎鎮痛，4味中藥組方制成的補虛顆粒治療妊娠女性產后的體虛癥，相得益彰，能增強產婦機體免疫功能。綜上所述，補虛顆粒能夠改善化學物質所致血虛小鼠的造血功能，同時具有一定的免疫增強功能，從而達到扶正固本功效，但其補血和促進免疫功能的機理需要進一步研究。

[1]陳 奇.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛生出版社，1994:1 010-1 013.

[2]張少崇，李燦東，黃守清.氣虛、血虛與紅細胞、血紅蛋白值相關性研究[J].甘肅中醫學院學報，2006，23(5):21-22.

[3]劉金元，楊冬娣，杜標炎，等.六味地黃湯抗胸腺和脾臟萎縮作用的實驗研究[J].江西中醫藥學院學報，2005，17(1):62-63.

[4]黃小英，劉端勇，趙海梅.黃芪多糖調節免疫作用研究進展[J].江西中醫藥學院學報，2008，20(4):75-77.

[5]何 立.當歸對神經和免疫系統作用的研究現狀和展望[J].時珍國醫國藥，2007，18(9):2 282-2 283.

[6]趙興梅，徐光忠，李建利，等.川牛膝和懷牛膝的現代藥理研究概況[J].華西藥學雜志，2004，19(3):205-207.

[7]王林麗，宋志勇.防風的研究進展[J].中國藥業，2006，15(10):63-64.