愈瘍膠囊對乳腺增生大鼠雌激素影響的實驗研究＊

羅倫才 ，黃蘭雅，季小平，李列平，邢晉苓 ，劉志康

(1.四川省涼山彝族自治州第二人民醫院，四川 涼山 615000;2.雅安職業技術學院藥學檢驗系，四川 雅安 625000)

乳腺增生癥的發病原因尚不十分清楚，一般認為與卵巢內分泌功能紊亂有關。目前，西醫常采用雌激素類藥物和碘制劑等療法，但效果不甚理想且不良反應較大，外科手術治療又常引起其他部位的復發，且患者較難接受。愈瘍膠囊為醫院自制制劑，是由山藥、蜂蠟等藥物組成，采用特殊炮制和制劑工藝制備而成的純中藥制劑，具有泄壅滯、逐痰積、消腫毒、排膿腐、生肌健脾等功效，臨床應用數年來，證明其對乳腺增生有顯著療效。筆者通過實驗研究觀察了愈瘍膠囊對乳腺增生大鼠內分泌激素的影響并探討其作用機制，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

PowerWaveX2型紫外全波長掃描儀(美國Gene有限公司)。大鼠孕酮酶聯檢測試劑盒(美國UNIONHONEST公司)、大鼠雌二醇受體酶聯檢測試劑盒(美國USCNLIFE公司)均由武漢中美科技有限公司提供。苯甲酸雌二醇注射液 (天津金耀氨基酸有限公司，批號為0807071，規格為1 mg∶1 mL);黃體酮注射液(浙江仙琚制藥股份有限公司，批號為081006，規格為1 mL∶20 mg)。愈瘍膠囊(涼山彝族自治州第二人民醫院制劑室自制，批號為090104，規格為0.45 g×42粒/瓶，用前加蒸餾水溶解配制成0.09 g/mL的藥液備用);乳癖消片(遼寧好護士藥業＜集團＞有限責任公司生產，批號為090310，規格為0.32 g×100片/瓶，用前加蒸餾水溶解配制成0.192 g/mL的藥液備用)。SD大鼠，SPF級，雌性，體重200～230 g，購自四川大學實驗動物中心，合格證號為SCXK川2008-24，于自然光線、自由飲水攝食條件下適應性喂養1周備用。

1.2 方法

取成年雌性未孕大鼠，隨機分為空白對照組、模型對照組、陽性對照組和愈瘍膠囊組，每組8只。除空白對照組外，其余各組均肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5 mg/kg，1次/d，連續注射23 d，第24天開始每天肌肉注射黃體酮5.0 mg/kg，連續注射3 d。從造模第1天開始，除模型對照組外，陽性對照組和愈瘍膠囊組分別灌胃配制好的乳癖消片或愈瘍膠囊藥液40 mL/kg，空白對照組灌胃等量生理鹽水，每天1次，直至試驗結束。最后一次給藥后60 min，取股主動脈血，離心，取血清，以酶聯免疫吸附法測孕酮水平，于450 nm波長處測定光密度(OD)值，求得孕酮含量。取大鼠第3對乳腺，剪碎，用磷酸鹽緩沖液洗滌，去除多余血液，勻漿化后放在20 mL磷酸鹽緩沖液中于-20℃放置過夜，反復凍融2次破膜，將勻漿物以5 000 r/min離心5 min，取上清液，采用酶聯免疫吸附法測雌二醇受體水平，于450 nm波長處測定 OD值，求得雌二醇受體含量。

1.3 統計學處理

所有數據均應用SPSS 13.0統計軟件分析，區間變量以均數±標準差(±s)表示，采用單因素方差分析進行組間顯著性檢驗。

2 結果

2.1 血清孕酮與乳腺組織雌二醇受體含量

與正常對照組比較，模型對照組大鼠的血清孕酮含量降低而乳腺組織雌二醇受體水平升高，差異均有極顯著性(P＜0.01);與模型對照組比較，愈瘍膠囊組大鼠血清孕酮含量升高而乳腺組織雌二醇受體水平降低，差異均有顯著性或極顯著性(P＜0.05或 P＜0.01)。具體結果見表1。

表1 愈瘍膠囊對模型大鼠血清孕酮和乳腺組織雌二醇受體的影響(±s)

表1 愈瘍膠囊對模型大鼠血清孕酮和乳腺組織雌二醇受體的影響(±s)

注:與空白對照組比較，#P＜0.01;與模型對照組比較，△P＜0.05，▲P ＜0.01。

雌二醇受體(ng)8.69±3.42 16.85±3.51#12.51±2.57△9.45±3.41▲組別空白對照組(n=8)模型對照組(n=8)陽性對照組(n=8)愈瘍膠囊組(n=8)孕酮(ng/mL)20.33±3.81 14.07±2.66#18.79±5.58△17.81±3.86△

2.2 乳腺組織病理變化

模型對照組大鼠的乳腺小葉腺泡數明顯增多，腺泡腔和小葉導管腔明顯擴張，腺泡和導管內分泌物增多，表明造模成功。與模型對照組比較，愈瘍膠囊組大鼠乳腺導管上皮細胞排列比較整齊，小葉腺泡數、腺泡直徑、小葉導管直徑、分泌物均明顯減少。兩組大鼠乳腺組織的病理切片見圖1。

圖1 乳腺增生大鼠乳腺組織病理切片(×40)

3 討論

乳腺增生病是乳房的一種非炎癥性疾病，又稱乳腺小葉增生或慢性囊性乳腺病，臨床上是25～40歲女性的多發病與常見病，以乳房腫塊和乳房脹痛為主要臨床表現。現代醫學多認為激素內分泌失調是本病的主要原因。雌激素主要由卵泡細胞產生，是直接刺激乳房生長、發育的最重要激素。在雌激素的作用下，乳腺導管廣泛增生、延長，乳腺間質結締組織增生。孕激素主要由卵巢黃體細胞產生，在雌激素的作用下可使乳腺導管進一步增生和延長，并促進腺泡和腺小葉的形成;另一方面，孕激素可以通過加速雌激素的代謝而降低雌激素水平[1-2]。生理條件下雌激素能對雌、孕激素受體產生正向調節作用，使其數量增多、親和力增強，但血中激素濃度激烈波動時，機體自我調節使受體向激素改變的相反方向變化[1]。當機體存在雌激素絕對或相對升高，而孕激素絕對或相對不足時，乳腺組織長期處于雌激素刺激增生過度而復舊不全的狀態，久而久之就會發生乳腺增生病[3]。乳腺增生時存在的內分泌失調，主要涉及孕酮、睪酮、垂體促乳素和雌二醇的平衡失調，進而影響乳腺組織正常平衡性變化，雌激素的過度刺激使乳腺組織從正常到增生乃至腫瘤形成[4]。

中醫認為，乳腺增生病屬“乳癖”病范疇，其最主要的臨床癥狀乳房包塊和腫痛的形成與痰瘀關系密切。痰瘀互結于乳絡，結而不散則腫塊形成;阻于絡道，氣機失調，經脈不通則疼痛。愈瘍膠囊精選味甘性平的山藥，補氣健脾以絕生痰之源，兼治乳癖結塊以及諸痛日久[5]而為君藥;伍以祛風、攻毒、鎮痛、破瘕積聚堅結、消痰破血、開通閉塞、消腫毒的蜂蠟等藥味，標本兼顧，可達化痰散結、消腫止痛的目的，是針對該病的病因病機選藥組方，故臨床能取得顯著療效。

本研究結果顯示，在造模過程中，長期大量應用外源性雌二醇啟動了應激系統對雌激素不良刺激的抵抗，阻止雌激素進入細胞核與靶基因結合產生生物效應。模型對照組大鼠雌二醇受體的明顯升高和孕酮明顯降低說明，雌激素的絕對升高和孕酮的相對不足是乳腺組織出現病理性增生的根本原因，HE染色病理學檢查結果進一步證明了造模是成功的。造模成功大鼠灌胃愈瘍膠囊后，乳腺組織中雌二醇受體含量明顯降低，血清中孕酮含量升高;病理學檢查結果還顯示，愈瘍膠囊可抑制乳腺小葉和腺泡增多，抑制導管上皮增生。以上結果表明，對雌激素造模成功的大鼠灌胃具泄壅滯、逐痰積、消腫毒功能的愈瘍膠囊，減弱了大量雌激素造成的不良刺激，降低了乳腺組織對雌激素的敏感性，減弱了雌激素在靶細胞上的生物學效應，從而抑制乳腺上皮細胞的增生，保護乳腺結構，且促進孕酮功能的正常發揮，最終產生抑制和治療乳腺增生的作用。

綜上所述，愈瘍膠囊能通過調節血清中孕激素、乳腺組織中雌激素受體水平來達到治療乳腺增生的作用。其作用機制可能是通過調節下丘腦-垂體-卵巢性腺軸的功能，改善機體內分泌功能，糾正異常激素水平使之恢復正常平衡而實現的。但有關愈瘍膠囊如何影響下丘腦-垂體-卵巢性腺軸，尚有待進一步的實驗研究予以闡明和證實。

[1]Godschalk MF，Unice KA，Bergner D，et al.A trial study:the effect of low dose human chorionic gonadotropin on the symptoms of benign prostatic hyperplasia[J].J Urol，2003，170(4 Pt 1):1 264-1 269.

[2]Foster WG，Younglai EV，Boutross-Tadross O，et al.Mammary gland morphology in Sprague-Dawley rats following treatment with an organochlorine mixture in utero and neonatal genistein[J].Toxicol Sci，2004，77(1):91-100.

[3]林 毅，唐漢鈞.現代中醫乳房病學[M].北京:人民衛生出版社，2003:103.

[4]Henderson BE，Ross R，Bernstein L.Estrogens as a cause of human cancer:the Richard and Hinda Rosenthal，Foundation award lecture[J].Cancer Res，1988，48(2):246.

[5]江蘇新醫學院.中藥大辭典(上冊)[M].上海:上海人民出版社，1977:167.