復方中草藥免疫增強劑對仔雞免疫效果的影響

張桂枝,靳雙星

(鄭州牧業工程高等專科學校畜牧系,河南鄭州450011)

近年來,由于長期大量濫用藥物、不合理的疫苗接種及免疫抑制病的持續存在導致畜禽機體免疫機能下降,抗病力降低。因此,如何激活機體的免疫系統,提高機體的特異性和非特異性免疫,增強機體的抗病能力是國內外學者一直關注的焦點問題。目前,解決免疫抑制最有效的辦法就是使用免疫增強劑。現已研究表明,很多藥物,如胸腺素、轉移因子、白介素、左旋咪唑等均能通過各自獨特的方式調節機體的免疫機能,但這些物質均有一定的副作用,而且有些藥物價格昂貴,在臨床上很難大規模推廣應用。中草藥是中華民族的瑰寶,資源豐富,品種繁多。現代醫學研究表明[1-4],許多中草藥對機體的細胞免疫和體液免疫均有增強或調節作用,可提高機體的抗病力和抵抗力,作為免疫增強劑具有成本低、療效可靠、使用方便、便于推廣等優點。本試驗利用天然中草藥,經過篩選科學配伍出復方中草藥免疫增強劑,研究其對蛋仔雞免疫效果的影響,為其臨床及生產應用提供理論依據及實踐指導。

1 材料與方法

1.1 復方中草藥免疫增強劑的組成 魚腥草、金銀花、黃芪、柴胡和甘草等,按一定比例稱取粉碎,加入適量的蒸餾水,置于鍋內煎3次,合并濾液,然后濃縮成每毫升藥液含1 g原藥,裝瓶滅菌備用。

1.2 主要試劑 伴刀豆素球蛋白A(ConA),Sigma公司生產;四甲基偶氮唑藍(MT T),Sigma公司生產;RPMI 1640培養基,Gibco公司生產;淋巴細胞分離液,上海恒信化學試劑有限公司生產;二甲基亞砜(DMSO),分析純,天津化學試劑一廠生產;新生小牛血清(自制)。ND-LaSota油乳劑滅活苗、新城疫標準抗原、新城疫標準陽性血清,均為乾元浩生物有限公司產品;1%紅細胞懸液(自制)。

1.3 主要儀器 DG5033A型酶聯免疫檢測儀,南京華東電子有限公司;CO2培養箱,美國Revco公司生產;倒置顯微鏡,重慶光學儀器廠生產。

1.4 試驗動物 1日齡健康羅曼褐雛公雞,購于鄭州市綠野種雞場孵化場,隔離飼養至15日齡,選取240羽發育均勻的雛雞供試驗用。

1.5 試驗動物分組 將供試的240羽15日齡健康羅曼雛公雞,隨機分為4組,每組60只。第1～3組為試驗組,在免疫的同時,飲水中加入復方中草藥免疫增強劑,連用1個月,第Ⅰ組添加量為1.5%,第Ⅱ組添加量為1%,第Ⅲ組添加量為0.5%,第Ⅳ組為疫苗對照組。均在15日齡時接種ND-LaSota油乳劑滅活苗0.5 mL/只。每組隔離飼養,四組的飼料成分及飼養管理方式完全相同。

1.6 血清中新城疫抗體效價的測定 采用HA-HI試驗。分別于免疫前和免疫后第7、14、21天和第28天,每組隨機抽取8只雞,經翅靜脈采血,分離血清,測定其新城疫抗體效價,抗體效價的高低用n log2表示。

1.7 免疫器官指數 免疫后第14天和第28天,每組選取10只雞,頸靜脈放血致死,迅速摘取脾臟和腔上囊,進行稱重并計算其免疫器官指數 。計算公式如下:免疫器官指數=免疫器官重量(g)/試驗階段體重(kg)。

1.8 T淋巴細胞增殖測定[5-6]采用M TT法。于免疫后第7、14天和第21天,每組隨機抽取6只雞,自心臟采血,肝素抗凝,測定其外周血淋巴細胞增殖。取抗凝血2 mL,加等量 Hank′s液稀釋后,用毛細吸管沿管壁緩緩加入裝有2 mL淋巴細胞分層液的離心管內,使血液重疊于分層液上,2 000 r/min離心20 min,吸取中間云霧狀的白細胞層,移入無菌離心管,適量Hank′s液洗滌2次,2 000 r/min離心10 min,棄去上清液。用RPMI 1640營養液(含10%小牛血清)稀釋成1×107個/mL細胞的細胞懸液,加入終濃度為 10 μ g/mL的ConA,接種到96孔細胞培養板中 100 μ L/孔,再加 RPMI 1640培養液100 μ L/孔,然后置于 40℃5%CO2條件下培養44 h后取出,每孔加入M TT 10 μ L,繼續培養 4 h,2 000 r/min離心10 min棄去上清液,加入150 μ L DMSO溶液,將細胞板置于微量振蕩器上振蕩5 min,使沉淀完全溶解,用酶標儀在570 nm波長測定其OD值,作為T淋巴細胞增殖的指標。

1.9 數據分析 用SPSS 11.5軟件統計進行分析。

2 結果與分析

2.1 新城疫抗體效價的動態變化 免疫前各組的抗體效價無顯著差異(P＞0.05),免疫后第 7、14、21天和第28天,試驗組的抗體效價均高于或顯著高于疫苗對照組,且Ⅰ、Ⅱ兩組的抗體效價顯著高于Ⅲ組(P＜0.05)。但在免疫后第7天和第14天,Ⅲ組抗體效價與疫苗對照組比較,差異不顯著(P＞0.05)。免疫后的第21天和第28天,Ⅲ組抗體效價與疫苗對照組相比差異顯著(P＜0.05)。Ⅰ、Ⅱ兩組之間無顯著差異(P＞0.05)。試驗結果見表1。

表1 疫苗免疫后各組ND-HI抗體效價變化

2.2 免疫器官指數的變化 飲用中草藥免疫增強劑之前各組的腔上囊、脾臟指數無差異,飲用中草藥免疫增強劑之后的第14天和第28天,三個試驗組的腔上囊、脾臟指數均呈上升趨勢。且試驗組的腔上囊、脾臟指數均高于對照組,Ⅰ、Ⅱ組顯著高于Ⅲ組(P＜0.05),但Ⅰ組與Ⅱ組相比差異不顯著(P＞0.05),Ⅲ組與對照組相比差異不顯著(P＞0.05)。試驗結果見表2。

表2 中草藥免疫增強劑對免疫器官指數的影響

2.3 外周血T淋巴細胞增殖的變化 飲用中草藥免疫增強劑之前各組的OD值無差異,飲用中草藥免疫增強劑之后的第7、14天和第21天,試驗組的OD值均高于或顯著高于對照組,且Ⅰ、Ⅱ組的OD值高于Ⅲ組但差異不顯著(P＞0.05)。其中在飲用中草藥免疫增強劑之后的第7天試驗組的OD值與對照組相比差異不顯著(P＞0.05),飲用中草藥免疫增強劑之后的第14天和第21天,試驗組的OD值均顯著高于對照組(P＜0.05)。試驗結果見表3。

表3 中草藥免疫增強劑對T淋巴細胞增殖的影響

3 討論

體液免疫是指由抗原刺激B淋巴細胞,引起B淋巴細胞活化、增殖與分化,形成漿細胞并產生抗體,抗體效價的變化反映了機體的體液免疫狀態。免疫器官的發育狀態和機能強弱直接決定著家禽全身的免疫水平。免疫器官重量的增加可提示機體免疫機能提高,重量減輕可提示機體免疫狀況變差。T淋巴細胞主要介導細胞免疫,T淋巴細胞的增殖是評價細胞免疫功能的一個重要指標,采用 MT T法測得的OD值與淋巴細胞增殖率呈正比。本研究結果表明,飲用復方中草藥免疫增強劑之后,試驗組的抗體效價、腔上囊及脾臟指數和淋巴細胞增殖不同程度地高于疫苗對照組。說明復方中草藥免疫增強劑能夠促進抗體的生成,增強機體的體液免疫功能;能夠促進雛雞免疫器官的發育,增加其相對重量;能夠促進外周血淋巴細胞的增殖,增強機體的細胞免疫功能。

[1]王福傳,韓一超,趙洪恩,等.復方中草藥免疫增強劑對雞免疫器官組織形態學影響[J].中國預防獸醫學報,2001,23(6):419-421.

[2]Chen Z S,Tan B K H,Chan S H.Activation of T lymphocy tes by polysaccharide-protein complex from Lycium barbarum L[J].International Immunopharmacology,2008,8(12):1663-1671.

[3]Liu Y B.Chemical and immune functions and clinic of preparations of Echinacea purpurea[J].World Phy taned,2001,16(2):47.

[4]Chen H L,Li D F,Chang B Y,et al.Effects of Chinese herbal polysaccharides on the immunity and growth performance of young broilers[J].Poult Sci,2003,82:364-370.

[5]楊發龍,岳華,羅薇,等.MT T法檢測雞外周血淋巴細胞增殖性反應的最佳條件探討[J].西南民族學院學報,2002,28(2):214-215.

[6]鄭鐵鎖,王貴平,胡元亮,等.復方中草藥對雛雞外周血 T淋巴細胞增殖的影響[J].畜牧與獸醫,2010,42(2):110-111.