雙氯芬酸誘導雛雞痛風的病理學觀察

楊彩然,董淑珍,劉玉芹,馬吉飛,王金峰,楊宗澤

(1.河北科技師范學院動物科學系河北省預防獸醫學重點實驗室,河北昌黎066600;2.天津農學院動物科學系,天津西青300384;3.河北省永清縣畜牧獸醫局,河北永清065600)

雙氯芬酸為一種強效消炎鎮痛藥,是感冒癥狀緩解劑,通過抑制前列腺素合成而起到解熱鎮痛的作用。其解熱鎮痛作用較強,消炎作用比消炎鎮痛強2～2.5倍,比阿斯匹林強20～50倍。口服吸收迅速,服藥后1～2 h血藥濃度達高峰。該藥在人的臨床應用中不良反應報道較多[1-2]。

近年來,隨著家禽呼吸道疾病的增多,一些養殖戶誤認為雞患了感冒而擅自選用該藥,將大量感冒通(主要成分為雙氯芬酸、人工牛黃、撲爾敏,其中雙氯芬酸是主要成分)混飼于雞飼料中,造成雞的中毒和死亡,死亡率高達68%～80%,給養雞戶造成了巨大經濟損失[3-7]。

為了弄清雙氯芬酸對雛雞的毒性機制,我們進行了本試驗,為以后的臨床安全用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥物及給藥途徑 雙氯芬酸鈉腸溶片,白云山制藥廠生產,批號:H41024221含量:25 mg/片。藥物研為粉末,灌服。

1.2 試驗動物及分組 將100只13日齡白來航雛雞隨機分為 5組,每組 20只,第 1～4組為試驗組,第5組為對照組,試驗組雞給予不同劑量的藥物,從第1組到第4組依次給藥劑量分別為2.5 mg/kg、3.5 mg/kg、4.5 mg/kg 、7.5 mg/kg 體重,對照組不給藥。所有雞喂飼小雞顆粒全價料,自由采食,給予充足飲水。

1.3 血清制備 分別在喂藥前、喂藥后24 h、48 h、72 h,用 1 mL注射器,翅靜脈采血,立即 2 000 r/min離心20 min,分離血清,-20℃凍存,備用。1.4 血清指標檢測 血清中UA、BUN、K+、Ca2+、H+、Na+、Cl-,在自動生化分析儀和電解質分析儀進行測定。試驗結果用SPSS 11.0統計軟件進行方差分析。

2 結果

2.1 臨床癥狀 喂藥后4 h,試驗組大部分雞表現精神委靡,羽毛逆立,呆立一隅,飲食量明顯降低。次日,第3組有6只雞精神委靡,第4組有8只雞精神委靡,其中第4組有4只雞死亡,第3天,大部分雞精神好轉。

2.2 病理變化

2.2.1 肉眼病理變化 剖檢死亡雞可見,腎明顯腫大,顏色變淺,呈花斑腎外觀,腎表面與切面均有大量的白色尿酸鹽結晶,輸尿管擴張、增粗,管內充滿白色尿酸鹽。心包、胸膜、腹膜及肌肉有白色尿酸鹽沉積,腹腔內的腸管間、腸管與胃和腹膜由于尿酸鹽的沉積,粘連在一塊,不易分離。

2.2.2 病理組織學變化 腎皮質結構明顯被破壞,表現為腎小球腫脹,腎小囊囊腔變狹窄,近端和遠端小管上皮細胞腫脹,發生顆粒變性,甚至水泡變性,嚴重的腎小管上皮細胞發生壞死,在腎小管中可見痛風石形成,腎小管結構消失(見圖1、圖2)。皮質部位的間質及腎小管內有單核細胞和異嗜性粒細胞浸潤。肝組織和脾臟組織內也有痛風石形成,并伴有局部肝組織和脾組織的壞死(見圖3、圖6)。在心外膜下和肝被膜下可見尿酸鹽沉積(見圖4、圖5)。

圖1 腎小管中尿酸鹽沉積(H.E.400×)

2.3 臨床病理學指標 不同時間各組雞血清中尿酸含量與喂藥前相比,喂藥后,第4組血清中尿酸的含量升高,同時也高于對照組。在喂藥后24 h,第4

圖2 腎小管上皮細胞變性壞死(H.E.400×)

組尿酸含量升高,其數值極顯著高于其他組的尿酸含量(P＜0.01),其中第4組中,最后死亡雞的尿酸增高到 829.75 μ mol/L 。

喂藥后24 h,第4組BUN含量高于其他組的BUN含量(P＜0.01)。此組中最終死亡雞在喂藥后24 h血清中BUN達26.97 mg/dL。其他組雞血清BUN濃度沒有顯著變化(P＞0.05)。

圖3 脾臟中形成痛風石(H.E.400×)

圖4 心外膜下的尿酸鹽(H.E.400×)

圖5 肝臟被膜下的尿酸鹽(H.E.400×)

喂藥后24 h、48 h,第4組血清中K+濃度高于其他組的K+濃度(P＜0.05)。第4組血清中pH值喂藥24 h后降低(見表1)。血清中Ca2+、Na+和Cl-濃度無變化。

3 分析與討論

3.1 雙氯芬酸對腎的毒性機制 雙氯芬酸對雞的毒性,主要是其對腎臟的損害,這與其他研究一致[8-11]。但此藥物對腎臟的損傷,不同的研究其結果有差別。本試驗中,腎臟病理組織學變化,主要在腎皮質部,表現為腎小管內有尿酸鹽沉積,腎小管上皮細胞變性、壞死等病理變化,與Oaks等[8]的研究結果一致,而與Reddy等[12]的研究結果有所不同,Reddy等觀察動物的病理變化除了腎小管壞死之外,還出現慢性病變特征,表現為纖維化變化,病程較長。由于禽血漿中尿酸鹽大部分是不與蛋白質結合的,因此,可通過腎小球濾過。研究表明,禽類的尿酸少部分是由腎小球排出,大部分尿酸是通過腎小管分泌[13],當腎小管受到損傷時,尿酸鹽排出受阻,進而使血清尿酸升高,引起高尿酸血癥,最終尿酸沉積在器官表面和組織內部。本試驗的第4組死亡的雞,經剖檢,心臟、腹腔器官、胸膜和腹膜等多處有白色尿酸鹽沉積,血清尿酸濃度顯著升高,得到證實。另外,BUN是腎功能的最敏感的決定指標,血清中BUN的變化,反映出腎受到了損傷,本試驗中,第4組雞在喂藥后24 h,BUN升高,比對照組高1.4倍(14.16∶9.91),尤其是第4組中死亡的雞,其BUN高達26.97 mg/dL,是對照組BUN的2.7倍,試驗雞表現出明顯的內臟型尿酸鹽沉積等病理變化,嚴重損害了腎功能,表明喂給雞雙氯芬酸劑量為7.5 mg/kg體重時,對雞腎臟有毒害作用。

試驗組雞的臨床表現可通過臨床病理學指標的變化來解釋。從較高劑量藥物組雞的臨床表現和臨床病理指標可看出,在喂藥后24 h,4.5 mg/kg、7.5 mg/kg體重劑量組中分別有6只雞、8只雞精神委靡,此時雞血尿酸濃度升高,血液pH值下降。由于血尿酸升高,再加上腎小管損傷,腎小管對NaHCO3重吸收減少,使機體的代償機能受到限制,致使血液pH值下降,嚴重者引起酸中毒,而酸中毒又抑制中樞神經系統,使雞精神委靡。腎小管的損傷,使腎小管排K+障礙,使血液中 K+濃度升高,本研究中,7.5 mg/kg體重劑量組,在喂藥后 24 h,血鉀升高,高血鉀可抑制腎小管上皮細胞H+與Na+的交換,同時K+與細胞內的H+可進行跨膜交換,造成H+在血液內潴留過多,加重酸中毒[14]。

圖6 肝組織中的尿酸鹽(H.E.400×)

3.2 雞死亡的原因 高劑量雙氯芬酸組的BUN明顯增高,說明試驗雞發生了腎功能衰竭,而腎功能衰竭又可誘導高鉀血癥的發生。有學者研究認為,痛風禽患病后期血鉀增加是其死亡的原因[10,15]。Zandvliet等[16]發現,高血鉀通過改變心電圖的復極化過程而使心律異常,引起禽心動過緩。

4 小結

7.5 mg/kg體重劑量的雙氯芬酸可對雛雞產生急性毒性作用,其通過損傷腎臟,誘導雞發生內臟型痛風。其他劑量試驗組未見明顯的毒性反應。

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