自備質控品對不規則抗體篩查試驗中篩選細胞的質量監控

周桂艷

在輸血前對受者血清進行抗體篩查的目的是及時發現臨床意義的不規則抗體，以便為受血者準備不含有相應抗原的血液，確保受血者輸血安全。用微膠凝注法做不規則抗體篩查試驗的關鍵之一是篩選細胞，有作者曾用各種方法對抗篩試驗監測，但沒有監測篩選細胞[1]。如何知道篩選細胞是否出現變化？本課題嘗試尋找一種可以觀察篩選細胞是否達到要求的質控血清，并將在每次實驗中隨同質控血清檢測，以觀察篩選細胞的穩定性。

1 材料與方法

1.1 檢測對象

2010年1 月～2010年2月在本院住院需要輸血的患者30例，年齡1～78歲。

1.2 檢測儀器與試劑

微膠凝柱卡（LISS/Coombs），微膠凝柱孔內為中性凝膠，并含有低離子介質及抗人球蛋白試劑，專用卡GRIFOLS離心機和GRIFOLS37℃孵育器。O型抗體篩查細胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號（批號：20105624，20105626）購自上海血液生物醫藥有限公司。抗D（IgM+IgG）血型定型試劑（批號NDMG05302），購自美國美德聲科學技術公司。普通冰凍AB型血漿購自廣州血液中心。以上試劑都在有效期內使用。

1.3 檢測方法

1.3.1 采用微膠凝柱法對受者血清進行抗體篩查 抽取受者血2～4mL，1500r/min離心5min，分離血清與紅細胞，在微膠凝柱卡上標記受者姓名及抗體篩查細胞的編號，分別吸取抗體篩查細胞懸液50μL和受者血清25μL加入微膠凝柱管腔上端，陰性和陽性對照組只需加入相應血清即可，置37℃孵育15min，1500r/min離心9min，肉眼觀察結果。結果判斷：-：100%的紅細胞沉在微管底部；+/-：100%的紅細胞沉在微管下端1/3以內；+：80%的紅細胞沉在微管下端2/3以內；++：80%的紅細胞沉在微管上端2/3以內；+++：80%的紅細胞沉在微管1/3以內；++++：凝集的紅細胞全部處于微管的頂部。

1.3.2 陰陽性對照血清的制備 陽性質控血清的制備：用人抗D血清配制+++的濃度為初始濃度。陰性質控血清的制備：取AB型血漿一袋，用無抗凝劑的小管分裝。陰陽性血清都置于4℃條件下保存。

2 結果

2.1 陰、陽性血清對照組的結果

用自備的陰性和陽性血清檢測不規則抗體篩查試驗中篩選細胞結果如表1。

表1 不規則抗體篩查試驗中陽性血清和陰性血清檢測結果

2.2 受者血清不規則抗體篩查結果

在30例受者血清中檢測出不規則抗體陽性有4例（占13.3%），見表2，以上4例自身抗體對照結果均為陰性。

表2 不規則抗體陽性結果及臨床資料

3 討論

微膠凝柱實驗是紅細胞抗原與相應抗體在凝膠介質中發生的凝集反應，本實驗用抗D（IgM+IgG）血型定型試劑作為陽性對照，以+++的濃度作為初始觀察，AB血漿因不含有抗A抗B抗原，不會與篩選細胞（O型紅細胞）發生凝集反應，所以作為陰性對照結果。此外，本試驗抗體抗原反應過程中始終保持在37℃，可以排除冷凝集素反應產生的影響。從陽性和陰性結果可以看出，如果使用新鮮的篩選細胞懸液，篩選細胞陽性結果都為+++，其穩定性非常好，當同一篩選細胞懸液加蓋放置24h，陽性對照組結果由+++下降到++，說明篩查細胞隨著時間久置，其質量會下降，對不規則抗體的結果會產生影響，所以新配置的篩查細胞懸液應盡快使用，加蓋放置不超過24h。

本次試驗用了兩個不同批號的篩查細胞，結果顯示不同批號會有不同結果。前9次都是用批號為（20105624）的篩選細胞，啟用新批號（20105626）做陽性對照組初始標記濃度，結果在++～+++。質量對不規則抗體篩查的試驗結果影響很大。

本試驗用自備的質控品進行了2個月的檢測，可認為其穩定性較好。抗體篩選試驗不一定能檢出所有具有臨床意義的抗體，一些抗低頻率抗原的抗體或有劑量效應的抗體可能被漏檢，此時需要抗原性更完全和特異性更強的篩選細胞做試驗或用更敏感的技術做檢測[2]。

本實驗用微膠凝注法對30例輸血患者進行不規則抗體篩查，共檢測出不規則抗體陽性的有4例，以上4例已用自身血清和自身紅細胞做做試驗，結果均為陰性，可確認待測血清中確實存在不規則抗體，4例中只有Ⅰ號篩選細胞陽性2例，根據抗體鑒定譜為P1型，只有Ⅰ、Ⅱ號篩選細胞陽性1例，為Kidd（M）型，只有Ⅱ、Ⅲ號篩選細胞陽性1例，可能為Rh-hrC或Rh-hrE型。4例中男的1例有輸血史，女的3例曾經有輸血史或妊娠史，說明反復輸血或多次妊娠易使患者受到免疫刺激而產生不規則抗體。因此，臨床對有輸血史，妊娠史和RhD陰性患者輸血前進行不規則抗體篩查非常有必要，通過檢測及時發現不規則抗體。但人種的差異，對輸血產生的影響的抗體也有所不同，Kell系統的抗-K抗體對白種人很重要，但中國漢族人群中K抗原幾乎全部陰性，而抗-Dia、抗-Mur抗體對黃種人相對重要[2]。

[1]楊世明，崔穎，張勇萍，等.微柱凝膠法在抗體篩查中的應用及其影響因素的探討[J].現代檢驗醫學雜志，2006，21（4）:55-56.

[2]胡麗華.臨床輸血檢驗[M].2版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：52-53.