Triton WR-1339誘發小鼠高脂血癥模型的研究

翟羽佳，陳邦添，李善兵，李怡芳，謝 果，何蓉蓉，栗原博

(暨南大學中藥及天然藥物研究所，廣東廣州 510632)

由于高脂血癥可誘發心腦血管等多種相關疾病，因此人們十分關注對其治療藥物的研發和藥效評價方法的建立。表面活性劑Triton WR-1339(tyloxapol)誘發動物高脂血癥模型，具有操作簡便且藥效評價快速等特點而被廣泛運用。本實驗從基因水平探討Triton WR-1339誘發高脂血癥的機制，旨在為該模型用于降血脂藥物篩選和藥效評價提供有益的實驗依據。

1 材料與方法

1.1材料7周齡♂清潔級昆明種小鼠購自廣東省醫學實驗動物中心，許可證號:SCXK(粵)2008-0002。Triton WR-1339購自美國 Sigma公司，TC、TG、LDL-C、LPL、HTGL 及考馬斯亮藍蛋白試劑盒均購于南京建成生物科技有限公司(批 號分 別 為:20100527、20100527、20100517、20100719、20100705)，引物由美國Invitrogen(上海)英駿生物技術有限公司合成。

1.2Triton WR-1339誘發小鼠高脂血癥將小鼠隨機分為正常對照組與Triton WR-1339模型組，每組10只。模型組300 mg·kg－1劑量尾靜脈注射Triton WR-1339造模，對照組注射等量生理鹽水。造模18 h后，小鼠乙醚麻醉下經心臟取血并加肝素抗凝，同時取出小鼠肝臟后冷藏備用。

1.3血漿TG、TC及LDL-C水平測定全血于4℃，2 000 r·min－1離心10 min分離血漿，按試劑盒說明書檢測血漿TG、TC及LDL-C的水平。

1.4肝組織LPL、HTGL活性及mRNA表達水平的測定將肝臟用生理鹽水制成10%的組織勻漿液，3 000 r·min－1離心10 min后，取上清按試劑盒說明書測定肝組織LPL及HTGL的活性。用TRIzol法提取肝組織總 RNA，取1 μg總RNA合成cDNA后進行PCR反應。LPL引物序列為(F)5'-CTAACTGCCACTTCAACC-3'和(R)5'-CAGACTTCCTGCTACGC-3'，擴增片段320 bp。HTGL引物序列為(F)5'-TGGACGGGAAGAACAAG-3'和(R)5'-GGAGTCAATGAAGAGGTGC-3'，擴增片段 326 bp。18S引物序列為(F)5'-GGGAGAGCGGGTAAGAGA-3'和(R)5'-ACAGGACTAGGCGGAACA-3'，擴增片段241 bp。取6 μl PCR反應產物進行1%瓊脂糖凝膠電泳分離，采用Quantity One圖像分析軟件分析數據，以目的條帶與18S的灰度比值進行半定量分析。

1.5統計學處理實驗數據均以±s表示，使用SPSS 13.0軟件進行分析和處理，兩組間比較采用t檢驗。

2 結果

2.1Triton WR-1339對小鼠血漿TC、TG及LDL-C水平的影響如Tab 1所示，與正常對照組相比，小鼠尾靜脈注射Triton WR-1339可以升高血漿中TC，TG及LDL-C水平(P＜0.01)。

Tab 1 Effect of Triton WR-1339 on the levels of TC，TG，LDL-C in plasma of mice(±s，n=10)

Tab 1 Effect of Triton WR-1339 on the levels of TC，TG，LDL-C in plasma of mice(±s，n=10)

＊＊P＜0.01 vs normal control group

＊＊

2.2Triton WR-1339對小鼠肝中LPL、HTGL活性及mRNA表達的影響如Tab 2所示，與正常對照組相比，小鼠尾靜脈注射Triton WR-1339可以降低肝臟組織中LPL、HTGL活性及其mRNA的表達(P＜0.05，P＜0.01)。

3 討論

表面活性劑Triton WR-1339靜脈負荷小鼠后血漿TG、TC及LDL-C水平明顯升高［1］，誘發急性高脂血癥。Schurr等［2］的早期研究提示該模型的產生機制主要與抑制脂蛋白酶活性有關，但是對具體脂蛋白酶活性及基因表達的研究報道甚少。LPL與HTGL是兩種重要的脂蛋白酶，可以催化CM和VLDL等血漿脂蛋白中TG分解為脂肪酸和單酸甘油酯，以提供組織氧化和貯存［3－5］。我們的研究結果顯示，Triton WR-1339負荷抑制小鼠肝臟組織中LPL及HTGL活性的同時，也抑制了這些酶的mRNA表達。本研究結果表明尾靜脈注射Triton WR-1339誘發小鼠高脂血癥機制可能與其抑制LPL、HTGL活性及mRNA表達相關，研究結果為該模型用于降血脂藥物篩選和藥效評價提供有益的實驗依據。

Tab 2 Effect of Triton WR-1339 on the levels and mRNA expressions of LPL and HTGL in liver of mice(±s，n=10)

Tab 2 Effect of Triton WR-1339 on the levels and mRNA expressions of LPL and HTGL in liver of mice(±s，n=10)

*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs normal control group.

Group LPL/kU·g－1Pro HTGL/kU·g－1Pro LPL/18S HTGL/18S Normal control 2.60 ±0.36 1.42 ±0.16 0.53 ±0.090.45 ±0.11 Triton WR-1339 1.85 ±0.31＊＊ 1.05 ±0.17＊＊ 0.15 ±0.05＊＊ 0.37 ±0.08*

［1］余艷輝，文 軍，郭兆貴.Triton WR-1339對小鼠血脂水平的影響［J］.中國藥理學通報，2002，18(5):599 －600.

［1］Yu Y H，Wen J，Guo Z G.Effects of Triton WR-1339 on bloodlipids of mice［J］.Chin Pharmacol Bull，2002，18(5):599 －600.

［2］Schurr P E，Schultz J R，Parkinson T M.Triton-induced hyperlipidemia in rats as an animal model for screening hypolipidemic drugs［J］.Lipids，1972，7(1):68 － 74.

［3］Yokota T，Nagashima M，Ghazizadeh M，Kawanami O.Increased effect of fucoidan on lipoprotein lipase secretion in adipocytes［J］.Life Sci，2009，84(15 －16):523 －9.

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［5］Santamarina-Fojo S，Haudenschild C，Amar M.The role of hepatic lipase in lipoprotein metabolism and atherosclerosis［J］.Curr Opin Lipido，1998，9(3):211.