高效液相色譜法測定銀冬顆粒中綠原酸含量＊

徐 玲，王 琴，李金玲，徐曉玉

(西南大學藥學院·西南大學中藥研究所，重慶 400715)

銀冬顆粒系西南大學中醫藥學院博士生導師徐曉玉教授在中醫藥理論指導下精心研制的中藥復方保健產品。銀冬顆粒主要由山銀花、天冬等組成，具有清熱瀉火、養陰生津的功效。為了控制銀冬顆粒的質量，保證其療效，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法對制劑中的綠原酸進行了含量測定，現報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(Agilent Technologies 1200 series);KQ5200E型超聲波清洗器(江蘇昆山市超聲儀器有限公司);JA2003N型電子天平(上海精密科學儀器有限公司)。綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110753－200413);銀冬顆粒(西南大學中藥研究所研制，2 g/袋，批號分別為 09112601，09112603，09112704);乙腈為色譜純，磷酸、甲醇為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱:shimpack vp－ODS 柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.2% 磷酸(10 ∶90);流速:1.0 mL/min;檢測波長:326 nm;柱溫:30℃;進樣量:20 μL。在上述色譜條件下進樣，色譜圖見圖1。可見，綠原酸峰形良好，與其他組分能較好分離;陰性對照品溶液色譜中，在綠原酸相應的保留時間附近無干擾峰。

2.2 溶液制備

精密稱取綠原酸對照品10.8 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為108 μg/mL的對照品溶液。稱取銀冬顆粒約2 g，研細，取約0.3 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，用50%甲醇20 mL超聲溶解30 min，放冷，加50%甲醇稀釋至刻度，精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.22 μm)過濾，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

標準曲線制備:分別精密吸取對照品溶液(108 μg/mL)0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 mL，置 10 mL 棕色容量瓶中，加 50% 甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.22 μm)過濾后，按2.1項下色譜條件進樣20 μL，記錄峰面積。以綠原酸質量濃度為橫坐標、峰面積積分值為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 A=10.899 5 C－10.613，r=0.999 3(n=5)。結果表明，綠原酸檢測質量濃度在 5.4 ～108 μg/mL范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

精密度試驗:取對照品溶液，重復進樣6次，分別測定綠原酸的峰面積。結果的 RSD為0.314%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12，24 h時進樣，測定綠原酸的峰面積。結果的 RSD為0.382%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

重現性試驗:精密稱取同一批樣品(09112601)6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結果綠原酸平均含量為10.94 mg/g，RSD為2.2%(n=6)，表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:稱取9份已知含量(10.94 mg/g)的樣品批號為09112601約0.15 g，分別加入3個梯度濃度的對照品共6份，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，進樣測定峰面積，按外標法計算含量。結果批號為09112601，09112603，09112704的3批樣品中綠原酸含量分別為 10.94，11.62，11.65 mg/g。

3 討論

取少量綠原酸對照品，在200～400 nm波長范圍進行掃描，結果其最大吸收值在326 nm，因此選用326 nm作為檢測波長。在波長為 326 nm、進樣量 20 μL、流速 1.0 mL/min的條件下，分別以乙腈 － 0.4%磷酸溶液(13 ∶87)[1]、乙腈 － 0.1% 磷酸溶液(17 ∶83)、甲醇 －水 －冰醋酸(7∶92 ∶1)、乙腈 －0.2%磷酸溶液(10∶90)為流動相測定，結果流動相為乙腈－0.2%磷酸溶液(10∶90)時綠原酸的保留時間為26.8 min，且峰形良好，與其他組分能較好分離。本試驗所建立的方法高效、快速、穩定、靈敏，可作為銀冬顆粒質量控制的有效方法。

表1 綠原酸加樣回收試驗結果(n=9)

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:28.