松杉靈芝生產雜菌污染原因及控制*

李希政，夏宏志，李 濛，張松玲，周紅昕

（吉林省生物研究所，吉林 長春 130012）

松杉靈芝是靈芝的一種，有效藥物成份是普通靈芝的幾十倍。因此，在生產松杉靈芝時更要嚴格控制雜菌污染以確保松杉靈芝的產量和質量。在正常情況下，制作原種、栽培種或栽培袋的污染率在10%以下，各個環節和操作規范者，污染率只有1%～5%。如果超出這一范圍，則要及時查明原因、采取控制措施[1]。

1 菌種污染

松杉靈芝生產中會用少量的母種生產大量的二級菌種，再用二級菌種生產大批三級菌種進行栽培，一環扣一環，如果出理大批量的污染，原因之一是原始菌種就是受污染的菌種，用它繼續生產，就會造成大批量的二級菌種或到三級菌種時期出現大批量的污染。這樣的雜菌先從接種塊周圍出現，且雜菌種類單一，出現早，一般在接種后3 d～5 d出現。這類污染的防治要靠生產者嚴格檢查菌種質量來解決，在使用前要認真做好檢查，而且在培養過程中也要密切觀察，確保菌種長勢一致，將生長緩慢者單獨培養，將污染的及時從培養室中清除。

2 滅菌不徹底產生的污染

松杉靈芝菌種制作用的瓊脂培養基和二級菌種用的木屑培養基，三級菌種用的木段都要經徹底滅菌才能保證松杉靈芝菌絲的正常生長發育。這3種物質中的微生物不一樣，滅菌時間也不一樣。三者用高壓滅菌鍋滅菌時間 （表1）不足，就會發生污染率高、發生早、出現雜菌部位不規則等特點的雜菌污染。

3種基質滅菌時間不同，瓊脂培養基滅菌時間最短，木段滅菌時間最長。在滅菌時，要盡量采用高壓蒸汽滅菌，在高溫條件下，蛋白質迅速變性，這樣一來，所有微生物很快就會死亡。如果條件不充許，采用常壓滅菌時，也要加長滅菌時間，要始終保持水溫100℃，保持時間8 h以上，最好再燜一晚。湖南省懷化職業技術學院的戴水蓮曾對常用的滅菌灶進行過科學改造，改造后的滅菌灶密封嚴實，保溫效果好，成本低。雖然存在一定的缺點，但實用性很強[2]。蒸汽通入式罩膜滅菌因上氣快、滅菌量大，節能等諸多優點被廣泛應用，杜順剛等又針對蒸汽爐滅菌中存在的問題進行了改造，使蒸汽爐滅菌在經濟條件不充分的農村更加實用[3]。

表1 高壓滅菌鍋對松杉靈芝3種培養基滅菌的壓力、溫度、時間

3 密封不嚴造成的污染

松杉靈芝在菌種培養時要用到罐頭瓶和塑料袋作容器，在裝料、搬運或滅菌堆放時，不小心就會使罐頭瓶出現裂痕，塑料袋出現漏點而看不見，即使經過高壓滅菌，待接入菌種幾天后，在破損處就會出現雜菌。因此，裝料的場地要鋪墊1層塑料布[4]，采用專門廠家生產的聚乙烯塑料袋，罐頭瓶要輕拿輕放，瓶口、袋口要處理干凈，塑料袋裝料時要小心，將大點的木屑剃除，以免劃破塑料袋。

4 接種操作帶來的污染

對松杉靈芝菌種進行轉接的時候，通常情況下是在超凈工作臺上進行，有的是在接種箱里進行?？此茻o菌操作，稍有不慎，就會給雜菌以滋生的機會。這類污染發生的時間較晚，多為7 d左右出現，污染的產生有以下幾方面原因：接種前，接種人員未對手部進行清洗處理，違反接種操作規程；超凈工作臺老化起不到凈化作用或者接種箱內消毒不徹底[5]；菌種袋或菌種瓶表面附著的雜菌在接種時被帶入培養料表面；接種室環境空氣不良；接種器具消毒不嚴格；消毒藥品已受污染等。

針對以上產生雜菌的原因，在進行松杉靈芝菌種轉接的時候可以參照以下操作：

（1）接種室內提前打開超凈工作臺，將工作臺的四周用75%酒精棉擦干凈并將接種用的藥品、器具和菌種等先用75%酒精擦干凈放在工作臺上，地面用75%酒精拖好，人員離開后打開紫外燈30 min；如果是接種箱，接種箱要確保密封性能好，接種箱內點燃質量合格的煙霧消毒劑，打開紫外燈30 min。

（2）等待接種的菌袋用消過毒的塑料罩住，等待時同時打開紫外燈30 min。

（3）確保消毒藥品未受污染。

（4）接種工具準備2套以備用，可與菌袋一同滅菌處理。

（5）接種前將手指甲剪好、手清洗干凈，操作前穿好殺過菌的大褂，再用75%酒精仔細擦試手部、腕部及指甲縫、指間縫，用75%酒精棉將接種器具進行表面消毒并在酒精燈火焰上燒好滅菌。

（6）接種時，將菌種前端老化的菌皮去除，菌種口不要離開酒精燈火焰，菌袋、菌瓶等也要盡量靠近酒精燈火焰處以降低污染率。

（7）接種操作要做到 “輕、快、準、連、小”。 “輕”是指接種時手及臂部動作不要太大，減少空氣流通；“快”指的是接種動作要迅速，不要讓菌種和培養料在空氣中暴露太長時間； “準”是指要把菌塊準確接到位；“連”是指接種操作要一氣呵成，不間斷； “小”是指酒精燈火焰處無菌區小，盡量在這個小區域內完成接種操作，且接種過程中要少說話、少走動，以減少污染機率。

（8）菌袋或菌瓶溫度必須降到30℃以下才能進行接種操作，以免溫度過高，菌種死亡。

（9）條件允許的情況引進新型超凈工作臺或采用專用的食用菌接種凈化機、臭氧消毒機等先進設備。

5 培養過程雜菌污染

接種后的松杉靈芝要運到培養室進行培養，培養10 d后，菌絲已經長滿菌料表面，此時出現污染且污染加重，則是培養室環境不合格而造成的?？赡苁桥囵B室內溫度過高，同時濕度過大，也可能是培養室內消毒不徹底，雜菌孢子充斥在培養室空氣中。針對這種情況，要降溫、降濕，定時通風[6]，并在培養前1 d用75%的酒精拖地并用氣霧消毒劑進行煙霧消毒，而且在室內用紫外燈消毒4 h。

6 周圍環境的影響

在對松杉靈芝菌種及菌袋培養時，不僅培養室內要清潔，培養室外的周圍環境也不容忽視。經常用來蘇爾兒及殺蟲劑噴霧，以減少周圍環境對培養室內菌袋的影響。

7 脫袋覆土后產生的雜菌

松杉靈芝木段培養好菌絲后，要將其脫袋埋入土中才能長出漂亮的靈芝。恰恰是脫袋操作會破壞原來已經長好的菌絲，使菌絲產生間隙，與泥土混合，或多或少的會產生雜菌，生長力旺盛的菌絲很快就會彌補上這個空隙，但也有小部分的菌絲來不及彌補就被雜菌所侵占，但這種污染慢延性差，及早發現，及早處理，并不會對其它的松杉靈芝木段的產量造成影響，而且長雜菌的木段也能正常長出靈芝。

覆土幾天后，就會看到有小部分的木段表面長有雜菌，此時，可將這些木段取出在另一處埋入[7]，并用滅過菌的刀具進行稍大面積的切割處理，再進行覆土。

為了避免在覆土后出現雜菌污染，可在覆土時施用一些去除雜菌的藥物，可以使菌床在整個出菇期間減少雜菌侵害。

8 綜合控制措施

在松杉靈芝生產栽培的整個流程工藝，即制種、滅菌、接種、培養、出芝每個環節都有出現雜菌污染的可能，因此，在這個過程中，必須嚴格操作，不能掉以輕心，讓雜菌有機可乘，使污染率控制在5%以下。

（1）從有信譽的科研單位、專業食用菌機構引進優良的菌種，先做出菇試驗，對于性狀有些退化的菌種要盡量分離復壯以保證其優質。

（2）在生產栽培的各個環節要嚴格要求，科學合理地安排每個生產工藝環節，按照流程一絲不茍地進行生產。

（3）用于生產的松杉靈芝菌種要嚴格挑選，任何不理想的菌種均不可姑息，以確保接種物的純度。

（4）提高從業人員技術水平，規范操作，生產環境要干凈整潔。

（5）建立生產線流水作業，每個環節的人員都要按技術管理規章制度工作以保證生產。

松杉靈芝生產栽培常見的雜菌污染可能是單因素引起的，也可能是多因素共同作用的結果?？傊獜目傮w上加強技術操作和科學的管理才會收到良好的效果。

[1]王世東，周學政.菌種生產雜菌污染的原因分析及綜合控制[J].中國食用菌，2006，25(2)：28-30.

[2]戴水蓮.常用滅菌灶的主要類型及改造方案[J].中國食用菌，2007，26(2)：57.

[3]杜順剛，戴浩，趙小強，等.蒸汽爐滅菌中存在的問題及改進措施[J].中國食用菌，2007，26(5)：67.

[4]覃培升，黎金鋒，黃福常.雙孢蘑菇生產種常見問題及生產改進[J].中國食用菌，2007，26(3)：27-28.

[5]胡四新.接種箱污染及其防治[J].中國食用菌，2007，26(2)：59.

[6]高云虹，雷亮，高仲山.原生態食用菌生產中原種制作失敗的原因及對策[J].中國食用菌，2008，27(4)：57-58.

[7]張義奇，張瑞青，狄繼革，等.平菇栽培中的污染防控理論與實踐[J].食用菌，2006(5)：61-62.