載脂蛋白E基因多態(tài)性及超敏C-反應(yīng)蛋白與冠心病相關(guān)性分析

張鴻青，馬 娟，田 青，趙曉麗

（昆明市第一人民醫(yī)院 心內(nèi)科，云南 昆明 650011）

冠心病（CHD）的發(fā)病具有明顯的遺傳傾向和家族性，但其遺傳易患標(biāo)記目前尚不明確。隨著研究的深入開展，目前人們已發(fā)現(xiàn)載脂蛋白E（ApoE）的多態(tài)性與血脂紊亂，As及CHD的發(fā)生密切相關(guān)。本研究擬探討冠心病患者的載脂蛋白E基因多態(tài)性及hs-CRP等危險(xiǎn)因素之間的相關(guān)性，為冠心病的早期診斷和防治提供新的檢測指標(biāo)。

資料與方法

一、研究對(duì)象 符合入選標(biāo)準(zhǔn)的30例冠心病患者，均來自我院心內(nèi)科經(jīng)冠脈造影確診病人，其中男性18例，女性12例，平均年齡（56.72±7.83）歲，均排除家族性高膽固醇血癥、脂肪肝、糖尿病、甲狀腺疾病、腎臟疾病、嚴(yán)重高血壓和肝臟疾病；對(duì)照組30例，為我院體檢健康成人，其中男16例，女14例，平均年齡（56.33±8.96）歲，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，2組差異無顯著性意義（P＞0.05），具有可比性。

二、方法 1.標(biāo)本的采集：各研究對(duì)象均空腹12h以上，次晨采血。分別采取EDTA抗凝血3ml，自然凝集血3ml。抗凝血-8O℃保存?zhèn)溆谩Ｗ匀荒蛛x血清后，-8O℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測定血清hs-CRP，在奧林巴斯5421全自動(dòng)生化分析儀上檢測。

3.DNA模板的制備：基因組DNA的提取采用采用堿裂解法，試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供。

4.apoE基因多態(tài)性檢測：用基因芯片檢測apoE位點(diǎn)基因多態(tài)性。按基因芯片操作說明書進(jìn)行操作。主要儀器為離心機(jī)（centrifuge TGL-16G）。核酸蛋白檢測儀 （Biophotmeter）。PCR擴(kuò)增儀（MyCyclerTMThermal Cycler）。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有數(shù)據(jù)處理均在SPSS 17.0軟件中進(jìn)行。計(jì)量資料用（）表示，組間比較用方差分析或t檢驗(yàn)。

結(jié) 果

冠心病組與對(duì)照組比較，Eε2等位基因頻率明顯降低 （P＜0.05），Eε4等位基因頻率升高（P＜0.05），見表1。冠心病組hs-CRP水平與健康對(duì)照組相比較有顯著性差異（P＜0.05），見表2。

表1 ApoE基因型和等位基因比較[n(%)]

表2 ApoE等位基因多態(tài)性與血清hs-CRP(mg/L)含量關(guān)系 （）

表2 ApoE等位基因多態(tài)性與血清hs-CRP(mg/L)含量關(guān)系 （）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別 ε2ε3ε4 CHD組10.98±3.16*11.02±2.96*11.93±3.99*對(duì)照組4.29±1.284.98±1.064.57±1.14

討 論

ApoE是一種含有299個(gè)氨基酸的單鏈多態(tài)糖蛋白 （Mr 34200），主要存在于血漿乳糜微粒（CM），極低密度脂蛋白（VLDL）和HDL中。主要由肝臟的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成，其次是腦組織中的星形細(xì)胞。ApoE是血漿重要的載脂蛋白之一，參與機(jī)體血脂代謝及調(diào)節(jié)膽固醇平衡，在動(dòng)脈硬化的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用。ApoE2能夠使血漿中的TC，LDL降低，HDL升高；ApoE4則使血漿中的TC，LDL升高，HDL降低[3]。本研究顯示，CHD患者ApoE基因型中，E2/2和E2/3明顯性低，而E4/4則顯著升高（P＜0.05）；而等位基因頻率中，ε2明顯降低，等位基因頻率ε4明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），與報(bào)道[4]一致。表明ε2等位基因是CHD的保護(hù)因子，ε4等位基因是動(dòng)脈硬化發(fā)生的潛在因素，等位基因頻率上升是CHD的重要標(biāo)志。

冠心病的發(fā)病機(jī)制，除了基因等遺傳方面的因素外，近年來認(rèn)為慢性低度炎癥在冠心病的發(fā)病中起一定的作用。CRP是臨床上最顯著的炎癥標(biāo)志物，研究發(fā)現(xiàn)[5]，CRP可在血管硬化損傷部位招募單核細(xì)胞，并且誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生并釋放細(xì)胞因子，激活補(bǔ)體，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生粘附因子，使內(nèi)皮細(xì)胞受損，加速動(dòng)脈硬化的進(jìn)展。本研究發(fā)現(xiàn)，冠心病組hs-CRP水平均明顯高于對(duì)照組；冠心病以及2型糖尿病合并冠心病發(fā)生的危險(xiǎn)因子可能參與了冠心病發(fā)生發(fā)展。

本研究發(fā)現(xiàn)，CHD組及對(duì)照組ApoE各等位基因（ε2，ε3和ε4）之間的hs-CRP含量沒有明顯差異，說明ApoE基因多態(tài)性與hs-CRP含量沒有直接關(guān)聯(lián)，但兩者均與CHD有直接關(guān)聯(lián)。因此，聯(lián)合監(jiān)測ApoE基因多態(tài)性及血清hs-CRP含量，對(duì)心血管疾病危險(xiǎn)性預(yù)測是一個(gè)具有新意和敏感的指標(biāo)。

[1]李艷，黃憲章，張平安，等.雌激素受體基因多態(tài)性與急性心肌梗死關(guān)系的研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2001，81：389-392.

[2]夏勇，周新，鄭芳，等.等位基因特異性多重聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)對(duì)載脂蛋白E基因多態(tài)性檢測的評(píng)價(jià)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2004，27：7.

[3]SIEST G,PILLOT T,REGIS-BAILLY A,et al.Apolipoprotein E：an important gene and protein to follow in laboratory medicine[J].Clin Chem，1995，41(8)：1068-1086.

[4]AKANJI AO,SURESH CG,FATANIA HR,et al.Associations of apolipopmtein E polymorphism with low-density lipoprotein size and subfraction profiles in Arab patients with coronary heart disease[J].Metabolism， 2007， 56(4)：484-490.

[5]VERMA S,LI SH,BODIWADA MV,et al.Endothelin antagonism and interleukin-6 inhibition attenuate the proatherogenic effects of C-reactive protein [J].Circulation，2002，105：1890-1896.