喉鱗癌組織中Ezrin和VEGF表達(dá)的相關(guān)性研究

米 洋，徐 琳，金小平，胡建功，李連賀，陸鴻略

(1承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北承德067000;2河北民族師范學(xué)院數(shù)學(xué)系)

喉癌是頭頸部常見(jiàn)惡性腫瘤，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是影響其預(yù)后的主要原因。埃茲蛋白(Ezrin)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是近年來(lái)研究較多的腫瘤相關(guān)蛋白因子。本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)喉鱗癌中Ezrin和VEGF的表達(dá)，旨在探討它們?cè)诤眵[癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中的作用及相互關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集40例我科2006年3月～2008年12月診斷為喉鱗癌患者手術(shù)標(biāo)本，癌中心區(qū)、癌旁組織(距腫瘤邊緣≥1 cm，經(jīng)病理證實(shí)無(wú)癌細(xì)胞)，術(shù)前均未接受放、化療。其中男33例、女7例，年齡42～84歲、平均61歲;高分化22例，中分化18例;按TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期、Ⅱ期24例，Ⅲ、Ⅳ期16例;12例頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，28例無(wú)轉(zhuǎn)移。術(shù)中取標(biāo)本后即刻10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。取20例非喉癌患者的喉部正常黏膜組織(13例為聲帶息肉黏膜、7例為雙側(cè)喉返神經(jīng)麻痹切除的單側(cè)杓黏膜)作對(duì)照。

1.2 主要試劑 鼠抗人Ezrin單克隆抗體、SP即用型試劑盒及VEGF鼠抗人單克隆抗體、SP即用型試劑盒均為福建Maixinbio公司產(chǎn)品。免疫組化方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.3 結(jié)果判定 Ezrin陽(yáng)性反應(yīng)為胞膜和(或)胞質(zhì)呈清晰棕黃色顆粒，VEGF陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞核和(或)細(xì)胞質(zhì)呈明顯棕黃色反應(yīng)。先在低倍視野(100×)下選取細(xì)胞分布均勻的視野，再在高倍視野(400×)下，分別計(jì)數(shù)出每個(gè)視野中陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞總數(shù)，每張切片計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野，計(jì)算其平均陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，以百分?jǐn)?shù)表示。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，多組間采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn);采用Spearman行相關(guān)分析，以 P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ezrin和VEGF的表達(dá) 見(jiàn)表1。

表1 各組Ezrin、VEGF的表達(dá)(±s)

表1 各組Ezrin、VEGF的表達(dá)(±s)

注:與癌旁組織和正常喉黏膜組織比較，*P＜0.05

Ezrin VEGF喉癌組織 40 43.08 ±12.98* 47.39 ±14.24組別 n*癌旁組織 40 12.86 ±6.15 11.00 ±4.44正常喉黏膜組織20 9.06 ±3.19 9.92 ±2.19

2.2 Ezrin和VEGF的表達(dá)與喉癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見(jiàn)表2。

表2 Ezrin和VEGF的表達(dá)與喉癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 相關(guān)性分析 在喉癌組織中Ezrin表達(dá)水平與 VEGF表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.991 4，P=0.001)。

3 討論

Ezrin蛋白為膜細(xì)胞骨架連接蛋白，主要參與上皮細(xì)胞中細(xì)胞骨架與胞膜的連接，具有維持細(xì)胞形態(tài)和運(yùn)動(dòng)、連接黏附分子及調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能［1］。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)Ezrin蛋白通過(guò)調(diào)節(jié)黏附分子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等途徑，參與細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用，從而在腫瘤發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要作用［2］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Ezrin在喉癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織和喉部正常黏膜組織，而癌旁組織和喉部正常黏膜組織比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示在喉癌組織中可能存在Ezrin蛋白表達(dá)調(diào)控機(jī)制的失調(diào)，其表達(dá)上調(diào)，從而促進(jìn)喉癌的發(fā)生。本研究還顯示Ezrin的表達(dá)與喉癌組織中的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期和病理分級(jí)相關(guān)。Ezrin為腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的促進(jìn)因素，在多種侵襲性癌組織中高表達(dá)，參與腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移［3～5］。VEGF 作為一種同型二聚體糖蛋白，通過(guò)與受體特異性結(jié)合而發(fā)揮作用，在多種腫瘤中存在不同程度表達(dá)，可以為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和新生血管形成提供營(yíng)養(yǎng)，從而為腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移奠定基礎(chǔ)。

本研究結(jié)果表明，喉癌組織中Ezrin和VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)，且Ezrin和VEGF表達(dá)高的患者易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。有關(guān)Ezrin和VEGF在腫瘤轉(zhuǎn)移中相互作用的機(jī)制目前還不清楚，需要進(jìn)一步的研究。但可以觀察到Ezrin高表達(dá)及VEGF高表達(dá)的患者預(yù)后差。我們認(rèn)為檢測(cè)Ezrin和VEGF可以為臨床治療方案選擇提供幫助并可作為預(yù)后評(píng)估的一項(xiàng)指標(biāo)。

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