不同化療藥物對口腔鱗狀細胞癌抑制率的體外實驗分析

董立新，李向春，董淑芬，付占昭

(1秦皇島市第一醫院，河北秦皇島066000;2昌黎縣醫院)

本文通過MTT法檢測分別加入環磷酰胺(CTX)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、平陽霉素(PYM)、紫杉醇(PTX)、順鉑(CDDP)5種化療藥物后的23例口腔鱗狀細胞癌細胞樣本的活細胞數，并通過與空白對照組比較得出5種化療藥物對口腔鱗狀細胞癌細胞的體外抑制率來反映5種化療藥物的抗腫瘤活性，并簡要復習5種藥物的作用機制，希望對口腔頜面部鱗狀細胞癌化療方案的制定有所幫助。

1 材料與方法

1.1 材料 23例口腔頜面部惡性腫瘤組織新鮮標本均來自秦皇島市第一醫院口腔科2009年9月～2010年10月手術和活檢組織標本，所有病例經病理診斷證實為鱗狀細胞癌。取材部位:舌7例、牙齦7例、頰6例、口底2例、唇1例。腫瘤細胞抑制率檢測選用藥物:CTX、5-FU、PYM、PTX、CDDP。試劑:MTT為美國Sigma公司產品，RPMI 1640培養基和胰蛋白酶為美國Gibco公司產品，胎牛血清為杭州四季青生物工程材料公司產品。

1.2 MTT法檢測 腫瘤細胞抑制率的MTT檢測方法參考周曉健等［1］方法并依據我處實驗條件做出相應修改:①腫瘤組織標本用GKN液沖洗2～3次，去除血塊及壞死組織，以胰蛋白酶2 mg/ml消化40 min，200目濾網收集細胞入10 ml GKN液，加于離心管中1 000 r/min離心7 min，棄上清，細胞混懸于適量RPMI 1640培養基(含15%胎牛血清)中，調細胞數為5×106/ml;②細胞培養板及培養基預溫至37℃;③每孔加細胞懸液200μl，每4孔為1組，設實驗組及對照組，輕微振蕩混勻;④培養板置37℃、5%CO2培養箱中培養24 h，各孔加入抗腫瘤藥物(CTX:120μg/ml;5-FU 40 μg/ml;PYM:1.28 μg/ml;PTX:11.6 μg/ml;CDDP 12.6μg/ml)，繼續培養48 h;⑤每孔加入MTT(5 mg/ml)20μl，于37℃、5%CO2培養箱中繼續培養4 h以上;⑥離心(1 000 r/min)，棄上清，每孔加入DMSO 100 μl，終止反應;⑦ST-360型酶標儀檢測各孔在450 nm下的OD值;⑧腫瘤細胞生長抑制率計算公式:腫瘤細胞抑制率=(1－A/B)×100%，A為給藥孔平均OD值，B為對照孔平均OD值;⑨藥物敏感性判斷標準:高度敏感，細胞生長抑制率≥50%;敏感，細胞生長抑制率≥30%;不敏感，細胞生長抑制率﹤30%。

1.3 統計學方法 采用SPSS16.0軟件包進行統計學分析，實驗數據均以±s表示，各藥物間差別顯著性應用多個獨立樣本非參數檢驗法檢驗。以P≤0.05為有統計學差異。

2 結果

各種化療藥物對口腔鱗狀細胞癌細胞抑制率及敏感程度情況見表1。由表1可見，本實驗23例口腔鱗狀細胞癌組織樣本經藥物敏感試驗后測得各藥物對腫瘤細胞抑制率以PTX為最高，P＜0.05。

表1 5種抗腫瘤藥物對口腔鱗狀細胞癌細胞抑制率極敏感程度比較

3 討論

口腔鱗狀細胞癌是口腔頜面部常見的惡性腫瘤，采用手術為主的綜合治療已為人們廣泛接受，如何選擇對腫瘤敏感的抗腫瘤藥物是臨床工作中研究的重點。目前應用于口腔頜面部惡性腫瘤治療的藥物主要有 CTX、5-FU、PYM、PTX、CDDP，其作用機制各不相同［2～4］。

由于腫瘤在個體的差異性，相同組織類型、同樣臨床階段的惡性腫瘤，對于不同的患者，即使用同一化療藥物，同樣治療方案，其療效常不一致［5］。因此在為患者進行化療前有必要進行針對患者腫瘤的化療藥物敏感性測定，以實現化療的個體化。MTT法則是目前臨床上常用的化療藥物敏感性測定方法［6］。本研究通過MTT法檢測5種化療藥物針對口腔鱗狀細胞癌細胞的抑制率反映藥物的敏感性，結果表明PTX對口腔鱗狀細胞癌細胞的抑制效果較強，CTX、5-FU、PYM、CDDP間無差異，隨著 PTX在抗腫瘤臨床治療中的應用逐漸廣泛，可通過更廣泛的臨床觀察確證PTX對口腔癌的治療效果。

［1］周曉健，陳萬濤，林李嵩，等.口腔頜面部惡性腫瘤化療藥物敏感性臨床分析［J］.口腔頜面外科雜志，2000，10(2):134-137.

［2］黃峻，皇祖珊.臨床藥物手冊［M］.4版.上海:上海科學技術出版社，2008:149.

［3］林毅，歐子民，鄺海.應用甲酰四氫葉酸鈣使5-FU增效的舌癌化療［J］.臨床口腔醫學雜志，1999，15(12):79.

［4］李雅東.口腔頜面部惡性腫瘤化療藥物現狀［J］.天津醫藥，2002，14(3):22-23.

［5］邱春元.張嘉慶.化療藥物敏感性測定方法近況［J］.中國腫瘤臨床，1991，18(5):368-372.

［6］鄭順友，朱翌，丁熙，等.口腔癌中HSP-70表達和體外藥物敏感試驗的關系［J］.實用口腔醫學雜志，2006，22(16):1839-1841.