HPLC法測定人血清中奈達(dá)鉑濃度

蘇 華，張文靜

山東聊城市第二人民醫(yī)院藥劑科，聊城 252601

奈達(dá)鉑(Nedaplatin，結(jié)構(gòu)見圖1)，是日本鹽野義制藥公司開發(fā)的一個新型第二代鉑類抗腫瘤藥物，1995年6月在日本首次獲準(zhǔn)上市。主要用于治療頭頸部癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、食管癌等實體瘤，部分對順鉑耐藥的患者應(yīng)用奈達(dá)鉑可取得較好療效[1-3]。奈達(dá)鉑具有骨髓抑制、肝腎功能異常、耳神經(jīng)毒性、脫發(fā)等不良反應(yīng)。國內(nèi)外對奈達(dá)鉑的血藥濃度測定方法少見報道，本文采用HPLC[4-6]法測定人血清奈達(dá)鉑濃度，以NH2柱為色譜柱，使靈敏度、保留時間及峰形等色譜指標(biāo)更理想，具有簡便、快速和靈敏的特點，對奈達(dá)鉑臨床合理用藥具有重要意義。

圖1 奈達(dá)鉑的結(jié)構(gòu)式

1 材 料

1.1 儀器

高效液相色譜儀 (包括510泵，7725i進(jìn)樣器，996二極管陣列檢測器，Millenium232數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，美國Waters公司)；XW280A旋渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠)；LD422低速離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)。

1.2 藥品與試劑

奈達(dá)鉑對照品(南京東捷藥業(yè)有限公司提供，批號：20091006，純度﹥99.5%)；注射用奈達(dá)鉑(商品名：捷佰舒，南京東捷藥業(yè)有限公司，批號：11-101204)；乙腈為色譜純；其他試劑均為市售分析純；水為自制去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱 Spherisorb NH2(4.0 mm×300 mm，10 μm)；流動相：40 mmol·L-1磷酸二氫鉀-乙腈(8∶2)；流速:0.8 mL·min-1；檢測波長：210 nm；柱溫：24℃；進(jìn)樣量：20 μL；理論板數(shù)應(yīng)不低于 2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取奈達(dá)鉑對照品12.5 mg于25 mL量瓶中，加水溶解并定容至刻度,配制成500μg·mL-1的對照品溶液，置于4℃冰箱避光保存。

2.3 血清樣品處理

血清樣品0.5 mL置具塞試管中，加入0.1 mL 28%硫酸鋅溶液，氯仿 2.5 mL，振蕩 1.5 min，3000 r·min-1離心 8 min，取上清液 20 μL 進(jìn)樣。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取奈達(dá)鉑儲備液適量，加空白血清配成血藥濃度分別為 5、10、20、30、40、50 μg·mL-1的模擬血清樣品,按“2.3”項下操作,取上清液 20 μL 進(jìn)樣。以峰面積(Y)對質(zhì)量濃度(X)作線性回歸，得回歸方程：A=1.045×104C-1.024×104，r=0.9995。 結(jié)果表明，奈達(dá)鉑濃度在 5～50 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 專屬性試驗

以“2.1”項下色譜條件，分別按“2.3”項下血清處理方法處理空白血清和加入奈達(dá)鉑的對照品血清，取處理后的上清液各20 μL進(jìn)樣。結(jié)果奈達(dá)鉑能與內(nèi)源性物質(zhì)較好的分離，保留時間為4.99min。見圖2。

圖2 奈達(dá)鉑的液相色譜圖

2.6 回收率和精密度試驗

分別精密吸取奈達(dá)鉑對照品溶液和空白血清適量，配成含奈達(dá)鉑 5、20、40 μg·mL-1濃度樣品各 5份，按“2.4”項操作測定，計算回收率和日內(nèi)、日間（連續(xù)3d進(jìn)行重復(fù)日內(nèi)試驗）精密度。結(jié)果日內(nèi)回收率結(jié)果分別為：96.7%、97.2%、97.8%，RSD分別為2.09%、1.98%、3.19%(n=5)；日間回收率結(jié)果分別為：98.4%、98.2%、99.6%，RSD 分別為 2.27%、2.13%、1.92%(n=5)。

2.7 臨床應(yīng)用

腫瘤化療住院患者5例，奈達(dá)鉑給藥劑量為80 mg·m-2。奈達(dá)鉑溶于 0.9%氯化鈉注射液 500 mL，靜脈滴注60 min以上，滴完約0.5 h時取血2 mL，4000 r·min-1離心 2 min；吸取血清 0.5 mL，按“2.3”項測定奈達(dá)鉑血藥濃度。測得5例患者奈達(dá)鉑血藥濃度分別為 31.3、20.4、25.8、29.7、30.1 μg·mL-1。

3 討 論

鉑類藥物應(yīng)用于臨床時常因為毒性帶來化療延期甚至中斷，此類藥物的血藥濃度與療效呈正相關(guān)，而發(fā)生骨髓抑制等毒副作用也與劑量相關(guān)[7]，所以測定奈達(dá)鉑血藥濃度為臨床合理用藥提供重要方法學(xué)依據(jù)。生物樣品HPLC法前處理包括：去蛋白和被測組分的提取，本文采用硫酸鋅沉淀蛋白、氯仿分離內(nèi)源性干擾雜質(zhì)方法處理血清，被測組分被提取入上清液，蛋白沉淀在最底層，采用高效液相色譜法分離奈達(dá)鉑與雜質(zhì)，以峰面積(A)對濃度(C)進(jìn)行線性回歸測定奈達(dá)鉑血藥濃度，方法簡便、準(zhǔn)確，可用于奈達(dá)鉑的藥代動力學(xué)研究和臨床血藥濃度監(jiān)測。

[1] Ogawa M,Ariyoshi Y.New anticancer drugs under clinical trials in Japan[J].Hematol Oncol Clin North Am,1994,8(2):277-87.

[2] Hartman JT,Lipp HP.Toxicity of platinum compounds[J].Expert Opin Pharmacother,2003,4(6):889-901.

[3] 張 頻，馮奉儀，吳令英，等.奈達(dá)鉑治療惡性腫瘤的臨床研究[J]. 中華腫瘤雜志，2006，28(3)：230-4.

[4] 蔡 梅，徐薇薇.高效液相色譜法測定注射用卡鉑和奈達(dá)鉑的含量[J]. 海峽藥學(xué)，2007，19(1)：22-4.

[5] 畢同香，劉明潔，薛克亮，等.奈達(dá)鉑的HPLC測定法[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2000，31(10)：457-8.

[6] 陳祥峰，袁 玉.RP-HPLC法測定注射用奈達(dá)鉑含量及有關(guān)物質(zhì)[J]. 藥物分析雜志，2008，28(1)：131-3.

[7] 高允華，朱玉云，金京順，等.卡鉑對腫瘤患者的藥物動力學(xué)與藥效學(xué)[J].中國臨床藥學(xué)雜志，1999，8(4)：214-6.