高效液相色譜法測定復(fù)方萘甲唑啉鼻噴霧劑含量

2011-05-17 09:56:10周建林杜長生

藥學(xué)與臨床研究 2011年4期

周建林，杜長生

南京星銀藥業(yè)有限公司，南京 211200

復(fù)方萘甲唑啉鼻噴霧劑主要含有萘甲唑啉和馬來酸氯苯那敏，兩者分別為抗組胺和血管收縮藥，對鼻黏膜充血、腫脹有較好的療效。適用于急性鼻炎、鼻竇炎以及變態(tài)反應(yīng)性鼻炎的發(fā)作期。目前含鹽酸萘甲唑啉和馬來酸氯苯那敏的復(fù)方制劑，有滴鼻液、滴眼液等，對兩藥的含量測定，部頒標(biāo)準(zhǔn)[1]采用分光光度法，本文則綜合考察文獻(xiàn)方法[2-5]建立高效液相色譜法，測定該劑型兩成分含量。

1 儀器和試藥

LC-10ATVP 高效液相色譜儀 (日本島津)，SPD-10AVP紫外檢測器，CTO-10AVP柱溫箱，浙大N-2000色譜工作站。

復(fù)方萘甲唑啉鼻噴霧劑樣品（規(guī)格：10 mL，鹽酸萘甲唑啉5 mg，馬來酸氯苯那敏10 mg）批號為090601、090701、090702、090703、090704，由南京星銀藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；鹽酸萘甲唑啉對照品、馬來酸氯苯那敏對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；三乙胺、磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱為漢邦 C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-三乙胺-磷酸二氫鉀-磷酸（540︰460︰2︰3.4︰1）；流速 1 mL·min-1；柱溫 30℃；紫外檢測波長264 nm；進(jìn)樣量20 μL。理論塔板數(shù)按萘甲唑啉峰計(jì)算不低于3000；按氯苯那敏峰計(jì)算不低于3000。萘甲唑啉和氯苯那敏的分離度大于1.5。主藥、雜質(zhì)呈基線分離。液相色譜圖見圖1。

圖1 鹽酸萘甲唑啉、馬來酸氯苯那敏的液相色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的鹽酸萘甲唑啉對照品25 mg，馬來酸氯苯那敏對照品50 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；再精密量取5 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液精密量取供試品5mL置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取馬來酸氯苯那敏對照品20 mg和鹽酸萘甲唑啉對照品10 mg，置于50 mL量瓶中，加水適量使溶解，后加水稀釋至刻度，搖勻，制成混合對照溶液。分別精密吸取上述混合對照溶液1、2、3、5、10 mL分別置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取上述5種濃度對照液20 μL注入液相色譜儀，測定峰面積，以進(jìn)樣濃度X（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程分別為：馬來酸氯苯那敏：Y=1.84×104X+3.45×103,r=1.0000；鹽酸萘甲唑啉：Y=2.75×104X-1.38×104，r=0.9976。結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏濃度在 8.03～80.30 μg·mL-1和鹽酸萘甲唑啉濃度在4.04～40.40 μg·mL-1線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

分別精密吸取復(fù)方萘甲唑啉鼻噴霧劑供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，按上述色譜條件連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，RSD為0.87%。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取復(fù)方萘甲唑啉鼻噴霧劑供試品按上述供試品溶液的制備方法，平行制備5份供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，計(jì)算鹽酸萘甲唑啉的含量為98.9%，RSD=0.9%，馬來酸氯苯那敏的含量為97.8%，RSD=1.2%。

2.6 回收率試驗(yàn)

取復(fù)方萘甲唑啉鼻噴霧劑供試品5份，分別精密吸取5mL，置于100mL量瓶中，精密加入鹽酸萘甲唑啉對照品溶液和馬來酸氯苯那敏對照品溶液各5mL，用水溶解稀釋至刻度，進(jìn)樣20 μL，測得回收率為98.22%～100.13%，n=5，RSD＜0.85%。分別稱取鹽酸萘甲唑啉和馬來酸氯苯那敏的對照品，配制成濃度為0.6 mg·mL-1和 1.2mg·mL-1、0.5mg·mL-1和 1.0mg·mL-1、0.4 mg·mL-1和 0.8mg·mL-1,考察了高、中、低 3 個(gè)劑量的回收率，分別為98.58%、99.14%、100.43%。

2.7 穩(wěn)定性考察

取供試品溶液在 0、2、4、6、8、10、12 h 測定峰面積，計(jì)算RSD=1.7%。表明供試品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 最小檢測限

取馬來酸氯苯那敏對照品溶液（濃度0.04 mg·mL-1），逐級稀釋，直至信噪比（S/N）=3，最小檢測濃度為 2 ng·mL-1，檢測限度為 0.04 ng(2 ng·mL-1×20 μL)。

取鹽酸萘甲唑啉對照品溶液（濃度0.05mg·mL-1），逐級稀釋，直至信噪比（S/N）=3，最小檢測濃度為12.5 ng·mL-1，檢測限度為 0.25ng(12.5ng·mL-1×20μL)。

2.9 含量測定

5個(gè)不同批號的供試品分別用高效液相色譜法與分光光度法測定標(biāo)示含量，結(jié)果見表1。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)考察了流動相中不同比例甲醇-水、甲醇-磷酸二氫鉀溶液體系對測定的影響，在甲醇-水為流動相時(shí)，馬來酸氯苯那敏出現(xiàn)分裂峰，說明流動相比例和流動相的pH值不適宜，造成馬來酸氯苯那敏的分裂峰，出現(xiàn)了馬來酸和氯苯那敏兩個(gè)峰；當(dāng)改變流動相條件，加入磷酸二氫鉀溶液和三乙胺，能改善馬來酸氯苯那敏的峰形和解決鹽酸萘甲唑啉、馬來酸氯苯那敏峰形拖尾現(xiàn)象。合適的磷酸二氫鉀溶液濃度能避免色譜柱的堵柱現(xiàn)象。本法在進(jìn)行輔料干擾試驗(yàn)時(shí)，未發(fā)現(xiàn)輔料對測定結(jié)果的干擾。本法能夠有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。