美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)大鼠心律失常的保護(hù)作用

彭 麗，陸 麗，張旭強(qiáng)，甘 平，何 旭，陳俊雅，彭 芳*

（1.德宏州芒市人民醫(yī)院麻醉科，云南德宏 678400；2.大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)大鼠心律失常的保護(hù)作用

彭 麗1，陸 麗2，張旭強(qiáng)2，甘 平2，何 旭2，陳俊雅2，彭 芳2*

（1.德宏州芒市人民醫(yī)院麻醉科，云南德宏 678400；2.大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

目的：研究美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)烏頭堿致大鼠心律失常的保護(hù)作用，并初步探討其作用機(jī)制。方法：采用股靜脈注射烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常，觀察CⅡ-3對(duì)烏頭堿致VP、VT、VF、CA用量和VP、VT、VF、CA發(fā)生率及心律失常評(píng)分的影響，測(cè)定大鼠血清中CK和LDH的活性。結(jié)果：一定劑量的CⅡ-3可以提高烏頭堿所致大鼠VP、VT、VF、CA的用量（P<0.05，0.01），能降低大鼠VT、VF、CA的發(fā)生率及大鼠心律失常評(píng)分，降低血清中CK的活性（P<0.05，0.01），但對(duì)LDH的活性影響甚?。≒> 0.05）。結(jié)論：CⅡ-3對(duì)烏頭堿誘導(dǎo)的大鼠心律失常具有一定的保護(hù)作用。

美洲大蠊；CⅡ-3；心律失常；烏頭堿

近年來(lái)隨著我國(guó)對(duì)傳統(tǒng)中醫(yī)藥資源研究開(kāi)發(fā)的重視，學(xué)者們對(duì)蜚蠊科昆蟲(chóng)進(jìn)行了系列的研究，并取得一定的成果。已有研究表明，從美洲大蠊中提取制備的心脈隆注射液（XML）具有溫和持久的強(qiáng)心、升壓作用，同時(shí)能增加心輸出量及改善微循環(huán)和興奮呼吸等作用〔1-4〕，提示美洲大蠊中具有較好的心血管活性物質(zhì)。為了從美洲大蠊中尋找心血管活性作用強(qiáng)且安全性高的新型治療心血管疾病的藥物，有必要對(duì)美洲大蠊提取物做更進(jìn)一步的研究。CⅡ-3是大理學(xué)院藥學(xué)工作者采用新工藝從美洲大蠊中提取分離得到的物質(zhì)，我們就其對(duì)烏頭堿所致大鼠心律失常是否有保護(hù)作用進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，為開(kāi)發(fā)美洲大蠊系列藥物提供依據(jù)，也為研制心血管疾病藥物打下一定的基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1動(dòng)物Sprague-Dawley（SD）大鼠，雌雄各半，體重180~220 g，購(gòu)自中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)，合格證號(hào)：SCXK（渝）2007003。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.2儀器BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；1.0型高速低溫離心機(jī)（德國(guó)Heraeus），XW-80A型漩渦混合器（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；JH-C-06-04型紫外分光光度計(jì)（上海青華科技儀器有限公司）；HS21-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋（北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠）。

1.3試劑與藥品乳酸脫氫酶（LDH）測(cè)試盒（批號(hào)：20100720）；肌酸激酶（CK）測(cè)試盒（批號(hào)：20100724），以上試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。烏頭堿（上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司；批號(hào)：100324）；鹽酸胺碘酮片（江蘇晨牌藥業(yè)有限公司；批號(hào)：100104）。美洲大蠊提取物CⅡ-3由大理學(xué)院劉光明教授提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1連續(xù)恒速靜注烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失?！?-9〕

取健康的SD大鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為陰性對(duì)照組（0.5%CMC-Na 10 mL/kg）、陽(yáng)性對(duì)照組（胺碘酮5 mg/kg）、CⅡ-3高、中、低劑量組（分別為100 mg/kg；50 mg/kg；25 mg/ kg）。各組大鼠均灌胃給藥，給藥容量10 mL/kg，每日一次，連續(xù)給藥7 d，于末次給藥60 min后，用25%烏拉坦（4 mL/kg）腹腔麻醉，仰臥固定，用BL-420E+生物信號(hào)采集系統(tǒng)記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖（ECG），穩(wěn)定10 min，棄去ECG不正常的大鼠。暴露股靜脈，將濃度為10μg/mL烏頭堿以0.1 mL/min用恒流泵經(jīng)股靜脈滴注，記錄大鼠出現(xiàn)室性早博（VP）、室性心動(dòng)過(guò)速（VT）、心室纖顫（VF）及心臟停搏（CA）的時(shí)間，然后計(jì)算出現(xiàn)VP、VT、VF、CA時(shí)烏頭堿累積用量（μg/kg）。

2.2一次靜注烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常〔10-13〕取健康的SD大鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為陰性對(duì)照組（0.5%CMC-Na 10 mL/ kg）、陽(yáng)性對(duì)照組（胺碘酮5 mg/kg）、CⅡ-3高、中、低劑量組（分別為100 mg/kg；50 mg/kg；25 mg/kg）。各組大鼠均灌胃給藥，給藥容量10 mL/kg，1次/d，連續(xù)給藥7 d，于末次給藥60 min后，用25%烏拉坦（4 mL/kg）腹腔麻醉，仰臥固定，用BL-420E+生物信號(hào)采集系統(tǒng)記錄Ⅱ?qū)?lián)ECG，穩(wěn)定10 min，每組均棄去2只ECG不正常的大鼠。暴露股靜脈，從股靜脈注入烏頭堿30μg/kg，5 s內(nèi)注射完，記錄ECG 30 min。記錄各組動(dòng)物VP、VT、VF、CA的發(fā)生率及計(jì)算心律失常評(píng)分。然后眼球取血，3 500 r/min，4℃低溫離心15 min，取血清備用。按試劑盒測(cè)定大鼠血清中LDH和CK活性。心律失常評(píng)分法：采用Curtis.Walker法結(jié)合Mest法。在每段觀察時(shí)間內(nèi)取其最嚴(yán)重的一種心律失常相對(duì)應(yīng)的分?jǐn)?shù)作為其心律失常評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：0分，無(wú)心律失常；1分，房性心律失常，偶發(fā)室性早博；2分，室性早博二聯(lián)律，三聯(lián)律，頻發(fā)室性早博，Ⅱ°房室傳導(dǎo)阻滯；3分，短陣室性心動(dòng)過(guò)速，多源室性早博；4分，室性心動(dòng)過(guò)速，Ⅲ°房室傳導(dǎo)阻滯；5分，心室纖顫、死亡。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.5處理，多組均數(shù)間比較采用One-way ANOVA，兩組樣本率比較用Fishers確切概率法。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 CⅡ-3對(duì)連續(xù)恒速靜注烏頭堿致大鼠心律失常的影響由表1可見(jiàn)，與陰性對(duì)照組比較，CⅡ-3高劑量組能提高烏頭堿所致大鼠VP的用量（P< 0.05）；CⅡ-3中、高劑量組能提高烏頭堿所致大鼠VT的用量，其中劑量組的效果更明顯（P<0.01）；CⅡ-3三個(gè)劑量組均能提高烏頭堿所致大鼠VF的用量（P<0.05），以中、高劑量組的效果更明顯（P<0. 01）；CⅡ-3中、高劑量組能顯著提高烏頭堿所致大鼠CA的用量（P<0.05）。但CⅡ-3組對(duì)抗VP、VF、CA作用效果均明顯弱于胺碘酮組（P<0.01）。

表1 CⅡ-3對(duì)連續(xù)恒速靜注烏頭堿致大鼠VP、VT、VF、CA的影響

表1 CⅡ-3對(duì)連續(xù)恒速靜注烏頭堿致大鼠VP、VT、VF、CA的影響

*P<0.05，**P<0.01與陰性對(duì)照組比較；#P<0.05，##P<0.01與胺碘酮組比較

組別 劑量/（mg/kg） 烏頭堿的閾劑量/（μg/kg）VP VT VF CA陰性對(duì)照組 — 27.45±0.51## 31.53±2.73 37.25±1.53## 44.40±8.65##胺碘酮組 5.0 48.72±0.58** 53.68±2.20** 84.42±5.89** 110.85±16.65** CⅡ-3低劑量組 25.0 29.64±3.57## 35.32±1.96 45.03±1.66*## 53.56±11.65## CⅡ-3中劑量組 50.0 31.23±5.88## 39.15±4.73** 54.62±6.20**## 62.63±10.45*## CⅡ-3高劑量組 100.0 35.24±3.21*## 38.25±2.82* 59.83±6.84**## 68.26±9.45*##

4.2 CⅡ-3對(duì)一次靜注烏頭堿致大鼠心律失常的影響由表2、3可見(jiàn)，CⅡ-3低劑量組略能降低烏頭堿致大鼠VT、VF、CA的發(fā)生率，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CⅡ-3中劑量組能降低烏頭堿致大鼠VT、VF、CA的發(fā)生率（P<0.05）；CⅡ-3高劑量組能降低烏頭堿致大鼠VF、CA的發(fā)生率（P<0.05）。CⅡ-3中、高劑量組能降低大鼠心律失常的嚴(yán)重程度（P<0.05），其中CⅡ-3中劑量組作用效果更明顯（P<0.01）。由表3可見(jiàn)，與陰性對(duì)照組比較，CⅡ-3高、中劑量組與胺碘酮組一樣能降低CK活性（P<0.05）。CⅡ-3三個(gè)劑量組LDH活性略低于模型對(duì)照組，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 CⅡ-3對(duì)一次靜注烏頭堿致大鼠心律失常發(fā)生率及心律失常評(píng)分的影響（

表2 CⅡ-3對(duì)一次靜注烏頭堿致大鼠心律失常發(fā)生率及心律失常評(píng)分的影響（

*P<0.05，**P<0.01與陰性對(duì)照組比較；#P<0.05，##P<0.01與胺碘酮組比較

組別 劑量/（mg/kg） 發(fā)生率/% 心律失常評(píng)分VP VT VF CA陰性對(duì)照組 — 100.0# 87.5# 87.5## 75.0## 4.50±1.41##胺碘酮組 5.0 50.0* 12.5* 0.0** 0.0** 0.88±1.36** CⅡ-3低劑量組 25.0 100.0 75.0 62.5# 62.5# 3.75±2.05## CⅡ-3中劑量組 50.0 100.0 37.5* 25.0* 25.0* 2.25±1.83** CⅡ-3高劑量組 100.0 87.5 50.0 25.0* 25.0* 2.37±1.92*

表3 CⅡ-3對(duì)一次靜注烏頭堿致心律失常大鼠血清中CK和LDH活性的影響（

表3 CⅡ-3對(duì)一次靜注烏頭堿致心律失常大鼠血清中CK和LDH活性的影響（

*P<0.05，與陰性對(duì)照組比較；#P<0.05，與胺碘酮組比較

組別 劑量/（mg/kg） CK/（U/mL） LDH/（U/mL）陰性對(duì)照組 — 1.57±0.23# 5.78±1.13胺碘酮組 5.0 1.04±0.27* 4.98±0.83 CⅡ-3低劑量組 25.0 1.49±0.23# 5.71±0.19 CⅡ-3中劑量組 50.0 1.13±0.29* 4.99±0.57 CⅡ-3高劑量組 100.0 1.18±0.14* 5.17±0.63

5 討論

目前，烏頭堿誘導(dǎo)心律失常是用來(lái)篩選抗心律失常藥物常用的模型之一。烏頭堿致心律失常的機(jī)制〔14-17〕為烏頭堿能激活心肌細(xì)胞的快Na+通道，使Na+通道開(kāi)放，加速心肌細(xì)胞Na+內(nèi)流，促使細(xì)胞膜去極化，提高心臟起搏點(diǎn)及房室束浦肯野系統(tǒng)的自律性，從而形成一源性或多源性異位節(jié)律。另外還可以明顯增加鈣離子內(nèi)流，抑制外向鉀電流，使復(fù)極時(shí)間延長(zhǎng)，超過(guò)原有動(dòng)作電位時(shí)程（APD）的20%，增加后除極發(fā)生率，引起折返激動(dòng)，最終導(dǎo)致心律失常的發(fā)生。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明一定濃度的CⅡ-3可以提高烏頭堿所致大鼠VP、VT、VF、CA的用量（P<0.05），能降低大鼠VT、VF、CA的發(fā)生率和心律失常評(píng)分（P< 0.05），說(shuō)明CⅡ-3對(duì)烏頭堿誘導(dǎo)的心律失常有較好的保護(hù)作用。

烏頭堿導(dǎo)致心律失常時(shí)可損害血管內(nèi)皮功能及心肌細(xì)胞，引起血清中CK和LDH增高。LDH是一種寡聚酶，可催化乳酸及丙酮酸的可逆轉(zhuǎn)化。該酶廣泛分布在心肌、紅細(xì)胞、骨骼肌和肝臟中，它在細(xì)胞液中的含量非常豐富，因而所催化的反應(yīng)非常迅速，是細(xì)胞呼吸鏈上的重要生物酶。心肌細(xì)胞受到損害，導(dǎo)致組織缺氧，細(xì)胞糖酵解作用旺盛，丙酮酸在其作用下轉(zhuǎn)變成乳酸的過(guò)程加強(qiáng)，LDH活性的升高意味著無(wú)氧酵解過(guò)程加強(qiáng)，有氧氧化過(guò)程受抑制，能量供應(yīng)障礙，反應(yīng)能力下降。CK是心肌細(xì)胞線(xiàn)粒體內(nèi)外能量轉(zhuǎn)換中的關(guān)鍵酶，它將直接影響心肌細(xì)胞的能量貯存、轉(zhuǎn)運(yùn)及利用，從而影響心臟的收縮功能。其活性增加被認(rèn)為是心肌細(xì)胞損傷最敏感的指標(biāo)之一。所以本實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠血清中的CK和LDH活性進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CⅡ-3能降低血清中CK活性（P<0.05），說(shuō)明CⅡ-3對(duì)烏頭堿致大鼠心肌細(xì)胞損害有防治作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CⅡ-3只能部分降低LDH的活性，與陰性對(duì)照組比較，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其原因可能是LDH廣泛分布在心肌、紅細(xì)胞、骨骼肌和肝臟中，當(dāng)烏頭堿導(dǎo)致大鼠心律失常的同時(shí)也損傷了其它組織器官，進(jìn)而使大鼠血清中LDH的活性大大增強(qiáng)，而一定量的CⅡ-3不能完全抵抗LDH的這種活性。

本實(shí)驗(yàn)表明，CⅡ-3對(duì)烏頭堿誘導(dǎo)的大鼠實(shí)驗(yàn)性心律失常具有較好的保護(hù)作用，其作用可能與離子通道和抗脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)，其具體的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

〔1〕張利.心脈隆注射液的藥理作用和臨床療效〔J〕.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2001，20（4）：250.

〔2〕唐曉鴻.心脈隆注射液藥理作用和治療心力衰竭臨床研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)新藥雜志，2008，17（6）：461-462.

〔3〕彭芳，方春生，劉曉波，等.心脈龍注射液對(duì)家兔離體血管平滑肌的影響〔J〕.大理醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，10（2）：3-4.

〔4〕黃躍華，王新華，王德成，等.心脈隆對(duì)兩種實(shí)驗(yàn)性心臟疾病模型的治療作用〔J〕.昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1991，12（2）：23-26.

〔5〕孫麗娜，徐艷霞，郜文，等.823膠囊抗心律失常的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中藥新藥與臨床藥理，2010，21（1）：29-31.

〔6〕劉建和，胡熙苒，何少平，等.柴胡三參膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性心律失常保護(hù)作用的研究〔J〕.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2010，8（9）：1073-1075.

〔7〕陳蘭英，羅雄，羅穎穎，等.炙甘草湯對(duì)氣血兩虛證心律失常大鼠血清炎癥因子和心肌酶的影響〔J〕.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21（7）：1631-1633.

〔8〕仁增拉姆，汪俊.脂聯(lián)素對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷時(shí)心律失常的影響〔J〕.心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2009，18（6）：535-538.

〔9〕楊萍，賈鈺華，李杰.丹參酮ⅡA對(duì)缺血再灌注損傷大鼠心律失常及IMA、H-FABP水平的影響〔J〕.中藥新藥與臨床藥理，2009，20（6）：517-520.

〔10〕孫志堅(jiān)，邱祥春，陳國(guó)權(quán)，等.冠心舒通膠囊對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心律失常的保護(hù)作用〔J〕.內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，24（6）：681-682.

〔11〕蘇彥宏，李慧蘭.左旋千金藤定堿抗心律失常作用的研究〔J〕.昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，（10）：23-25.

〔12〕高紅，楊娟英，盧露，等.益心解毒顆粒對(duì)動(dòng)物心律失常的保護(hù)作用〔J〕.世界中醫(yī)藥，2009，4（4）：228-229.

〔13〕王星禹，張志雄，劉愛(ài)華.銀杏酮酯（GBE50）抗心律失常作用研究〔J〕.中國(guó)中藥雜志，2010，35（2）：199-203.

〔14〕雷懷成，宋道江，易建華，等.大鼠烏頭堿中毒心肌細(xì)胞凋亡的研究〔J〕.中國(guó)工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2004，17（6）：373-374.

〔15〕肖桂林，劉國(guó)棟，劉發(fā)益，等.雙黃連注射液治療烏頭堿中毒所致心律失常的臨床研究〔J〕.中國(guó)急救醫(yī)學(xué)，2004，24（2）：140-141.

〔16〕龔冬梅，單宏麗，周宇宏，等.哇巴因和烏頭堿誘發(fā)豚鼠和大鼠心律失常的離子作用靶點(diǎn)〔J〕.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2004，39（5）：328-332.

〔17〕馮慶芝.阿托品對(duì)烏頭堿中毒致嚴(yán)重心律失常患者內(nèi)皮功能的影響及其臨床意義〔J〕.中國(guó)循環(huán)雜志，2005，20（3）：200-202.

*通信作者：彭芳，教授，碩士研究生導(dǎo)師.

（責(zé)任編輯 毛本勇）

Protective Effect of Periplaneta Americana Extract CⅡ-3 against Arrhythmia in Rats PENG Li1，LU Li2,ZHANG Xuqiang2,GAN Ping2,HE Xu2,CHEN Junya2,PENG Fang2*

（1.Department of Anesthesiology,People's Hospital of Mangshi,Dehong,Yunnan 678400,China; 2.School of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To explore the protective effect and mechanism of CⅡ-3 extracted from Periplaneta americana against arrhythmia induced by aconitine in rats.Methods:Arrhythmia in rat was induced by aconitine with femoral vein injection,with different doses of CⅡ-3 treatment,the incidence rates of ventricular premature beats（VP）,ventricular tachycardia（VT）,ventricular fibrillation（VF）and cardiac arrest（CA）were recorded,and the arrhythmia score,activity of CK and LDH were detected.Results: The amount of aconitine in inducing VP,VT,VF and CA was increased after CⅡ-3 treatment,which showed decreased incidences of VT,VF,CA and the arrhythmia score,as well as the the activity of CK（P<0.05）.However,there was no influence of CⅡ-3 on the activity of LDH.Conclusion:The data demonstrated that there was remarkable protective effect of CⅡ-3 against arrhythmia induced by aconitine in rats.

Periplaneta americana;CⅡ-3;arrhythmia;aconitine

R 285.5

A

1672-2345（2011）12-0006-04

2011-06-08

2011-09-15

彭麗，主治醫(yī)師，主要從事麻醉醫(yī)學(xué)研究.