乳腺癌中 β-catenin、cyclinD1、c-myc表達及意義

何艷姣 喬 超 劉朝霞 俞 進 李 光

(首都醫科大學附屬北京天壇醫院病理科，北京 100050)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發病率在我國逐年增高并逐漸趨于年輕化，嚴重威脅婦女生命健康。從信號轉導途徑治療腫瘤是目前生物治療的新興領域。Wnt信號通路是目前已知的胚胎發育所必需的信號通路，經典Wnt信號轉導通路致癌的關鍵是該途徑任何一個信號分子異常導致β-catenin在細胞質/核內累積，研究［1-2］表明，在多種人類腫瘤均發現 βcatenin異常表達和β-catenin基因突變，并與腫瘤發生相關，cyclinD1、c-myc是Wnt信號轉導通路非常重要的靶基因，本研究擬通過檢測正常乳腺組織、乳腺增生癥和乳腺癌中β-catenin、cyclinD1、c-myc的表達情況，評價它們的異常表達與臨床病理指標的關系，同時做β-catenin異常表達與cyclinD1、c-myc過表達相關性研究，旨在初步探討Wnt信號轉導通路中重要因子β-catenin及其靶基因cyclinD1、c-myc與乳腺癌發生發展的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

取自首都醫科大學附屬北京天壇醫院病理科40例正常乳腺組織、72例乳腺增生癥及119例乳腺癌標本及臨床資料，所有病例均經病理證實。常規10%中性甲醛固定、石蠟包埋。切片厚度4 μm，常規HE染色。

1.2 免疫組化染色

石蠟切片常規脫蠟至水，染色方法按S-P試劑盒說明書步驟進行，0.01 mol/L枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)微波修復18 min行抗原修復，第一抗體(鼠抗人β-catenin、cyclinD1、c-myc單克隆即用型抗體均購自北京中杉金橋公司)4℃過夜。經DAB顯色后，蘇木素復染，中性樹膠封片。陰性對照采用0.01 mol/L PBS(pH=7.4)液體代替一抗，其他步驟不變。S-P及DAB試劑盒均購自北京中杉金橋公司。

1.3 結果判定標準

在正常情況下β-catenin陽性染色定位于細胞膜，即連續的細胞膜染色。染色結果判斷標準按Maruyama K等［3］的方法，分別從細胞膜、細胞質、細胞核3方面判斷β-catenin在細胞內的分布:細胞膜＞70%細胞陽性為正常表達，反之為表達缺失;細胞質或細胞核＞10%細胞陽性為胞質或胞核陽性表達，胞質或胞核表達為異位表達。異位表達和表達缺失統歸為異常表達。

cyclinD1表達于細胞核，c-myc在細胞核和細胞質均可出現陽性，隨機選取10個高倍視野，每個視野計數100個瘤細胞，計數陽性細胞百分比，＞10%為過度表達。

1.4 統計學方法

采用SPSS 11.0統計分析軟件進行分析，采用卡方檢驗和確切概率法，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌、乳腺增生癥及正常乳腺組織中β-catenin、cyclinD1、c-myc的表達情況

119例乳腺癌中26例 β-catenin正常表達(圖1A)，正常表達率為21.85%。93例β-catenin異常表達(圖1B)，異常表達率為78.15%;69例cyclinD1陽性表達(圖1C)，陽性表達率為57.98%;67例 c-myc陽性表達(圖1D)，陽性表達率為56.30%。

圖1 乳腺浸潤性導管癌組織SP法免疫組化染色結果Fig.1 Breast infiltrating ductal cancer by immunohistochemistry SP method(200×)

72例乳腺增生癥中β-catenin的異常表達率為44.44%(32/72)，cyclinD1 的陽性表達率為 33.33%(24/72)，c-myc的陽性表達率為 27.78%(20/72)。

40例正常乳腺組織中β-catenin在細胞膜中強表達，cyclinD1及c-myc陰性表達。乳腺癌β-catenin異常表達率明顯高于乳腺增生癥，組間比較差異有統計學意義(P＜0.01)，乳腺癌cyclinD1陽性表達率高于乳腺增生癥，組間比較差異有統計學意義(P=0.001)，乳腺癌c-myc陽性表達率高于乳腺增生癥，組間比較差異有統計學意義(P＜0.01)。

2.2 β-catenin、cyclinD1、c-myc的表達與乳腺癌臨床病理資料相關性

β-catenin、cyclinD1的表達與淋巴結轉移相關(P=0.031，P=0.003)，與年齡、部位、腫瘤大小、組織學類型無關，c-myc的表達與腫瘤大小和淋巴結轉移相關(P均=0.041)，與年齡、部位、組織學類型無關，見表1。

表1 β-catenin、cyclinD1、c-myc的表達與乳腺癌臨床病理資料相關性Tab.1 The relationship between β-catenin，cyclinD1，c-myc and clinicopathological index in breast carcinoma n(%)

2.3 乳腺癌中 β-catenin的異常表達與cyclinD1、cmyc的表達相關性

β-catenin的異常表達與 cyclinD1的表達相關(P=0.006)，與 c-myc的表達無關，見表2。

表2 乳腺癌中β-catenin的異常表達與cyclinD1、c-myc的表達相關性Tab.2 The relationship between expression of β-catenin and cyclinD1，c-myc in breast carcinoma

3 討論

經典Wnt信號轉導通路致癌的關鍵是該途徑任何一個信號分子異常致β-catenin在細胞質/核內累積。β-catenin是一種多功能細胞質內的可溶性蛋白，由于它在細胞黏附和增生過程中的雙重作用，已成為腫瘤發生發展機制研究中的熱點。近來研究［4］表明，β-catenin在細胞質和核內的累積是惡性腫瘤中的常見事件之一，在結直腸腺瘤和癌等多種腫瘤中均發現β-catenin異常表達并與腫瘤發生相關，但在乳腺癌中的報道結果不一致。Bankfalvi A等［5］發現從乳腺正常組織到浸潤癌的發展過程中β-catenin膜表達下調，認為β-catenin的改變是乳腺癌發生過程中的早期事件。Lin S Y等［6］、Lim S C 等［7］、López-Knowles E 等［8］報道了乳腺癌中β-catenin的異常表達與預后不良有關，可以作為乳腺癌的獨立預后因子。而Chung G G等［9］研究表明β-catenin異常表達與預后無關，只有同時存在β-catenin異常表達和p53高表達時才與預后不良有關，因此，βcatenin不能作為乳腺癌的獨立預后因子。王珂等［10］研究表明β-catenin異常表達與Her2陽性表達有關，二者異常表達協同促進乳腺癌細胞的淋巴結轉移。本研究發現乳腺癌β-catenin異常表達率明顯高于乳腺增生癥，組間比較差異有統計學意義，表明β-catenin異常表達在乳腺癌發生發展過程中起重要作用。同時發現βcatenin的異常表達與淋巴結轉移相關，表明其可以用于評價乳腺癌的預后。

CyclinD1和c-myc作為原癌基因，參與細胞的增生、分化與凋亡，并且與多種腫瘤發生發展有關。近來研究［1-2］顯示，cyclinD1、c-myc是Wnt信號轉導通路非常重要的靶基因，免疫組化研究證實在多種腫瘤中cyclinD1、c-myc過表達與β-catenin異常表達和Wnt突變有關。在乳腺癌中，僅有少數研究報道了β-catenin異常表達與cyclinD1、c-myc過表達的相關性，且意見不一致，如 Ozaki S等［11］研究顯示β-catenin異常表達與 cyclinD1、c-myc過表達有關，Roh M S 等［12］研究顯示β-catenin異常表達可上調c-myc表達，Lin S Y等［6］證實β-catenin異常表達與cyclinD1高表達相關，Lim S C等［7］研究顯示 β-catenin異常表達與 cyclinD1過表達無關。本研究顯示cyclinD1、c-myc的過表達與淋巴結轉移相關，表明它們也可以作為評價乳腺癌轉移、預后的重要因子。同時β-catenin異常表達與cyclinD1過表達相關，而與c-myc過表達無關，表明β-catenin在乳腺癌發生過程中的作用可能是通過上調cyclinD1的表達，導致細胞外基質降解和細胞增生分化失控而實現的。

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