痰濕體質與瘦素基因C2549A SNP多態性相關性研究

周 菁，羅海明

(上海中醫藥大學附屬岳陽醫院 心內科，上海 200437)

痰濕體質是指因先天遺傳，或后天過食肥甘等因素，而至津液運化失司，痰濕凝聚，以黏滯重濁為主要特征的體質狀態[1]。該體質人群易患胸痹、消渴等病證，但其患病機制尚未完全明確。之前已有研究[2-4]報道痰濕體質具有遺傳特異性，我們前期的研究[5]也發現痰濕體質與低密度脂蛋白受體基因PvuⅡ、AvaⅡ多態性相關,且這種低密度脂蛋白受體基因PvuⅡ、AvaⅡ多態性的差別直接導致痰濕體質人群與平和質人群之間血脂指標的不同。但這項研究距離揭示痰濕體質人群易患胸痹、消渴等病證的本質原因相差甚遠。瘦素(Leptin，LEP)是肥胖基因(ob)在脂肪細胞表達的產物。LEP具有抑制食欲、減少脂肪合成、增加肌體耗能等作用，并對肥胖、糖尿病、心血管疾病、生殖系統疾病等產生影響。因此，痰濕體質人群較平和質人群更易患冠心病、Ⅱ型糖尿病等疾病的原因，是否與瘦素基因多態性相關聯值得我們進行深入探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 全部104例研究對象均為上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院自2009年1月-2010年12月收治的心血管內科住院病人。按納入標準，分為痰濕體質組和平和質組[1]。其中痰濕體質組58例，男30例，女28例,平均年齡(58.04±11.39)歲；平和質組46例，男25例，女21例，平均年齡(58.04±11.69)歲。2組間一般情況比較，無統計學意義。

1.2 檢測方法

1.2.1 基因組DNA提取及PCR擴增 取ACD抗凝外周血1.0 mL,用北京天根生物提供的全血DNA試劑盒(DP304)提取基因組DNA。PCR擴增瘦素，上游引物：5’-TTTCCTGAATTTTCCCGTGAG -3’；下游引物:5’-AAAGCAAAGACAGGCATAAAAA -3’。PCR循環參數:94 ℃預變性3 min，94 ℃變性40 s、55 ℃、58 ℃退火1 min、72 ℃延伸1 min，35個循環，72 ℃延伸5 min→4 ℃ 保存。用1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析PCR擴增產物。

1.2.2 限制性內切酶酶切反應 取PCR產物5 μL加限制性內切酶cfoI 0.5 μL,反應體系20 μL,置37 ℃水浴2 h酶切。酶切產物用2%瓊脂糖凝膠電泳分離，紫外線檢測。

1.3 統計學方法 采用SPSS 17.0統計軟件,計數資料比較用χ2檢驗。P≤0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 瘦素基因C2549A SNP多態性基因型檢測結果 瘦素LEP2549 C/A的PCR擴增產物長度為242 bp，經限制性內切酶cfoI酶切后，產生3種基因型，即CC型、CA型、AA型。CC型顯示242 bp 1條帶，CA型顯示242 bp、181 bp和61 bp 3條帶，AA型顯示181 bp和61 bp 2條帶(見圖1)。

2.2 2組基因型分布 見表1。

表1 2組瘦素LEP2549 C/A基因型分布 例

2.3 2組等位基因頻率比較 見表2。

表2 2組瘦素LEP2549 C/A等位基因頻率比較

圖1 瘦素基因C2549 SNP多態性基因型檢測結果

3 討論

瘦素(LEP)作為一種調節分子,在糖、脂等物質代謝過程中具有重要作用，近年的研究[6]揭示其在代謝性疾病中有重要作用。瘦素與糖尿病之間最直接的聯系莫過于瘦素與胰島素的相互作用。胰島素不僅作用在脂肪細胞上刺激瘦素分泌，同時也作用在瘦素的靶細胞上限制瘦素的功能，它可能是糖尿病發病早期代償性高胰島素血癥和“瘦素抵抗”相伴發的原因之一。瘦素與胰島素抵抗密切相關,胰島素抵抗是Ⅱ型糖尿病的重要致病因素之一。鑒于瘦素基因的生物活性及其基因多態性特點,可能瘦素基因是Ⅱ型糖尿病的候選基因之一。

此外，瘦素與血脂代謝異常及冠心病密切相關。大量研究[7]表明，瘦素促進泡沫細胞的形成除了增加清道夫受體外,還與以下病理過程有關：1)瘦素增加巨噬細胞酰基輔酶A：膽固醇酰基轉移酶1的表達，促進巨噬細胞內膽固醇酯的蓄積，加速泡沫細胞的形成，導致動脈粥樣硬化的發生發展[8]。2)瘦素增加3-羥基-3·甲基戊二酰輔酶A還原酶的活性，從而增加單核細胞中內源性膽固醇的合成，有助于泡沫細胞和動脈粥樣硬化斑塊的形成[9]。3)瘦素激活磷脂酰肌醇-3激酶使巨噬細胞活化后，不僅使細胞內脂肪組織分化相關蛋白表達增加，而且使細胞質中富含脂肪組織分化相關蛋白的脂滴形成增加。細胞內脂肪組織分化相關蛋白表達的增加，將促進中性脂肪如三酰甘油和膽固醇在細胞內的沉積而減少它們的流出，增加脂滴對脂解作用的穩定性[10]。這些病理過程均有助于泡沫細胞的形成，加速動脈粥樣硬化的發生發展。因此瘦素與動脈粥樣硬化以及冠心病的發生息息相關。且研究[11]發現瘦素基因A-2549C多態性與個體空腹血漿瘦素水平相關。因此，瘦素基因多態性可能也是導致冠心病的原因之一。

因瘦素基因多態性與糖尿病/冠心病等疾病的發生密切相關,而痰濕體質人群較平和質人群更易患糖尿病/冠心病等疾病，因此,痰濕體質是否與瘦素基因多態性相關吸引著我們的關注。

本課題研究發現，瘦素LEP2549 C等位基因頻率痰濕體質組高于平和質組，但2組間統計無統計學意義(P>0.05)。該結果提示，痰濕體質與瘦素基因2549C/A SNP多態性有某種程度的相關，但依據目前結果暫不能將該基因多態性作為區分2種體質人群的遺傳標志物，2種體質人群間的差異性仍需我們擴大樣本量再進行深入研究。

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