利用GC－MS法比較三種不同當歸揮發(fā)油提取方法的研究

孫宇靖 王亞麗

甘肅中醫(yī)學院，甘肅 蘭州 730000

當歸為傘形科植物當歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根，味甘、辛、溫。具有補血活血、調經止痛之功效［1］。其揮發(fā)油主要含藁本內酯、正丁烯酰內酯等多種成分。國內外研究者對當歸揮發(fā)性成分的提取分析方法進行了很多研究［2－4］，多采用水蒸氣蒸餾法和超臨界CO2萃取法進行提取，而采用有機溶劑超聲提取法提取當歸藥材揮發(fā)油的研究較少。本文分別采用水蒸氣蒸餾和有機溶劑超聲提取法對當歸揮發(fā)油進行提取，采用GC－MS法進行分析對比，得到當歸揮發(fā)油的最佳提取方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 HP6890/5975N型氣相色譜－質譜聯(lián)用儀;HY－04型高速粉碎機，北京環(huán)亞天元機械技術有限公司;AS7240B型超聲器，天津奧特賽恩斯儀器有限公司;HHS型恒溫水浴鍋，余姚市檢測儀表廠;SHZ－D(A)型循環(huán)水真空泵，天津華鑫儀器廠。

1.2 試藥 正己烷 (分析純):上海中秦化學試劑有限公司;石油醚 (分析純):天津市恒興化學試劑制造有限公司。當歸采自甘肅岷縣中藥材種植示范園，由甘肅中醫(yī)學院生藥教研室鑒定。

2.1 進樣條件

2.1.1 色譜條件 升溫程序為:70℃開始，以4℃/min升至130℃，再以 2℃/min升至170℃，再以 8℃/min升至250℃，保留10 min;He氣柱流量1.0mL/min;進樣口溫度:250℃;進樣量:0.2μL。

2.1.2 質譜條件 標準EI源 (轟擊能量為70eV)，離子源溫度230℃，掃描質量范圍40－550aum。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 水蒸氣蒸餾法 取干燥當歸藥材粉碎，過40目篩。稱取當歸藥材粉末80.00g于圓底燒瓶中，加適量水與玻璃珠數(shù)粒，振搖混合后浸泡過夜，按2010版《中國藥典》方法［5］提取8小時，用旋轉蒸發(fā)儀除去溶劑，所得揮發(fā)油用正己烷定容于10mL量瓶中，用0.22μm微孔濾膜過濾，備用。

2.2.2 有機溶劑超聲提取法 取干燥當歸藥材粉碎，分別精密稱取粉末5.00g于100mL具塞錐形瓶中，加50mL正己烷和石油醚溶劑超聲提取30min，過濾，重復提取一次，合并提取液，離心上清液用定容于10mL量瓶中，用0.22μm微孔濾膜過濾，備用。

3 結果

3.1 最佳進樣條件的確定 參考有關當歸GC－MS方面的文獻報道，綜合考慮峰面積、峰個數(shù)、分離度、實驗時間等幾個因素后，確定2.1中的進樣條件為最佳進樣條件。表1為篩選過程中進樣的色譜條件，其對應的色譜圖見圖1，最后確定進樣條件為6(圖2)。

表1 色譜進樣條件篩選

圖1 GC－MS進樣條件篩選圖

圖2 最佳進樣條件的GC－MS色譜圖

3.2 方法學考察

3.2.1 精密度考察 取岷縣當歸藥材供試品溶液按2.1進樣條件連續(xù)進樣5次，測定指紋圖譜。計算得圖譜相似度＞0.97，各共有峰面積的RSD＜0.72%，符合指紋圖譜要求，精密度良好。

3.2.2 穩(wěn)定性考察 取岷縣供試品溶液，分別在0，4，8，24、48h時間點測定色譜指紋圖譜。計算得圖譜相似度＞0.90，各共有峰面積的RSD＜1.80%，表明樣品在36h內穩(wěn)定性良好。

3.3 不同提取方法提取的揮發(fā)油比較 取岷縣的當歸藥材，按2.2中的不同方法制備供試品溶液，所得揮發(fā)油的物理性質見表2。取供試品溶液按2.1進樣方法進樣，所得色譜圖見圖3。

表2 不同提取方法的揮發(fā)油比較

4 討論

4.1 由表2，表3和圖3可知，正己烷超聲提取法的提取藥材量小，揮發(fā)油得率高，提取時間短，操作簡單，是當歸揮發(fā)油提取的最佳方法。但正己烷提取物不可避免的含溶劑氣味，因此此方法更加適用于實驗室當歸藥材揮發(fā)油的提取。

圖3 當歸不同提取方法所得揮發(fā)油的色譜比較圖

4.2 本文建立的當歸藥材GC－MS分析條件具有良好的精密度和穩(wěn)定性，可為以后當歸藥材揮發(fā)油的研究提供依據(jù)。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.2010年版一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:124.

［2］劉琳娜，梅其炳，程建峰，等.當歸揮發(fā)油的化學成分分析［J］.中成藥，2005，27(2):204－206.

［3］張守堯，王鵬，張忠義，等.超臨界CO2萃?。肿诱麴s對當歸的提取分離［J］.解放軍藥學學報，2003，19(5):375－377.

［4］賀殿，張國福，邵長江，等.當歸的兩種提取工藝研究［J］.中成藥，2005，27(5):599－601.

［5］國家藥典委員會.中華人民共和國藥2010年版一部［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，附錄63.