子癇前期患者胎盤組織中 HSP-27的表達(dá)變化及意義

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(1井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院,江西吉安 343000;2井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

近年來,普遍認(rèn)為子癇前期發(fā)病與胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞缺血、缺氧有關(guān)。研究表明,機(jī)體在缺血、缺氧這種應(yīng)激狀態(tài)下,作為分子伴侶的熱休克蛋白能提高細(xì)胞對應(yīng)激損傷的耐受性,發(fā)揮抗氧化損傷的作用[1]。2008年 9月～2009年 12月,本研究觀察子癇前期患者胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中熱休克蛋白 27(HSP-27)的表達(dá)變化,并探討其與子癇前期發(fā)生的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 子癇前期產(chǎn)婦 26例,年齡 22～36歲,孕周 37～40周。其中輕度 12例 (輕度組)、重度 14例(重度組)。健康孕婦 30例(對照組),年齡24～32歲,孕周 37～41周。三組均為單胎。三組產(chǎn)婦年齡、孕周等一般資料相比,P均 ＞0.05。均以剖宮產(chǎn)終止妊娠。

1.2 胎盤組織中 HSP-27的檢測 三組胎盤娩出后,在胎盤臍帶附著處母體面的中心部位,剪下 1 cm×1 cm×1 cm的組織,每組各 2塊。漂洗干凈后,1塊用 10%中性甲醛固定,室溫梯度酒精脫水,石蠟包埋;另 1塊用 EP管裝好后迅速放入 -70℃冰箱保存。采用免疫組化法及 Western blot法測各組胎盤組織中的 HSP-27。①免疫組化檢測結(jié)果判定:以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為HSP-27陽性細(xì)胞。a.按陽性細(xì)胞百分比計(jì)分[2]:陽性細(xì)胞百分比 ＜5%、5～10%、11%～50%、＞50%分別記 0、1、2、3分 。b.按著色程度計(jì)分 :著色淺,但與未著色的陰性對照片有明顯區(qū)別記 1分;染色強(qiáng)度為中等者記 2分;細(xì)胞著色與已知陽性照片同樣強(qiáng)記 3分。上述兩項(xiàng)記分相加,0分為 HSP-27陰性、1～2、3～4、5～ 6分分別為弱陽性、陽性 、強(qiáng)陽性。弱陽性～強(qiáng)陽性為 HSP陽性。②Western blot檢測結(jié)果分析:用 Fluor-s凝膠成像分析系統(tǒng)對蛋白條帶進(jìn)行分析,計(jì)算蛋白相對含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料比較用方差分析,計(jì)數(shù)資料比較用 χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

HSP-27定位于滋養(yǎng)細(xì)胞胞質(zhì)和胞核,以胞質(zhì)為主。對照組 HSP-27表達(dá)陽性 8例,輕度、重度組分別為 9、13例,三組相比,P均 ＜0.05。對照組、輕度組、重度組 HSP-27蛋白相對表達(dá)量分別為 0.33±0.10、0.56±0.16、0.96±0.25,三組相比,P均 ＜0.01。

3 討論

HSP是生物細(xì)胞受到熱、病原體、理化因素等有害刺激后啟動(dòng)合成的蛋白質(zhì)。HSP最主要的功能是在細(xì)胞遭受應(yīng)激損害時(shí),可作為分子伴侶,提高應(yīng)激狀態(tài)下細(xì)胞對應(yīng)激損傷的耐受性[3,4]。HSP可分為五大家族,分別是 HSP110、HSP90、HSP70家族、中等分子量 HSP60家族和小分子量HSP(sHSP)家族。目前對 sHSP的研究甚少。HSP-27是 sHSP家族重要成員之一。研究[4]顯示,HSP-27在小鼠缺血—再灌注誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷心臟組織中大量表達(dá)。

近年來,缺氧引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)與子癇前期發(fā)生發(fā)展的關(guān)系逐漸受到重視。氧化應(yīng)激反應(yīng)的增強(qiáng)可能導(dǎo)致子癇前期病情不同程度的加重[5]。Shah等[6]研究發(fā)現(xiàn),在早、中、晚孕的蛻膜間質(zhì)細(xì)胞中均可檢測到 HSP-27,其僅在早中孕的合體滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá),主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。Dodge等[7]發(fā)現(xiàn)子癇期胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中 HSP-27表達(dá)增加。

本研究分別采用免疫組化法及 Western blot法檢測了正常孕婦與輕、重度子癇前期患者胎盤組織的 HSP-27,結(jié)果顯示,HSP-27在子癇前期患者合體滋養(yǎng)細(xì)胞胞質(zhì)及胞核中表達(dá),且以胞質(zhì)為主,與相關(guān)研究結(jié)果一致;輕、重度組胎盤組織中 HSP-27蛋白相對表達(dá)量高于對照組,且重度組高于輕度組,提示子癇前期患者胎盤組織 HSP-27蛋白表達(dá)水平升高,且與子癇前期嚴(yán)重程度有關(guān)。由此我們推測,缺氧導(dǎo)致的氧化應(yīng)激參與了子癇前期發(fā)病,而 HSP-27高表達(dá)對子癇前期胎盤組織有保護(hù)作用。其機(jī)制可能為:HSP-27發(fā)揮分子伴侶作用,促進(jìn)錯(cuò)誤蛋白質(zhì)的降解,防止蛋白質(zhì)變性,促使胎盤組織細(xì)胞從應(yīng)激中恢復(fù);發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用,保護(hù)細(xì)胞及細(xì)胞器如線粒體免受損傷,減少 Ca2+內(nèi)流,減輕其引起的細(xì)胞毒性及細(xì)胞凋亡;抑制炎癥發(fā)展,降低進(jìn)一步的血管內(nèi)皮損傷及缺血、缺氧。HSP-27在子癇前期胎盤組織中的作用及其確切機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

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