胎兒骨骼染色透明標本的設(shè)計與制作

楊小龍，王志超，何頂正，丁雪貞，劉 涵，何 康，付黎影，馬玉卿

胎兒骨骼染色透明標本是在保持胎兒外形完整的情況下，利用物理和化學(xué)的方法，使軟組織的折光率與透明劑相近［1］。從而在胎兒外形完整的基礎(chǔ)上顯示出胎兒整體骨骼的位置關(guān)系和形態(tài)特征。胎兒骨骼染色透明標本為醫(yī)學(xué)教學(xué)提供了直觀的標本，并為觀察和判定胎兒各期骨骼的發(fā)育情況提供了重要的參考價值。

1 材料和方法

1.1 材料 固定液:10%的甲醛溶液;漂白液:6%的過氧化氫;脫水劑:50%、70%、90%、95%酒精;透明劑:4%的氫氧化鉀、甘油;染色液:茜素紅0.04 g 、氫氧化鉀2 g、蒸餾水100 g;男性胎兒新鮮尸體1 具(孕育4 個月左右)，為河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科引產(chǎn)胎兒。

1.2 清洗 首先用流水將胎兒表面的污垢、血跡清洗干凈，然后邊沖洗邊輕輕擠壓胎兒胸、腹腔，從口腔、肛門排出體內(nèi)的內(nèi)容物。不去除內(nèi)臟及腦組織以保證胎兒的完整性。

1.3 排血 排血是制作此標本的重要基礎(chǔ)。在胎兒胸骨柄處打開一個口，以找到心臟及其各大出入血管，先剪斷下腔靜脈進行排血，然后將升主動脈和肺動脈干起始部結(jié)扎，從升主動脈注射肝素溶液，直至從靜脈端流出的為無色肝素溶液為止，胎兒變成蒼白色即可。

1.4 固定 先將胎兒姿勢固定好，然后將胎兒浸入10%甲醛溶液中固定5 d。

1.5 漂白 將固定后的標本用流水沖洗12 h 左右，然后將標本浸泡于6%過氧化氫溶液中3 ～4 d，以去掉胎兒組織中的色素和污物。

1.6 脫水 先將漂白過的胎兒標本用流水沖洗12 h 左右，然后將胎兒標本浸泡于各級酒精中進行脫水，其濃度依次為:50%、70%、90%、95%，每級脫水5 d。在脫水過程中可用針扎標本，這樣既利于脫水又利于透明。

1.7 透明 依據(jù)標本的大小，采用4%的氫氧化鉀溶液透明。每隔2 ～3 d 換溶液1 次，待組織充分透明即可。

1.8 骨骼染色 將透明的標本移入染色液中進行3～5 d 的骨骼染色。當硬骨和骨鈣化點部位完全著色時，立即取出標本，以免肌肉過度染色。

1.9 軟組織脫色 將標本浸泡于各級甘油中進行脫色，其濃度依次為:30%、50%、70%，每級脫色2 d，待軟組織脫去浮色即可。

1.10 二次透明 將脫色后的標本置于甘油中進行二次透明，期間可用注射器在肌肉較厚的部位注入甘油，增強透明的效果。

1.11 保存 將透明完全的胎兒標本進行整理修飾，然后將標本置于冬青油中密封保存。

2 結(jié)果

制作好的胎兒骨骼染色透明標本軟組織呈無色透明狀，硬骨和骨鈣化點被染成紫紅色，且骨骼界限清晰，易于識別。能夠在胎兒外形完整的情況下直接觀察胎兒內(nèi)部整體的骨骼位置關(guān)系和形態(tài)特征。

3 討論

3.1 標本制作中的注意事項 ①制作透明標本的材料應(yīng)力求新鮮，有利于排血和透明。假如標本放置時間過長，常因凝血阻塞血管而影響沖洗及排血效果。②透明標本的制作有兩個關(guān)鍵步驟，即漂白和脫水［2］。在保證標本不被損壞的前提下漂白要充分，提高漂白液濃度的確會縮短漂白時間，但對組織的損傷較大，為保證胎兒良好的外形，可用低濃度的漂白劑漂白，并適當延長漂白時間。③脫水也是制作此標本的關(guān)鍵步驟。標本經(jīng)徹底脫水后透明劑才易于滲入組織內(nèi)，從而達到透明的目的。但因酒精的脫水能力強，滲透速度快，用較高濃度的酒精脫水胎兒標本會明顯地收縮硬化而導(dǎo)致外形的改變［3］。因此我們采用多級酒精脫水法，依次將標本放入50%、70%、90%、95%的酒精中脫水各5 d，減輕了標本的收縮和外形的改變，維持了胎兒的正常形態(tài)。④機體質(zhì)量越重，年齡越大，堅實程度越強，堿液滲入組織也越困難［4］。所以標本在用氫氧化鉀透明時要依據(jù)標本的年齡、質(zhì)量、堅實程度，選擇適當濃度的氫氧化鉀進行透明，以免濃度過高，腐蝕標本。⑤根據(jù)材料的大小調(diào)配染色液的濃度和染色時間。染色時要經(jīng)常觀察，把握染色時間和染色程度以免產(chǎn)生染色過度，造成脫色困難，影響透明效果。

3.2 胎兒骨骼染色透明標本的作用 隨著醫(yī)學(xué)形態(tài)學(xué)和醫(yī)學(xué)影像學(xué)的發(fā)展，教學(xué)和臨床對骨骼標本的多樣性有了更高的要求。以往的教學(xué)只限于傳統(tǒng)的解剖實驗及理論講解，缺乏機體完整狀態(tài)下直接觀察骨骼的標本。因此給學(xué)生的學(xué)習(xí)和理解骨的發(fā)育帶來了不少困惑。透明標本的制作，為胚胎學(xué)的骨骼研究、比較解剖學(xué)的研究、醫(yī)學(xué)影像學(xué)的研究，提供了直觀、真實的形態(tài)學(xué)素材。在教學(xué)中通過與臨床影像學(xué)資料進行對比豐富了教學(xué)的手段，提高了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。使同學(xué)們對胎兒骨骼的發(fā)育過程和各骨的位置關(guān)系有了更直接的認知，鞏固了理論知識。同時，該標本可以長期保存，可作為展覽所用。

［1］李忠華，王興海.解剖學(xué)技術(shù)［M］. 第2 版. 北京:人民衛(wèi)生出版社，1997:184－187.

［2］張孝珍.簡談人體透明標本的制作原理及透明劑的選配方法［J］.武漢體育學(xué)院學(xué)報，1990，2:85－86.

［3］鄭輝，李云峰，徐貴清.透明標本材料的選擇和處理［J］.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2001，22:114－115.

［4］劉萬勝，黃明，劉力華.新生兒骨骼透明標本的制作［J］.衛(wèi)生職業(yè)教育，2004，22(14):94.