根管封閉劑封閉性能檢測(cè)方法研究進(jìn)展

房俊艷 賈云飛 宋永海 凌均棨

根管封閉劑應(yīng)具有良好的理化性能、生物相容性、封閉性[1]，理想的根管封閉效果是封閉劑同時(shí)粘結(jié)核心充填材料和牙本質(zhì)，形成緊密的一體化結(jié)構(gòu)[2]，封閉口腔和根尖周通道，防止感染的再次發(fā)生，促進(jìn)根尖周組織愈合。臨床常用的根管封閉劑在固化過(guò)程中存在聚合收縮、溶解等使封閉劑內(nèi)部、封閉劑/牙本質(zhì)、封閉劑/核心材料形成間隙，引發(fā)微滲漏[3]，導(dǎo)致根管治療失敗，因此封閉劑的封閉性是決定根管治療成敗的重要因素。檢測(cè)根管封閉性的方法有染料滲漏實(shí)驗(yàn)、葡萄糖滲漏實(shí)驗(yàn)、細(xì)菌滲漏實(shí)驗(yàn)、流體滲漏實(shí)驗(yàn)、電化學(xué)滲漏實(shí)驗(yàn)、熒光滲漏實(shí)驗(yàn)等。本文就封閉劑的封閉性檢測(cè)方法進(jìn)行綜述。

1 染料滲漏實(shí)驗(yàn)

染料滲漏是評(píng)價(jià)根管封閉劑封閉性最常用的方法之一，通過(guò)測(cè)量根管內(nèi)的線性染料滲漏長(zhǎng)度確定根尖封閉性，常用的染料是亞甲基藍(lán)。染料滲漏實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，封閉除根尖孔1mm的牙根表面，將根尖浸入染料中，一定時(shí)間后沿頰舌徑縱向剖開(kāi)牙根，測(cè)量根尖至冠方的染料滲入長(zhǎng)度，即為滲漏量[4]。亦有學(xué)者采用透明標(biāo)本技術(shù)[5]，將樣本經(jīng)酸脫礦、乙醇脫水、水楊酸甲酯透明后，無(wú)需破壞樣本，三維觀察充填材料的染料滲入情況。

染料滲漏實(shí)驗(yàn)的影響因素是沿根充材料的孔隙情況，材料中陷入的空氣影響染料的滲入，結(jié)果存在偏差。染料滲漏實(shí)驗(yàn)主要適用于封閉性能相對(duì)較好、與染料不發(fā)生反應(yīng)的材料的封閉性檢測(cè)。

2 流體滲漏實(shí)驗(yàn)

流體滲漏是將樣本的冠方和根方分別與毛細(xì)管相連，通過(guò)一側(cè)毛細(xì)管加壓觀察標(biāo)準(zhǔn)毛細(xì)管中氣泡移動(dòng)的刻度來(lái)計(jì)算液體滲漏量。此實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、可重復(fù)、使用方便，不破壞標(biāo)本，結(jié)果定量化，臨床相關(guān)性較好[3-6]。但如果材料微滲漏量較大，氣泡超出標(biāo)準(zhǔn)毛細(xì)管則無(wú)法測(cè)量滲漏量[7]。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意控制壓力的大小，待毛細(xì)管中的氣泡穩(wěn)定后進(jìn)行測(cè)試，并掌握時(shí)間，防止無(wú)效測(cè)量的發(fā)生。Taschieri等[8]用流體滲漏和染料滲漏對(duì)根尖切除倒充填的牙根進(jìn)行根尖封閉性檢測(cè)，后者檢測(cè)到滲漏，而前者未檢測(cè)到滲漏，分析原因?yàn)橐后w流動(dòng)實(shí)驗(yàn)只能檢測(cè)到連續(xù)性（through and through）孔隙，如果根管充填材料內(nèi)的孔隙不連續(xù)，流體滲漏模型毛細(xì)管中的遠(yuǎn)端氣泡無(wú)法移動(dòng)，未顯示刻度差值，結(jié)果偏差大。

流動(dòng)滲漏實(shí)驗(yàn)主要用于對(duì)“through and through”孔隙的評(píng)價(jià)，如果材料中的孔隙是不連續(xù)的盲端空隙，則無(wú)法檢測(cè)到微滲漏[8]。

3 細(xì)菌滲漏實(shí)驗(yàn)

細(xì)菌滲漏是將細(xì)菌與培養(yǎng)基的混合液作為滲漏液由牙根冠方向根方滲漏，根方為細(xì)菌培養(yǎng)基，通過(guò)觀察根方培養(yǎng)基的渾濁程度，定量計(jì)算滲漏量[9]。此種方法菌種的選擇范圍較大：有學(xué)者選用單一細(xì)菌[10]；亦有選擇多種菌的混合物，目的是獲得更接近于口腔的微環(huán)境[11]。其中唾液是口腔環(huán)境中導(dǎo)致微滲漏的主要因素，是細(xì)菌微滲漏模型中待滲漏液的最佳選擇對(duì)象。

細(xì)菌是有生命的生物，細(xì)菌滲漏過(guò)程中存在共生或抑制而出現(xiàn)數(shù)量或比例上的改變，整個(gè)過(guò)程保持動(dòng)態(tài)平衡[11]，臨床相關(guān)性和生物相關(guān)性較好。細(xì)菌滲漏受菌種分子大小及根管消毒技術(shù)的影響，細(xì)菌分子量大則滲漏速度慢，消毒效果較好者則細(xì)菌存活量低，微滲漏小[12]。Wu等[3]研究顯示細(xì)菌滲漏與孔隙的直徑有較高的相關(guān)性，檢驗(yàn)結(jié)果較染料滲漏精確。

4 電化學(xué)滲漏實(shí)驗(yàn)

電化學(xué)滲漏由Jacobson 和Fraunhofer于1976發(fā)明，可定量研究根尖微滲漏[13]。原理是滲入根管內(nèi)的電解液，與電極接觸形成電流，電流通過(guò)電解液（氯化鈉或氯化鉀）的時(shí)間和強(qiáng)度反應(yīng)材料微滲漏大小[14]。實(shí)驗(yàn)樣本除根尖孔外表面皆涂隔離物，將一側(cè)電極插入根管內(nèi)接觸充填材料，另一電極浸入電解液，在兩電極距離一定的情況下，電流大代表根充物孔隙大或充填材料被電解的多，電流強(qiáng)度與滲漏量成比例。

電化學(xué)滲漏實(shí)驗(yàn)可在持續(xù)的時(shí)間內(nèi)觀察滲漏情況，結(jié)果定量化[15]。因電解作用可導(dǎo)致根管封閉劑的某些成分電解成導(dǎo)電離子，產(chǎn)生孔隙造成更大的滲漏，所以此方法用于不易被電解、其它微滲漏方法檢測(cè)效果不佳的材料的封閉性檢驗(yàn)。

5 葡萄糖滲漏實(shí)驗(yàn)

葡萄糖滲漏是一種新的檢測(cè)微滲漏的方法，其原理是一定濃度的葡萄糖經(jīng)特定裝置由牙根冠方滲入根管充填材料內(nèi)部，一定時(shí)間后由樣本根方滲出，通過(guò)葡萄糖氧化酶比色法測(cè)定根方葡萄糖濃度計(jì)算滲漏量。常用的模型示蹤物為1mol/L的葡萄糖溶液（pH=7.0）。葡萄糖分子量小（180Da），具有親水性和化學(xué)穩(wěn)定性，可定量、連續(xù)性檢測(cè)微滲漏，方法靈敏、準(zhǔn)確。

葡萄糖微滲漏的缺點(diǎn)在于葡萄糖溶液的水分蒸發(fā)，導(dǎo)致濃度升高，Xu[16]等建議在蒸發(fā)的豎直管中加入去離子水以補(bǔ)充蒸發(fā)量，但可產(chǎn)生濃度梯度，亦存在偏差。Shemesh[6]等建議將此系統(tǒng)置于密閉裝置中，以減少水分的蒸發(fā)，增加結(jié)果精確性。葡萄糖微滲漏實(shí)驗(yàn)靈敏度較高適用于大多數(shù)根管充填材料的微滲漏檢測(cè)，此模型檢測(cè)的最大滲漏量是21mmol/L[6]，如果檢測(cè)的樣本滲漏值超過(guò)此極限則無(wú)法檢測(cè)微滲漏。

6 熒光滲漏實(shí)驗(yàn)

熒光滲漏實(shí)驗(yàn)采用熒光染料或熒光染料標(biāo)記物，如熒光素魯米那（luminol）或若丹明（rhodamine）標(biāo)記的脂多糖，由冠方向根方滲漏，一定時(shí)間后用激光共聚焦掃描電鏡（confocal laser scanning microscopy，CLSM）觀察熒光素滲入根管充填材料的部位及深度，通過(guò)熒光強(qiáng)度計(jì)算材料的滲漏情況[17]。檢測(cè)滲漏液的熒光強(qiáng)度和根管內(nèi)熒光劑的分布，即可獲得滲漏大小和根管內(nèi)滲漏的區(qū)域和路徑。

熒光素敏感性高，誤差小，定量分析滲漏大小，不受溫度和充填技術(shù)的影響。

7 放射性同位素滲漏實(shí)驗(yàn)

放射性同位素微滲漏是用放射性同位素（125I）標(biāo)記小分子物質(zhì)（如溶菌酶）后進(jìn)行滲漏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果定量化。Hakel等[18]利用放射性同位素微滲漏實(shí)驗(yàn)檢測(cè)封閉劑的滲漏情況：樣本冠方包埋后將根尖2mm置于125I標(biāo)記的溶菌酶溶液，一定時(shí)間后取出并處理樣本至無(wú)放射性，將樣本切片后通過(guò)γ計(jì)數(shù)器檢測(cè)每薄片的放射活性，可定量檢測(cè)根尖封閉性。

放射性同位素滲漏實(shí)驗(yàn)不受操作者主觀因素影響，容易分析和比較，且放射性同位素125I不與牙本質(zhì)發(fā)生離子交換，但應(yīng)避免使用與羥基磷灰石發(fā)生離子交換的放射性同位素。因放射性同位素有放射性損害，因此較少使用。

8 總結(jié)

評(píng)價(jià)微滲漏的方法較多，但各檢測(cè)方法缺少相關(guān)性，主要為各方法的實(shí)驗(yàn)原理及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)不同，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與所選用的實(shí)驗(yàn)方法密切相關(guān)[9-19]，因此應(yīng)根據(jù)材料的理化性能選擇合適的檢測(cè)方法，并根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適時(shí)改進(jìn)，以得到更有意義的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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