高效液相色譜法測定水果中吡蟲啉農(nóng)藥殘留量

何進林，張志華

(1.廣西出入境檢驗檢疫局賀州辦事處，廣西 賀州 542800；2.山西出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心，山西 太原 030024)

高效液相色譜法測定水果中吡蟲啉農(nóng)藥殘留量

何進林1，張志華2

(1.廣西出入境檢驗檢疫局賀州辦事處，廣西 賀州 542800；2.山西出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心，山西 太原 030024)

建立高效液相色譜法測定水果中的吡蟲啉殘留量的檢測方法。采用改進的QuEChERS方法，乙腈勻漿提取，提取液加C18和PSA填料凈化，液相色譜法檢測。結(jié)果表明：方法的定量檢測限為0.05mg/kg，標準曲線線性相關系數(shù)0.9988；當添加水平在0.05～0.20mg/kg范圍內(nèi)時，回收率均可在92%～102%之間，相對標準偏差在5%～11%之間。本方法是一種快速、準確、靈敏度高的同時檢測水果中吡蟲啉殘留的檢測方法。

水果；高效液相色譜法；吡蟲啉

吡蟲啉為高效廣譜殺蟲劑，具有內(nèi)吸、胃毒、拒食、驅(qū)避作用，其毒性呈典型的昆蟲神經(jīng)干擾作用，主要用來防治刺吸式口器害蟲。近年來，吡蟲啉在果樹上的使用量的逐年增加。目前，國內(nèi)外已制訂了多種農(nóng)產(chǎn)品中吡蟲啉殘留限量標準，尤其是日本開始實施的“肯定列表制度”，對農(nóng)藥的限量進行了嚴格規(guī)定，例如梨中的限量為1mg/kg[1]。為使我國水果產(chǎn)品順利出口，探索水果中吡蟲啉殘留快速準確的分析方法顯得極為迫切，吡蟲啉的測定方法多為色譜法，但操作繁瑣，文獻[2-15]報道用乙腈或乙醇提取樣品，經(jīng)反萃取或固相萃取凈化后進行測定。本實驗結(jié)合QuEChERS前處理技術(shù)，采用HPLC法檢測。QuEChERS方法是2003年由美國化學家Steven J. Lehotay 和德國Michelangelo Anastassiadas 提出的一種快速、簡單、低成本的樣品處理方法，該方法的關鍵是采用分散固相萃取凈化法，即提取液直接加入PSA吸附劑粉末進行凈化，經(jīng)離心后上清液上機檢測[15-17]。本實驗在此方法的基礎上，對樣品的提取及凈化都進行了改進，除用PSA粉外，加入ODSC18粉提高凈化效果，旨在為水果中吡蟲啉殘留量的檢測方法的建立提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

水果 市售。

乙腈(色譜純)、Cleanert PSA填料、Cleanert C18填料、0.45μm的有機相濾膜 博納艾杰爾科技；氯化鈉(分析純) 天津科密歐公司；吡蟲啉(imidacloprid)標準品(純度97.0%) Dr.Ehrenstorfer公司。

吡蟲啉標準溶液：準確稱取標準品溶于乙腈，配成100μg/mL的儲備液，使用時再稀釋成適當質(zhì)量濃度的標準工作溶液。

1.2 儀器與設備

2690高效液相色譜儀(配有紫外檢測器) 美國Waters公司；23K臺式高速冷凍離心機 美國Sigma公司；Vortex Genie2旋渦混合器 美國Vortex-Genie公司；FASTH21高通量勻漿機 瑞士Consual公司。

1.3 色譜分析條件

色譜柱：Ultimate OR C18(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫：室溫；流速：1.0mL/min；檢測波長：270nm；進樣量：20μL；流動相為乙腈-水(70:30，V/V)。

1.4 樣品處理

取試樣可食用部分，粉碎并混合均勻，準確稱取5g(精確至0.01g)，置于勻漿管中，加入10.0mL乙腈和1g氯化鈉，10000r/min勻漿1min。以4000r/min離心5min。取1mL上清液加入25mg PSA和25mg C18，渦流混合30s，過0.45μm的有機相濾膜待測。

1.5 高效液相色譜法測定

將配制好的標準溶液和處理好的樣品溶液按照1.3節(jié)的色譜條件依次進樣，進行定性及定量分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

在190～400nm波長范圍內(nèi)對吡蟲啉標準溶液進行波長掃描，在270nm波長處有最大吸收。因此本實驗選270nm為檢測波長。流動相中乙腈的比例越高，吡蟲啉出峰越早，比較流動相V(乙腈):V(水)為80:20、70:30、50:50三種比例，發(fā)現(xiàn)當流動相比例為V(乙腈):V(水)=70: 30時，目標峰和雜質(zhì)可以實現(xiàn)完全分離，而且峰型較好。因此選取流動相比例為V(乙腈):V(水)=70:30。

2.2 提取凈化條件的選擇

綜合國內(nèi)外文獻，農(nóng)產(chǎn)品中吡蟲啉殘留的提取溶劑有4種，即乙腈、甲醇、丙酮、乙酸乙酯。考慮到乙腈是一種多殘留方法中常用的溶劑，對于方法的多殘留農(nóng)藥檢測的適用性，而且它在飽和NaCl溶液的存在下能很好的與水分層，使得溶于水的一部分干擾雜質(zhì)被去除，而對于非極性干擾物可以進一步用固相萃取等方法凈化，這樣可以避免CH2Cl2的使用。因此用乙腈作為提取溶劑提取吡蟲啉農(nóng)藥。

原QuEChERS快速多農(nóng)藥殘留分析方法采用振蕩提取，然后從提取液中取2mL進行凈化；改進后的方法采用乙腈均質(zhì)提取，提取效率更高，尤其對于纖維較長、不易制備為均勻試樣的樣品。水果中主要是一些有機酸、部分色素、維生素有干擾。PSA去除脂肪酸效果較好，在去除色素、甾醇和維生素方面效果一般，而ODS C18可以去除一些維生素、色素、甾醇。對于色素石墨化炭黑的去處效果最佳，但是水果提取液中量不大，當加入PSA和C18時即可滿足要求。因此本方法加入兩種填料來凈化。分別加入PSA和C18兩種填料5、10、25、40、50mg比較凈化效果，發(fā)現(xiàn)隨著填料的增多，凈化效果越來越顯著，當增加到25mg后再增加沒有效果，固最終確定為添加PSA和C18各添加25mg，同時做了回收率實驗，發(fā)現(xiàn)回收率滿足要求。

按本實驗方法處理的蘋果、梨的空白色譜圖和添加0.05mg/kg吡蟲啉的色譜見圖1，可以看出本方法處理的樣品對吡蟲啉的檢測沒有干擾。

圖1 各樣品的色譜圖Fig.1 Chromatogram of each sample

2.3 標準曲線和檢出限

將吡蟲啉標準貯備液依次稀釋至0.02、0.05、0.10、0.20、0.50μg/mL的系列標準溶液，用上述色譜條件進行色譜分析。每個質(zhì)量濃度進樣至少重復3次，得到峰面積的平均值。根據(jù)不同進樣濃度和相應峰面積大小繪制吡蟲啉的標準曲線，以峰面積為縱坐標，以進樣質(zhì)量濃度為橫坐標繪制標準曲線。吡蟲啉標準曲線線性方程是y=9×10-6x-0.0016，相關系數(shù)為r=0.9988，線性范圍為0.02～0.50μg/mL。

按照國際純粹與應用化學聯(lián)合會(IUPAC)的定義，定量限以RSN＞10計。以空白基質(zhì)加標的方法，確定本方法定量限為0.05mg/kg，完全符合國內(nèi)外最高殘留限量(MRL)的要求。吡蟲啉的液相色譜見圖2。

圖2 0.025mg/L吡蟲啉標準色譜圖Fig.2 Chromatogram of imidacloprid standard

2.4 精密度和回收率實驗

用空白樣品加標方法進行回收率和精密度實驗。分別對蘋果和梨進行3個不同水平的加標，每個水平平行測定10次，計算回收率和相對標準偏差，結(jié)果見表1。從表1可以看出，當添加水平在0.05～0.20mg/kg范圍內(nèi)，回收率均可在92%～102%之間，相對標準偏差在5%～11%之間。

表1 水果中吡蟲啉殘留量的回收率和變異系數(shù)(n=10)Table 1 Recovery rates and relative standard deviations ofimidacloprid residue in spiked blank fruits (n=10)

3 結(jié) 論

本實驗建立高效液相色譜檢測蘋果、梨中吡蟲啉殘留量的方法，該法的定量限為0.05mg/kg，可以滿足國內(nèi)外對水果中吡蟲啉殘留量的要求；方法的回收率和精密度符合實驗要求，同時方法簡便、易操作、成本低，適用于日常檢驗。

[1]食品中農(nóng)藥化學品殘留限量編委會. 食品中農(nóng)藥化學品殘留限量: 藥品卷[M]. 北京: 中國標準出版社, 2006: 758.

[2]江蘇出入境檢驗檢疫局. SN/T 1017. 8 —2004 進出口糧谷中吡蟲啉殘留量檢測方法液相色譜法[S].

[3]王安群, 彭鳳仙, 鄧益群. 高效液相色譜法同時測定吡蟲啉和多效唑[J]. 精細化工中間體, 2004, 34(2): 72-73.

[4]高蓉, 趙人琤, 肖杭. 高效液相色譜法測定黃瓜中吡蟲啉和嘧霉胺殘留量[J]. 現(xiàn)代農(nóng)藥, 2004, 3(6): 21-23.

[5]農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心(杭州). DB33/T 600—2006 蔬菜、水果中吡蟲啉殘留量測定方法[S].

[6]農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心. NY/T 1275—2007 蔬菜水果中吡蟲啉殘留量的測定[S].

[7]樊苑牧, 顧曉俊, 俞雪鈞, 等. 高效液相色譜法測定蔬菜和水果中吡蟲啉農(nóng)藥殘留量[J]. 分析科學學報, 2007, 23(5): 583-585.

[8]董靜, 宮小明, 張立, 等. QuEChERS高效液相色譜法檢測蔬菜中的吡蟲啉、蟲酰肼、阿維菌素和噻螨酮[J]. 分析試驗室, 2008, 27 (3): 91-94.

[9]何松濤, 俞曄, 乙小娟, 等. 固相萃取-高效液相色譜同時測定水果蔬菜中吡蟲啉、吡蟲清殘留量[J]. 檢驗檢疫科學, 2006,16(3): 49-51.

[10]陳黎, 王金芳, 杜鵬, 等. 韭菜中吡蟲啉和啶蟲脒殘留的微波處理-逆固相分散法凈化及液相色譜檢測[J]. 分析化學, 2008, 36(10): 1364-1368.

[11]歐菊芳, 陳銘學, 支建梁. 凝膠滲透色譜凈化液相色譜法測定稻米中吡蟲啉的殘留量[J].分析實驗室, 2008, 27(增刊1): 279-282.

[12]孫江莉. 糧食作物中殘留吡蟲啉的提取凈化和分析方法[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學, 2008, 36(35): 15673-15675.

[13]龐民好, 康占海, 陶晡, 等. 基質(zhì)固相分散-高效液相色譜法測定小麥籽粒中吡蟲啉和啶蟲脒殘留[J]. 農(nóng)藥學學報, 2008, 10(4): 491-494.

[14]劉永波, 劉海山, 王紅芳. 固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定蔬菜-水果中吡蟲啉殘留量[J]. 理化檢驗: 化學分冊, 2007, 43(1): 23-25.

[15]LEHOTAY S J, MAITOVSKA K, YUN S J. Evaluation of two fast and easy methods for pesticide residue analysis in fatty food matrixes[J]. Journal of Aoac International, 2005, 88(2): 630-638.

[16]ANASTASSIADES M, LEHOTAY S, STAJNBAHER D. Fast and easy multiresidue method employing a ,,cetonitrile extraction/partitioning and , , dispersive solid-phase extraction for the determination of pesticide residues in produce[J]. Journal of AOAC International, 2003, 86(2): 412-431.

[17]LEHOTAY S J. Quick, easy, cheap, effective, rugged and safe (QuEchERS) approach for determining pesticide residues[M]. New York, USA: Humana Press Inc., 2004.

Determination of Imidaclprid Residue in Fruits by HPLC

HE Jin-lin1，ZHANG Zhi-hua2
(1. Hezhou Dumex, Guangxi Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Hezhou 542800, China；2. Technology Center, Shanxi Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Taiyuan 030024, China)

A high performance liquid chromatography (HPLC) method was developed to determine imidaclprid residue in fruits. Samples were extracted by the improved QuEChERS method using acetonitrile as the solvent and purified on C18/PSA column. The detection limit of this developed HPLC method was 0.05 mg/kg and the linear correlation coefficient of standard curve was 0.9988. Recovery rates for imidaclprid in spiked samples at 0.05, 0.1 mg/kg and 0.20 mg/kg was in the range of 92%-102% with a relative standard deviation varying from 5% to 11%. Therefore, this developed method is characteristics of rapid determination, high accuracy and sensitivity so that it is suitable for the detection of imidaclprid residue in fruits.

fruits；HPLC；imidaclprid

O651；TS207.53

A

1002-6630(2011)06-0230-03

2010-05-07

何進林(1972—)，男，工程師，研究方向為化工礦產(chǎn)品和食品理化檢測。E-mail：87418262@qq.com