大劑量氯沙坦鉀對(duì)急進(jìn)性腎炎大鼠腎小管間質(zhì)纖維化的抑制機(jī)制研究

何平紅 查 艷 程世平 左 麗

1.貴州省人民醫(yī)院腎臟內(nèi)科，2.貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院免疫干細(xì)胞研究室，貴州 貴陽(yáng) 550002

近年循證醫(yī)學(xué)證實(shí)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β 1），結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）,和熱休克蛋白47（HSP47）為腎臟進(jìn)入纖維化的前驅(qū)因子。若能抑制這幾種因子的表達(dá)，則可以延緩腎臟進(jìn)入纖維化進(jìn)程，甚至逆轉(zhuǎn)其纖維化程度。我們通過(guò)建立急進(jìn)性腎炎大鼠模型，觀察大劑量氯沙坦鉀治療前后轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1），結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）,和熱休克蛋白47（HSP47）的表達(dá)，為血管緊張素Ⅱ1型受體拮抗劑在臨床上急進(jìn)性腎小球腎炎的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

取20只200g左右雄性成年大鼠，分為急進(jìn)性腎炎組(N=和15)和正常對(duì)照組(N=5)。急進(jìn)性腎炎組采用切除右側(cè)腎臟，并在第1周、2周靜注抗Thy1.1抗體（1.2mg/kg）造模，在第4周建立急進(jìn)性腎炎模型后分為：陽(yáng)性對(duì)照組（N=5），無(wú)藥物干預(yù)組；低劑量組(N=5）予氯沙坦鉀（20mg/L）；高劑量組，予氯沙坦鉀（80mg/ L）。分別在第4周、8周檢測(cè)各組大鼠的24小時(shí)尿蛋白、鼠尾血壓和血肌酐；4周末予急進(jìn)性腎炎大鼠行腎活檢，8周末將其殺死,取出左腎，留取4周末及8周末部分腎組織做PAS, Masson等組織學(xué)標(biāo)本。部分腎組織于液態(tài)下凝固保存-80℃，行免疫組化、Rt-PCR、in situ bybridization等檢測(cè)TGF-β1、CTGF、HSP47等的分子病理學(xué)表達(dá),觀察高劑量氯沙坦;低劑量氯沙坦及陽(yáng)性對(duì)照組組織學(xué)上腎小球，小管間質(zhì)纖維化的減少有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義。

2 結(jié) 果

2.1 收縮期血壓、24小時(shí)尿蛋白、血肌酐的比較 8周末高劑量組血壓明顯低于4周末血壓,[血壓分別為(101±5)mmHg、（135±6）mmHg](P<0.05)。8周末低劑量組尿蛋白較無(wú)藥物組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[尿蛋白分別為(108±20.5)mg/24h、(297±96.3)mg/ 24h](P<0.01)。8周末高劑量組尿蛋白較4周末顯著減少[尿蛋白分別為(29±6)mg/24h、(156±48.7)mg/ 24h],具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01).8周末高劑量組及低劑量組血肌酐較無(wú)藥物組明顯下降[血肌酐分別為(0.57±0.02) mg/dl、(0.64±0.03)mg/dl、(1.35± 0.21)mg/dl](P<0.05)。

2.2 腎臟病理形態(tài)學(xué)的比較 4周末腎小球內(nèi)部分硬化及腎小管間質(zhì)部分間質(zhì)纖維化, 8周末無(wú)藥物組成球性硬化,腎間質(zhì)小管纖維化明顯增多.8周末低劑量組腎小球硬化程度較4周末有所減輕,腎小管間質(zhì)纖維化程度有所逆轉(zhuǎn).8周末高劑量組腎小球硬化程度明顯減輕，腎小管間質(zhì)纖維化明顯減少,基本恢復(fù)正常.

2.3 腎小管間質(zhì)損傷評(píng)分比較 (沒(méi)有損傷為0分;<25%小管間質(zhì)損傷為1分;25-50%小管間質(zhì)損傷為2分;50-75%為3分;75-100%為4分)

表1 各組大鼠各項(xiàng)指標(biāo)比較

8周末高劑量組損傷評(píng)分明顯低于4周末及8周末低劑量組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05).而與無(wú)藥物組相比則具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01).8周末低劑量組損傷評(píng)分低于無(wú)藥物組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05).

2.4 腎臟TGF-β1,CTGF,HSP47的表達(dá)的比較

8周末高劑量組及低劑量組TGF-β1表達(dá)明顯低于4周末及無(wú)藥物組,具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01).8周末高劑量組CTGF表達(dá)明顯低于4周末及8周末低劑量組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05).8周末高劑量組及低劑量組CTGF表達(dá)明顯低于無(wú)藥物組,具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P <0.01).8周末高劑量組HSP47表達(dá)低于低劑量組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05).8周末高劑量組HSP47表達(dá)明顯低于4周末及無(wú)藥物組,具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0. 001).8周末低劑量組HSP47明顯低于無(wú)藥物組(P<0. 01).8周末高劑量組及低劑量組CTGF及HSP47較4周末及無(wú)藥物組明顯減少(P<0.01).8周末高劑量組及低劑量組TGF-β1較4周末及無(wú)藥物組明顯減少,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05).而8周末低劑氯沙坦鉀組CTGF和HSP47的表達(dá)僅明顯低于無(wú)藥物組，與第4周組比較無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

腎素-血管緊張素II-醛固酮系統(tǒng)對(duì)腎小官間質(zhì)的纖維化進(jìn)展有促進(jìn)作用.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β 1),連接組織生長(zhǎng)因子(CTGF),熱休克蛋白47(HSP47)是腎間質(zhì)小管纖維化的前驅(qū)因子.其在損傷的腎間質(zhì)小管中都有高表達(dá),可促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的增生,導(dǎo)致纖維化的進(jìn)展.近年來(lái)許多研究報(bào)道:血管緊張素-II(AT-II)可促進(jìn)腎小管TGF-β1, CTGF,HSP47的表達(dá).本研究通過(guò)大劑量血管緊張素-II 1型受體拮抗劑-氯沙坦鉀的投與發(fā)現(xiàn)在急進(jìn)性腎小球腎炎動(dòng)物模型中,低劑量及高劑量血管緊張素II受體拮抗劑可以明顯減少其24小時(shí)尿蛋白,可以使血肌酐水平明顯降低.可以使損傷腎組織中小管間質(zhì)纖維化明顯減輕.特別是高劑量血管緊張素II 1型受體拮抗劑能使腎小管間質(zhì)纖維化明顯逆轉(zhuǎn). 血管緊張素II受體拮抗劑可通過(guò)降低腎組織TGF-β1,CTGF,HSP47的表達(dá)從而減少細(xì)胞外基質(zhì)的生成,減慢纖維化進(jìn)程.且對(duì)腎小管間質(zhì)纖維化有明顯的逆轉(zhuǎn)作用.尤其是大劑量血管緊張素II受體拮抗劑逆轉(zhuǎn)纖維化作用更顯著.

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