敦煌前列寶對(duì)慢性前列腺炎模型大鼠前列腺組織中IL-8、TNF-α含量及病理組織形態(tài)的影響*

安耀榮,朱向東,丁文君,程暢和

(1.甘肅中醫(yī)學(xué)院,甘肅蘭州 730000;2.甘肅省中醫(yī)藥研究院,甘肅蘭州 730050)

慢性非細(xì)菌性前列腺炎是男性泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)病、多發(fā)病,好發(fā)于青壯年[1]。其病因及發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚,屬難治性疾病,臨床缺乏有效的治療方法和藥物。本研究所用敦煌前列寶以敦煌出土卷子《輔行訣臟腑用藥法要》中所載“大瀉腎湯”為基礎(chǔ),依據(jù)慢性前列腺炎臨床表現(xiàn)加減化裁而成,經(jīng)臨床反復(fù)運(yùn)用,療效肯定。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

SPF級(jí)雄性Wistar大鼠50只,3月齡,體質(zhì)量(240±20)g,由甘肅中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):SCXK(甘)2004-0006。全部實(shí)驗(yàn)操作均于SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行,設(shè)施使用合格證號(hào):SYXK(甘)2004-0006。

1.2 藥品與試劑

敦煌前列寶由茯苓、生甘草、制大黃、黃芩、赤芍、干姜、川牛膝、益母草按特定比例組成。藥材由甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中藥房提供,煎煮后過(guò)濾去渣,水浴濃縮濾液,使每毫升藥液含生藥 1.72 g。前列泰膠囊,陜西東泰制藥有限公司產(chǎn)品,批號(hào)為z20050003;消痣靈注射液,北京第四制藥廠產(chǎn)品,批號(hào)為 0710312,實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水配制成 25%消痣靈注射液,標(biāo)記備用;白細(xì)胞介素-8(IL-8)放免試劑盒,蘭州軍區(qū)總醫(yī)院安寧分院核檢驗(yàn)科提供,批號(hào)為S20063089;腫瘤壞死因子-α(TNF-α)放免試劑盒,中國(guó)原子能科學(xué)研究所提供,批號(hào)為S10940082。

1.3 主要儀器

Biofuge Fresco低溫高速離心機(jī),德國(guó)賀力氏(Heraeus)公司產(chǎn)品;BS124s電子分析天平,德國(guó)賽多利斯(Sartorius)公司產(chǎn)品;UV-2401 PC型紫外分光光度計(jì),日本島津公司產(chǎn)品;BH 2型光學(xué)顯微鏡,日本奧林巴斯公司產(chǎn)品;MDF-71超低溫冰箱,日本三洋公司產(chǎn)品;HH-601數(shù)顯恒溫水浴箱,江蘇省金壇市恒豐儀器廠產(chǎn)品。

1.4 動(dòng)物分組

動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng) 1周后,稱重,按體質(zhì)量編號(hào),并按隨機(jī)數(shù)字表法選取 8只為正常對(duì)照組,其余動(dòng)物造模后選取 40只稱重后按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型對(duì)照組,前列泰膠囊組,敦煌前列寶高、中、低劑量組 5組,每組 8只。

1.5 模型的建立與給藥

根據(jù)文獻(xiàn),將實(shí)驗(yàn)大鼠用10%水合氯醛(250～300μg/g)麻醉,無(wú)菌操作下取下腹部正中切口約1 cm,直達(dá)腹腔,提出膀胱及兩側(cè)精囊,暴露附屬于精囊內(nèi)側(cè)的前列腺背葉,注入前列腺雙側(cè)背葉 25%消痔靈注射液共0.2m L,縫合肌肉、皮膚。創(chuàng)口處噴慶大霉素注射液以防感染。造模期 7 d。造模成功后模型對(duì)照組、正常對(duì)照組按用藥組的方法,每日灌服蒸餾水;敦煌前列寶高、中、低劑量組予敦煌前列寶湯液 10μL/g灌胃,分別相當(dāng)于 17.2,8.6, 4.3 g/kg生藥;前列泰膠囊組予前列泰膠囊用蒸餾水配制成混懸液10μL/g灌胃,相當(dāng)于0.66 g/kg生藥。各組大鼠每日給藥 1次,連續(xù) 30 d。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)

于末次給藥后24 h,稱大鼠體重,頸椎脫臼法處死動(dòng)物,取出前列腺組織,剝離被膜及周?chē)窘M織,生理鹽水涮洗,濾紙吸干,電子天平稱重,計(jì)算各組大鼠前列腺指數(shù),即前列腺濕重/體質(zhì)量。將各組大鼠前列腺以中軸均分 2份,右側(cè)部分保存于 4%多聚甲醛/0.1M PBS(pH 7.2)固定液中,室溫下經(jīng)水洗、梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋等處理后,切片備用。HE染色制作病理切片,鏡下觀察前列腺局部病理變化。左半側(cè)組織勻漿,將勻漿液以3 000 r/min離心15min,將上清液分裝2個(gè)試管,按照試劑盒說(shuō)明書(shū)采用放免法檢測(cè)IL-8、TNF-α。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)(BZ_139_2138_999_2156_1045)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示,各組間比較采用單因素方差分析,各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的兩兩比較采用最小顯著性差異法LSD-t法。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 敦煌前列寶對(duì)慢性前列腺炎模型大鼠一般情況的影響

造模期間,正常對(duì)照組動(dòng)物毛色光澤,食欲良好,活動(dòng)自如,墊料干濕適中;模型組動(dòng)物逐漸顯現(xiàn)食欲減少,毛色略顯枯槁,自主活動(dòng)減少,墊料明顯偏濕,氣味腥臊。治療開(kāi)始后,前列寶各劑量組及前列泰膠囊組動(dòng)物經(jīng)處理狀態(tài)逐漸恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)期間,各組動(dòng)物均無(wú)死亡。

2.2 敦煌前列寶對(duì)慢性前列腺炎模型大鼠前列腺濕質(zhì)量及腺體指數(shù)水平的影響

模型對(duì)照組前列腺指數(shù)與正常對(duì)照組對(duì)比顯著增高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。進(jìn)行藥物干預(yù)后,前列泰膠囊組及敦煌前列寶高劑量組大鼠前列腺指數(shù)較模型對(duì)照組降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);敦煌前列寶中、低劑量組與模型對(duì)照組對(duì)比,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠前列腺濕質(zhì)量、體質(zhì)量及腺體指數(shù)水平對(duì)比 g,±s

表1 各組大鼠前列腺濕質(zhì)量、體質(zhì)量及腺體指數(shù)水平對(duì)比 g,±s

注:與正常對(duì)照組對(duì)比,*P＜0.05;與模型對(duì)照組對(duì)比,#P＜0.05。

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2.3 敦煌前列寶對(duì)慢性前列腺炎模型大鼠前列腺組織勻漿IL-8、TNF-α含量的影響

與正常對(duì)照組對(duì)比,模型對(duì)照組大鼠前列腺組織勻漿中細(xì)胞因子IL-8和TNF-α高表達(dá),差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療后,敦煌前列寶各組局部前列腺組織細(xì)胞因子IL-8和TNF-α表達(dá)顯著減輕,與模型對(duì)照組對(duì)比,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表 2。

表2 各組大鼠前列腺組織勻漿IL-8、TNF-α含量對(duì)比 ng·L-1,±s

表2 各組大鼠前列腺組織勻漿IL-8、TNF-α含量對(duì)比 ng·L-1,±s

注:與正常對(duì)照組對(duì)比,*P＜0.05;與模型對(duì)照組對(duì)比,#P＜0.05,##P＜0.01。

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2.4 敦煌前列寶對(duì)慢性前列腺炎模型大鼠前列腺組織病理學(xué)的影響

正常腺體組織柔軟,有光澤,彈性好,與周?chē)M織無(wú)粘連,易分離。模型對(duì)照組腺體明顯增大,與周?chē)M織粘連較重,部分組織表面可見(jiàn)暗紅色或灰白色片狀結(jié)節(jié)。前列泰膠囊組腺體中度增大,與周?chē)M織有粘連,彈性較差,部分組織表面呈暗紅色,其程度較模型組明顯減輕。敦煌前列寶各劑量組腺體與周?chē)M織也有輕度粘連,腺體較柔軟,表面有光澤,但腺體較正常組織有輕度的腫脹。見(jiàn)圖 1～6。

圖6 敦煌前列寶高劑量組 (HE染色,100×)

3 討 論

中醫(yī)典籍中雖無(wú)前列腺炎病名,但針對(duì)其病因病機(jī)已有了深入的論述。歷覽諸家之言,濕熱是其主要病因病機(jī),精濁瘀阻是主要病理變化,腎虛是后期疾病演變結(jié)果。敦煌前列寶是在出自敦煌出土卷子《輔行訣臟腑用藥法要》所載“大瀉腎湯”的基礎(chǔ)上,依據(jù)慢性前列腺炎腎虛為本,濕熱、血瘀為標(biāo)的病機(jī)本質(zhì),加減化裁而成。“大瀉腎湯”以茯苓為君,淡以利竅,甘以助陽(yáng);重用大黃為臣,以清泄?jié)駸帷⒒钛鲋?輔以黃芩,清熱燥濕、瀉火解毒,獨(dú)特之處,在蕩滌祛實(shí)之中,妙用芍藥護(hù)陰;佐以干姜溫陽(yáng)辛開(kāi),陰陽(yáng)并調(diào),氣化以行。敦煌前列寶方中又酌加川牛膝、益母草以奏活血化瘀、利尿通淋之效。大量研究提示,在前列腺液中測(cè)到IL-8即可考慮為前列腺的感染[2-3];TNF-α是主要的促纖維化性細(xì)胞因子,可刺激成纖維細(xì)胞增殖和分泌ECM增多,同時(shí)通過(guò)細(xì)胞因子調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的協(xié)同作用參與促進(jìn)纖維化;且刺激活的成纖維細(xì)胞一方面可自分泌TNF-α[4],另一方面可吸引白細(xì)胞向炎癥部位浸潤(rùn),進(jìn)一步分泌細(xì)胞因子。本研究采用傳統(tǒng)的前列腺內(nèi)注射消痣靈方法成功復(fù)制了慢性非細(xì)菌性前列腺炎動(dòng)物模型,并且以促炎細(xì)胞因子白介素IL-8和促纖維化性細(xì)胞因子(TNF-α)為觀察指標(biāo),研究結(jié)果表明敦煌前列寶可明顯改善實(shí)驗(yàn)性慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠前列腺組織的炎癥狀態(tài)及病理?yè)p傷,降低局部相關(guān)細(xì)胞因子IL-8和TNF-α的表達(dá),為其臨床治療慢性前列腺炎提供理論依據(jù),也為敦煌古方的臨床開(kāi)發(fā)提供基礎(chǔ)技術(shù)資料。

[1]王琦.王琦男科學(xué)[M].北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社,653.

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