薄荷飲片揮發(fā)油氣相色譜指紋圖譜研究＊

劉東輝，黃月純，張子龍，魏 剛

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510405; 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510405)

薄荷是我國(guó)傳統(tǒng)中藥，廣泛分布于北半球的溫帶地區(qū)，在我國(guó)廣布于南北各省。我國(guó)栽培的薄荷品種多屬東亞及熱帶亞洲的薄荷種 Metha haplocalyx Briq.[1]。薄荷藥材為唇形科植物薄荷Metha haplocalyx Briq.的地上干燥部分，味辛、性涼，口服用于風(fēng)熱感冒、風(fēng)溫初起、頭痛、目赤、喉痹、目瘡、風(fēng)疹、麻疹、胸脅脹悶[1]。2010年版《中國(guó)藥典(一部)》規(guī)定薄荷藥材揮發(fā)油含量不得少于0.80%(mL/g)，葉不得少于30%。薄荷飲片是薄荷藥材切段、低溫干燥所得，藥典規(guī)定揮發(fā)油含量不得少于0.40%(mL/g)。薄荷素油是薄荷新鮮莖和葉經(jīng)水蒸氣蒸餾、冷凍、部分脫腦加工提取的揮發(fā)油[2]，可直接使用，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定薄荷腦含量應(yīng)為28.0% ～40.0%，氣相色譜指紋圖譜規(guī)定檢出桉油精、(—)－薄荷酮、薄荷腦。目前，薄荷在醫(yī)藥、食品和化妝品等方面都有著廣泛的應(yīng)用。目前，由于氣相色譜(GC)－質(zhì)譜聯(lián)用儀未能普及，氣相色譜儀已廣泛應(yīng)用于揮發(fā)油的分析中。因此，筆者通過(guò)對(duì)多批次的市售薄荷飲片揮發(fā)油進(jìn)行GC指紋圖譜研究，以探討目前中藥市場(chǎng)薄荷飲片的質(zhì)量情況，為薄荷飲片質(zhì)量控制提供了一定的參考。

1 儀器與試藥

Agilent 6890型氣相色譜儀;FID檢測(cè)器。10批次薄荷飲片購(gòu)于多家藥材公司(見(jiàn)表1)，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院黃月純主任中藥師鑒定，均為唇形科薄荷 Mentha hapLocaLyx Briq.的干燥地上部分;薄荷腦對(duì)照品(批號(hào)為110728－200005，供含量測(cè)定用)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;乙醚為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液配制

取薄荷飲片適量，加8倍量水，按2005年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄揮發(fā)油測(cè)定甲法收集揮發(fā)油，取薄荷揮發(fā)油1 mL，加入乙醚5 mL使溶解。

表1 薄荷飲片來(lái)源

2.2 氣相色譜條件

色譜柱:HP－INNOWax毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm);進(jìn)樣口溫度:250 ℃;檢測(cè)器溫度:280 ℃;載氣:氮?dú)?流速:1.3 mL/min;升溫程序:柱始溫100℃，保持15 min，以8℃ /min的速率升到140℃，保持10 min，再以5℃ /min的速率升到200℃;進(jìn)樣量:1.0 μL;分流比:2 ∶1。

2.3 方法學(xué)考察

精密度試驗(yàn):取薄荷揮發(fā)油進(jìn)樣分析，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果主要特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積基本一致，RSD均在3%以內(nèi)，表明精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取薄荷揮發(fā)油進(jìn)樣分析，分別在 0，2，4，6，8，10 h時(shí)進(jìn)樣6次。結(jié)果主要特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積基本一致，RSD均在3%以內(nèi)，表明10 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性較好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批次薄荷飲片5份，分別提取揮發(fā)油后進(jìn)樣分析。結(jié)果主要特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積基本一致，RSD均在3%以內(nèi)，表明方法重復(fù)性良好。

2.4 指紋圖譜建立與分析

共有峰確定:根據(jù)10批樣品(編號(hào)S11樣品差異大，未作統(tǒng)計(jì))分析結(jié)果，薄荷標(biāo)示出16個(gè)共有峰，計(jì)算各共有峰的保留時(shí)間與峰面積百分含量，結(jié)果見(jiàn)表2。經(jīng)對(duì)照品對(duì)照，鑒別5號(hào)峰為薄荷腦。

相似度分析:采用國(guó)家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件(2004A版)計(jì)算相似度。以10批樣品指紋圖譜生成的共有模式為對(duì)照，計(jì)算各批樣品相似度，結(jié)果見(jiàn)表3。10批樣品GC指紋圖譜重疊圖及共有模式見(jiàn)圖1及圖2，樣品S11的指紋圖譜見(jiàn)圖3。

表2 10批樣品薄荷揮發(fā)油GC指紋圖譜分析結(jié)果

表3 10批樣品薄荷揮發(fā)油GC指紋圖譜相似度結(jié)果

圖1 10批樣品薄荷揮發(fā)油GC指紋圖譜重疊圖

圖2 10批樣品薄荷揮發(fā)油GC指紋圖譜共有模式

圖3 薄荷(S11)揮發(fā)油GC指紋圖譜

3 討論

國(guó)內(nèi)對(duì)薄荷揮發(fā)油化學(xué)成分已有較多的研究報(bào)道，其主要成分為薄荷腦(mentho1)，相對(duì)含量達(dá)62% ～87%，還含(—)－薄荷酮(menthone)、異薄荷酮(isomenthone)、胡薄荷酮(pulegone)、胡椒酮(piperitone)、胡椒烯酮(piperitenone)，此外還含多種揮發(fā)油成分[3]。薄荷揮發(fā)油的鑒別主要采用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC－MS)[4－6]，薄荷腦、薄荷酮含量主要采用氣相色譜法(GC)測(cè)定[7－8]。薄荷揮發(fā)油所鑒別的成分及相對(duì)含量差異相當(dāng)大，特別是薄荷腦的相對(duì)含量差異極大[4－6]。有研究認(rèn)為，是野生薄荷種群的差異所致[4];分析的薄荷樣品有鮮品[6－7]與干品[4]的不同;揮發(fā)油提取方法也有不同，研究的樣品批次一般較少[5－6]，代表性略顯不足。作為傳統(tǒng)用藥方式，復(fù)方煎劑采用薄荷飲片后下的方法，薄荷煎劑中薄荷腦含量最高，其次是(—)－薄荷酮[8]。含薄荷制劑一般采用水蒸氣蒸餾提取薄荷飲片揮發(fā)油后加入。因此，研究水蒸氣蒸餾提取的薄荷飲片揮發(fā)油指紋圖譜，對(duì)于薄荷飲片的質(zhì)量控制、臨床應(yīng)用均較大的指導(dǎo)意義。

測(cè)定結(jié)果表明，10批樣品薄荷揮發(fā)油的GC色譜主要特征峰有13個(gè)，其峰面積百分含量為(92.20±7.38)%。經(jīng)與薄荷腦對(duì)照品對(duì)照，5號(hào)峰為薄荷腦峰。標(biāo)出的13個(gè)特征峰可分為4區(qū)，Ⅰ區(qū)為1～3號(hào)峰，不同批次樣品峰面積百分含量相對(duì)較穩(wěn)定;Ⅱ區(qū)為4～5號(hào)峰，5號(hào)峰(薄荷腦)為第一大峰，峰面積百分含量為(65.78±13.90)%;Ⅲ區(qū)為6～10號(hào)峰，不同批次樣品的峰面積百分含量差異較大;Ⅳ為11～13號(hào)峰，不同批次樣品的峰面積百分含量差異也較大。相似度分析表明，不同批次樣品的相似度較高，大于0.96，其中樣品6的相似度相對(duì)較低，主要原因是5號(hào)峰(薄荷腦)的峰面積百分含量較低。經(jīng)飲片性狀分析，該樣品的葉所占比例較低，揮發(fā)油含量也較低。

本研究分析了11批薄荷飲片，發(fā)現(xiàn)有1批樣品(S11)的特征圖譜差異相對(duì)較大，在保留時(shí)間20 min及21 min附近出現(xiàn)2個(gè)大的特征峰，1～5號(hào)峰的相對(duì)百分含量比其他樣品明顯較小。此樣品是否與桂新等[4]報(bào)道的種群不同所造成有關(guān)，還有待于進(jìn)一步研究。目前我國(guó)栽培的薄荷藥材飲片揮發(fā)油指紋圖譜的穩(wěn)定性究竟如何，其特征指紋峰的相對(duì)含量能否維持在一定范圍內(nèi)，還有待于收集更多的樣品進(jìn)行分析，方能得出較客觀的結(jié)論。

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