宮頸鱗癌組織中MMP-2、MMP-9的表達變化及意義

劉麗利,南云澤,林貞花,金仁順

(1揚州市婦幼保健院,江蘇揚州 225002;2延邊大學附屬醫院;3延邊大學醫學院)

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一,浸潤和轉移是宮頸癌患者晚期主要死亡原因之一。近年研究表明,腫瘤細胞與細胞外基質的相互作用,在腫瘤浸潤、轉移中至關重要。腫瘤細胞的浸潤與轉移發生在基底膜降解的基礎上,在降解過程中基質金屬蛋白酶(MMP)-2、MMP-9起著非常重要的作用[1,2],然而它們與宮頸癌的關系報道并不一致。2001年 7月 ～2009年 7月,我們應用免疫組化技術檢測了MMP-2、MMP-9在宮頸鱗癌組織中的表達情況,并探討其與宮頸癌生物學行為的關系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 標本來自于延邊大學附屬醫院婦產科住院手術切除的組織,其中宮頸鱗癌 46例(A組),患者年齡22～59歲,中位年齡42.5歲;FIGO (2000年)[3]分期Ⅰ期 35例,Ⅱ期 11例;病理類型為角化型 16例,非角化型 30例;有淋巴結轉移 19例,無轉移27例。宮頸原位癌34例(B組),患者年齡 25～64歲,中位年齡 39.5歲。另選取 20例同期因子宮肌瘤行子宮切除的正常宮頸標本作為對照(C組),患者年齡 25～64歲,中位年齡 41歲。全部病例在術前均未接受放療、化療。

1.2 MMP-2、MMP-9檢測方法 所有標本均經10%甲醛固定,常規石蠟包埋,作 4μm厚連續切片。采用免疫組織化學SP法檢測,嚴格按試劑盒說明書進行,DAB顯色,蘇木素復染,封片后用光學顯微鏡觀察。同時設置陰性對照(用PBS代替一抗),陽性對照用已知陽性切片。結果判定：MMP-2、MMP-9蛋白陽性細胞為細胞質內呈棕黃色顆粒樣物質。用低倍和高倍鏡觀察全片,按陽性細胞所占百分比及著色程度進行結果判定[4]。按陽性細胞比例判定：陽性細胞≤10%1分,10%～50%2分,＞50%3分;按染色程度判定：陰性為 0分,淡黃色1分,中度黃色 2分,棕黃色 3分。兩項相乘 ＜3為陰性,≥3為陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。組間比較采用χ2檢驗,相關性分析采用Spearman等級相關分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組MMP-2、MMP-9表達比較 A、B、C組MMP-2陽性率分別為78.3%(36/46)、50.0%(17/ 34)、25.0%(5/20),A組與B、C組比較,P均 ＜0.01;B、C組間比較,P＞0.05。A、B、C組MMP-9陽性率分別為71.7%(33/46)、70.6%(24/34)、25.0%(5/20),A、B組與C組比較,P均＜0.01; A、B組間比較,P＞0.05。

2.2 MMP-2、MMP-9表達與宮頸鱗癌臨床病理參數的關系 見表1。MMP-2、MMP-9蛋白表達與宮頸鱗癌淋巴結轉移有關(P均＜0.05)。

2.3 宮頸鱗癌組織中MMP-2、MMP-9表達的關系Spearman等級相關分析結果顯示,MMP-2和MMP-9在宮頸鱗癌中的表達呈正相關(rs=0.372,P＜0.05)

表1 MMP-2、M MP-9表達與宮頸鱗癌臨床病理參數的關系

3 討論

MMP-2和MMP-9可降解Ⅳ型膠原和其他細胞外基質成分,促進惡性腫瘤侵襲和轉移。研究表明,多種惡性腫瘤MMP-2和(或)MMP-9表達增加,活性增強,并且其表達量及活性強弱與惡性腫瘤的侵襲能力密切相關。有關宮頸癌組織MMP-2和MMP-9表達狀態的報道并不完全一致。Arguello-Ramirez等[5]將慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ和宮頸鱗癌組織在體外培養 48 h后,前三者總計分泌到培養介質中的MMP-2前體和活化的MMP-2分別為190.5 DU和13.5 DU,其中,活化的MMP-2與宮頸癌組織分泌量(6.0 DU)無明顯區別,而MMP-2前體分泌量明顯高于宮頸癌組織分泌量(18 DU)。宮頸癌組織分泌的MMP-9,無論是活化的,還是非活化的均明顯高于慢性宮頸炎和CIN,故認為在宮頸癌演進過程中MMP-2作用可能并不重要。Giraudo等[6]用RT-PCR檢測發現,CINⅢ和鱗癌組織中MMP-9的表達較CINⅠ/Ⅱ組織中顯著升高,且發現MMP-9與血管內皮生長因子(VEGF)活性相關,提示MMP-9與腫瘤血管生成有關。

本研究發現,在正常宮頸上皮、原位癌和宮頸鱗癌的組織中MMP-2、MMP-9的陽性表達率依次增高,且差異有顯著性,提示MMP-2、MMP-9蛋白表達可能與宮頸癌的發展過程有關。MMP-9多呈彌散性分布,而MMP-2則多為局灶性分布,尤其在癌巢邊緣表達較強,提示其對周圍基質成分的降解能力增加;同時檢測MMP-9在原位癌及宮頸鱗癌表達均上升,但無統計學差異。可推測MMP-9在原位癌中的表達上調在宮頸鱗癌的形成過程中是關鍵事件,原位癌在細胞形態和表現非正常蛋白上與浸潤性腫瘤相似,MMP-2和MMP-9的表達與宮頸癌的侵襲性行為密不可分。

宮頸鱗癌的轉移方式主要是淋巴轉移,臨床上也是以有無淋巴結的轉移來判斷預后和指導臨床治療。何金英等[7～12]研究認為,宮頸鱗癌中 MMP-9的表達與病理分級、盆腔淋巴結轉移有關,而與臨床分期、病理類型無關。本研究結果表明,MMP-2、MMP-9在淋巴結轉移陽性組較陰性組的陽性表達率高,差異有統計學意義,可推測MMP-2、MMP-9在宮頸鱗癌的淋巴結轉移中起促進作用。本研究發現MMP-2和MMP-9呈正相關,提示二者協同作用加強了宮頸癌細胞的浸潤和轉移能力。

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