初篩實驗室HIV抗體檢測的質量控制及影響因素分析

張潤林

（山西省太原市陽曲縣疾病預防控制中心，山西 太原 030100）

艾滋病是一種危害人類生命健康的傳染病，目前已成為全球關注的公共衛生和社會問題，要了解和掌握HIV的感染情況，關鍵就是實驗室的檢測技術，新的監測和檢測需求在不斷增加，而HIV抗體的檢測可作為對HIV感染者診斷和監測的實驗室依據，也是目前獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）診斷中最常用的方法，因此，提高實驗室檢測的準確性，減少假陽性和假陰性反應的發生，對診斷艾滋病十分重要，應用HIV抗體質控血清是對艾滋病初篩實驗室進行全面質量評價的重要手段，現將本實驗室進行HIV室內質量控制的程序介紹如下。

1 試劑來源

1.1 外部對照質控血清

衛生部臨床檢驗中心試劑部提供的GBW（E）090050抗HIV 2NCU/mL并嚴格按照《全國艾滋病檢測技術規范》2009年修訂版[1]制備或購買弱陽性對照血清（該試劑盒臨界值的2～3倍）、分裝保存。

1.2 HIV診斷試劑盒

由省級HIV實驗室提供，由珠海麗珠試劑股份有限公司生產的試劑，所用試劑盒及內部對照質控血清均在有效期內使用。

2 實驗室設備校準

2.1 北京普朗新技術有限公司制造的全自動ZMX-988B酶標洗板機

本實驗室根據計量認證質量手冊的要求，經省技術監督監測中心定期校準（每年至少1次）。嚴格按照作業指導書操作規程進行自校準檢查。每個工作日應檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現象，定期（每月至少1次）檢查洗滌時各孔是否與相應的沖洗頭對位良好，負壓是否符合規定要求，并保留記錄。

2.2 上海博訊實業有限公司生產的SSW型電熱恒溫水槽

調節并控制溫度在（37±2）℃。每個工作日檢查記錄水浴箱溫度，并做好記錄。使用經過計量部門校準合格的溫度計測量。

2.3 BIORAD Model 680型酶標儀、上海精益醫學儀器廠生產的可調微量移液器

均經省技術監督監測中心檢定合格。酶標儀根據儀器內具有的校準程序或使用校準板，對濾光片的精密度進行校準，并在檢定周期1年內使用，每個工作日核對濾光片波長，對其檢測數據進行不確定度分析，從而確保其具有良好的重復性和線性范圍。移液器嚴格按照質量手冊中作業指導書的操作規程定期進行校準，每年至少校準一次，發現異常情況應隨時進行校準，其精密度應在廠家說明書規定的范圍內。

3 操 作

3.1 嚴格按照作業指導書的操作規程進行操作。加入樣品量要準確，不得混入血細胞，同時按照試劑說明書操作步驟每板設空白對照1孔（不加任何液體）、陰性對照3空、陽性對照2孔，質控弱陽性對照血清1孔；嚴格掌握溫育時間，以免影響結果的精密度和準確性；置自動洗板機上洗滌，洗板時應保證洗板機管路暢通，加液量均勻；不得隨意加減洗板次數（洗板次數少出現假陽性，洗板次數多又會使臨界弱陽性變成陰性而漏檢）；拍板（以墊紙不濕為宜）；在規定的時間內置于酶標儀讀數，雙波長450/630nm測OD值。檢測結果正常情況下陽性對照 OD值≥0.8，陰性對照OD值≤0.12，若實驗結果不符合這些要求，就應檢查原因并重新進行檢測。不同批號試劑不得混用。

3.2 每一次實驗必須使用室內質控品，以便監控實驗的重復性。對于我們基層HIV初篩實驗室來說，由于不是每天進行HIV抗體的檢測，對外部質控血清在常規條件下連續檢測20次繪制出質控圖后才能進入質控狀態有很大難度，因此，我們采用了“即刻法”質控，即在對同一外部質控血清連續測定3次后，即可對第3次測定結果進行質控，從而來保證檢驗結果的準確性和可靠性。

3.3 室內質控是實驗室內部對所有影響檢測質量的各個環節進行系統控制，以提高日常檢測工作前后的一致性。該質量控制主要通過質控圖來實現，在ELISA法檢測HIV試驗中，從第3次開始就可以對每次測定的外部質控血清值進行統計，算出每次的SI上限值與SI下限值，查SI值表[1]，當SI上限值與SI下限值＜N2s時，表示該數據處于控制范圍之內，結果可靠可以繼續測定；當SI上限值與SI下限值處于N2s與N3s之間時，表示該數據處于2s～3s范圍，處于“告警”狀態；當SI上限值與SI下限有一值＞N3s時，表示該數據已在3s范圍之外，屬于“失控”狀態，應重新測定該批樣品。實驗人員在實驗中出現告警或失控狀態時，應予注意，并及時分析原始數據及對具體檢驗過程進行回顧性分析，可能是系統誤差、隨機誤差或外部質控品穩定性下降所致。查找出問題發生的原因，找出解除問題的方法后再繼續進行測定。

4 影響因素分析

4.1 “即刻法”室內質控是適宜于基層初篩HIV實驗室使用的一種較好的室內質量控制方法。為更好地做好室內質量控制，最好有專人負責質量控制，制定質量保證文件；篩查試劑必須經食品藥品監督管理局注冊批準、批檢合格在有效期內的試劑，建議長期和穩定地使用一種敏感性和特異性高的試劑盒，如更換不同廠家的試劑盒或改用新批號試劑盒應重新制作質控圖，且使用新批號或不同廠家的試劑盒必須在質控圖上注明使用日期。另外，更換檢測人員及更換包裝的外部對照質控物必須重新繪制質控圖。每次測定時，試劑盒及外部質控血清從冰箱取出后均應在室溫下（18～23℃）平衡30min再使用；購買來的外部對照質控血清不能反復凍融，應按實際實驗用量分裝、分類、標記、封口、-20℃凍存于自動除霜冰箱中。一旦溶解，應儲存于2～8℃的冰箱內，并且每次使用前應充分混勻。

4.2 室內質量控制是通過使用內部對照質控血清和外部對照質控血清來進行質量控制。試劑盒內部對照用于判斷每次實驗的有效性，內部對照結果無效，必須重新試驗。質控弱陽性對照血清是為了監控檢測的重復性和穩定性而設置的，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。每一次實驗都必須使用外部對照質控血清，并對檢測結果進行分析，質控物的管間或瓶間變異必須小于監測系統預期的變異（cv＜20%），確定其在允許范圍內，方可發出標本檢測報告，這樣做可使檢測者及時分析質量控制圖中出現的各種原因，以采取相應措施。4.3 出現以下問題，存在質量隱患，應引起重視：內盒或試劑盒的物理損傷；在單包裝內存在混雜物質；標簽出現錯誤、缺失或字跡模糊[特別是產品名稱或出產廠家名稱，批號和貨號，失效期和（或）生產日期]；泄露或污染；不適宜的存放條件等。

4.4 引起室內質控失控的原因很多。如儀器設備未經檢定、校準或測試、使用新批號和不同廠家的試劑及試劑接近失效期、購買不同廠家的外部質控品及質控標準血清反復凍融、孵育時間和溫度不準確、更換新的檢驗人員等，此時要及時查找原因并予以糾正。

4.5 通常把臨界值上下10%的范圍定為檢測結果灰區。對于檢測過程中出現的灰區標本均應進行重復測試，以減少假陽性和假陰性結果的出現，并對檢驗結果和過程進行記錄存檔。

4.6 質量控制是監視全過程，排除誤差，防止變化，維持標準化現狀的一個管理過程。要做好實驗室的質量保證，單純靠室內質控是不行的，還要有行政支持，保證實驗室負責人和主要技術人員隊伍的穩定，檢測技術人員需經上崗培訓和在崗持續培訓。還要建立健全實驗室的各項規章制度，掌握質量控制知識，保證標準品的質量等全過程的質量控制，并參加艾滋病確認中心實驗室職能工作考核和能力驗證，從而提高檢驗質量。

[1]中國疾病預防控制中心.全國艾滋病檢測技術規范(2009年修訂版)[S].2009.